性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)人神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因小鼠唾液中蛋白分泌的影響

廖莎，朱慶春，吳珍芳，李紫聰，曾芳,2

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性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)人神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因小鼠唾液中蛋白分泌的影響

廖莎1，朱慶春1，吳珍芳1，李紫聰1，曾芳1,2

1 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642 2 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 海洋學(xué)院，廣東 廣州 510642

神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (Nerve growth factor，NGF) 是一種能促進(jìn)神經(jīng)元發(fā)育、分化、再生的蛋白。為高效生產(chǎn)藥效更佳的人源NGF (hNGF) 藥物，最近，筆者實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建出唾液腺特異表達(dá)hNGF的轉(zhuǎn)基因小鼠，并從該轉(zhuǎn)基因小鼠唾液中純化獲得具有高生物學(xué)活性的hNGF蛋白。為了選擇性別和日齡最適宜的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠用于收集純化hNGF蛋白，文中比較了28日齡 (性成熟前) 雄性、雌性，63日齡 (性成熟后) 雄性、雌性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠，共4組轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液量、唾液總蛋白量、唾液鼠源NGF (mNGF) 蛋白量和唾液hNGF蛋白量等指標(biāo)。結(jié)果顯示，63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液量、唾液總蛋白量、唾液mNGF蛋白量和唾液hNGF蛋白量顯著高于28日齡同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠，且63日齡的雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF蛋白量顯著高于同一日齡的雌性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠；在4組小鼠中，63日齡的雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF含量最高，比28日齡雌性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠高出約46倍，最適宜用于收集唾液并從中純化hNGF。

轉(zhuǎn)基因小鼠，性別，日齡，人神經(jīng)生長(zhǎng)因子，唾液

神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (Nerve growth factor，NGF) 是一種具有神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)突起生長(zhǎng)的神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子。它對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的各種生理過程具有重要的調(diào)控作用。NGF在1952年被首次發(fā)現(xiàn)[1]，后續(xù)研究證明，NGF對(duì)治療各種神經(jīng)損傷或退行性疾病具有明顯的效果[2]。由于對(duì)NGF的發(fā)現(xiàn)和研究作出了巨大的貢獻(xiàn)，生物學(xué)家Cohen和Levi-Montalcini獲得了1986年的諾貝爾醫(yī)學(xué)生理獎(jiǎng)[3-4]。從2002年至今，中國(guó)政府已批準(zhǔn)4種NGF藥物 (商品名分別為恩經(jīng)復(fù)、蘇肽生、金路捷和麗康樂) 上市用于治療人類神經(jīng)相關(guān)疾病，該4種藥物均提取自小鼠唾液腺，屬于鼠源NGF (mNGF)，且該類藥物目前的價(jià)格非常昂貴，約1萬元/mg。雖然mNGF與人NGF (hNGF) 同源性高[5]，且對(duì)人類神經(jīng)相關(guān)疾病具有確實(shí)療效，但mNGF用于人類疾病治療仍然存在免疫原性問題[6]。且已有研究表明，mNGF活性比hNGF低[7]，所以非常有必要研發(fā)hNGF藥物。

迄今為止，有不少研究嘗試?yán)酶鞣N方法來制備hNGF，如利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)[8-9]、酵母表達(dá)系統(tǒng)[10]、昆蟲[11-12]或哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13-14]表達(dá)系統(tǒng)等，但因?yàn)樯鲜霰磉_(dá)系統(tǒng)存在翻譯后修飾缺陷、產(chǎn)量低、成本高等問題而達(dá)不到理想效果。還有研究利用轉(zhuǎn)基因兔乳腺作生物反應(yīng)器制備hNGF[15]。但乳腺生物反應(yīng)器存在性別和表達(dá)時(shí)期的限制，即必須在雌性動(dòng)物的泌乳期才能表達(dá)目的蛋白，且乳中蛋白量及種類繁多，不利于純化目的蛋白。許多動(dòng)物在唾液腺中高水平表達(dá)高活性的內(nèi)源NGF，這說明，動(dòng)物唾液腺是NGF蛋白合成的理想場(chǎng)所。此外，以動(dòng)物唾液腺作生物反應(yīng)器表達(dá)外源蛋白還不受性別和表達(dá)時(shí)期的限制，且唾液中蛋白量及種類較少，有利于外源蛋白純化。基于動(dòng)物唾液腺的以上優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)室曾芳等[16]已生產(chǎn)出唾液腺特異表達(dá)hNGF的轉(zhuǎn)基因小鼠，并從其唾液中純化獲得了比mNGF有更高生物活性的hNGF蛋白，但該轉(zhuǎn)基因小鼠的hNGF蛋白平均產(chǎn)量仍有待提高。

已有研究表明，小鼠唾液中的NGF蛋白分泌量存在明顯的性別差異，雄性小鼠唾液腺中NGF的mRNA表達(dá)量顯著高于雌性小鼠，且雄性小鼠唾液中的NGF蛋白量顯著高于雌性小鼠，同時(shí)研究數(shù)據(jù)顯示，成年 (56日齡以上) 雄鼠下頜唾液中NGF濃度顯著高于幼年 (30日齡左右) 雄性小鼠[17-18]。另有研究表明，小鼠子宮組織中的NGF表達(dá)量隨日齡增加而增加，在30日齡達(dá)到峰值，成年后維持在一定水平[19]；陸璐等[20]研究發(fā)現(xiàn)新生小鼠頜下腺不表達(dá)NGF，雄性小鼠2周齡左右才檢測(cè)到NGF的表達(dá)信號(hào)，此后隨日齡的增加而增加，1月齡左右時(shí)雄性小鼠頜下腺中NGF的mRNA迅速增多，到2月齡時(shí)NGF的mRNA持續(xù)保持較高水平轉(zhuǎn)錄。這些研究說明性別和日齡會(huì)影響小鼠NGF的表達(dá)量。

為了選擇合適日齡及合適性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠用于高效收集唾液并純化hNGF蛋白，文中研究了性別和日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液蛋白分泌的影響。為后續(xù)從轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中高效生產(chǎn)hNGF藥物提供有利參考。

1 材料與方法

1.1 轉(zhuǎn)基因小鼠的配種擴(kuò)繁

8周齡的C57BL-6品系野生型雌性小鼠購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)5 d度過適應(yīng)期后，每只注射7.5 IU的PMSG激素 (購(gòu)自寧波第二激素廠)，48 h后每只注射7.5 IU的HCG激素 (購(gòu)自寧波第二激素廠)[21]，注射后與10周齡的C57BL-6品系的轉(zhuǎn)hNGF基因雜合子雄性小鼠[16]按2∶1合籠，次日清晨檢查陰道栓，將有栓雌鼠挑出分籠待產(chǎn)。

1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠的綠色熒光表達(dá)鑒定

新生小鼠在出生后第3日齡進(jìn)行綠色熒光表達(dá)鑒定。在黑暗環(huán)境中用熒光燈 (BLS公司，中國(guó)) 照射小鼠，通過濾光眼鏡觀察，在熒光燈照射下發(fā)出綠色熒光的則為轉(zhuǎn)基因小鼠。將轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠放在一起，在自然光下和藍(lán)色熒光燈照射下分別用不加濾光片和加了濾光片的相機(jī)拍攝照片。

1.3 轉(zhuǎn)基因小鼠的PCR鑒定

小鼠在25日齡打耳標(biāo)后剪取長(zhǎng)度約為5 mm的尾巴組織置于去DNA酶的1.5 mL離心管中，使用Omega公司的組織DNA提取試劑盒，按照其說明書進(jìn)行小鼠尾樣DNA抽提，抽提完成后，用微量核酸濃度儀 (Nanodrop 2000，Thermo，美國(guó)) 測(cè)定DNA樣品濃度，放于?20 ℃冰箱保存。用PCR對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因型檢測(cè) (PCR儀為美國(guó)Life公司)。hNGF基因擴(kuò)增引物為5′-AGC TGTGGAAGCTGGTGTTCCTG-3′、5′-CAGCTTC ACGGGGAGGCTG-3′，內(nèi)參基因GAPDH的擴(kuò)增引物為5′-CTCCCACTCTTCCACCTTCG-3′、5′-C CACCACCCTGTTGCTGTAG-3′ (設(shè)計(jì)軟件：Primer Premier 6.0，由北京華大基因公司合成)，產(chǎn)物長(zhǎng)度分別為290 bp和110 bp。轉(zhuǎn)基因小鼠DNA可以擴(kuò)增出內(nèi)參基因片段和hNGF基因片段，而野生型小鼠DNA只能擴(kuò)增出內(nèi)參基因片段。PCR試劑購(gòu)自廣州東盛生物科技公司。

1.4 小鼠唾液采集

根據(jù)日齡、性別及基因型將小鼠分成4組，分別為28日齡轉(zhuǎn)基因雄性、28日齡轉(zhuǎn)基因雌性、63日齡轉(zhuǎn)基因雄性、63日齡轉(zhuǎn)基因雌性，每組4只。每只小鼠腹腔共注射氯胺酮 (劑量按每克體重25 μg) 和甲苯噻嗪 (劑量按每克體重1.1 μg) 進(jìn)行麻醉[16]，麻醉后用移液槍吸取 (每只小鼠吸取20 min) 小鼠口腔分泌的唾液放入離心管中[22]，放?80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 小鼠唾液總蛋白檢測(cè)

將采集好的小鼠唾液適當(dāng)稀釋，使用康為世紀(jì)生物科技公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒，按照其說明書對(duì)唾液中的總蛋白濃度進(jìn)行測(cè)定。用酶標(biāo)儀 (美國(guó)伯騰儀器有限公司，型號(hào)：Synergy H1) 在540–590 nm范圍內(nèi)測(cè)定BSA標(biāo)準(zhǔn)品和每個(gè)樣品的吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算唾液樣品中的總蛋白濃度。

1.6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (ELISA) 檢測(cè)分析

將采集好的小鼠唾液適當(dāng)稀釋后，使用小鼠β-NGF ELISA試劑盒和人β-NGF ELISA試劑盒 (均購(gòu)自武漢尹艾博科技有限公司) 分別對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠唾液中mNGF蛋白和hNGF蛋白濃度進(jìn)行測(cè)定。用酶標(biāo)儀 (美國(guó)伯騰儀器有限公司，型號(hào)：Synergy H1) 測(cè)定樣品吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算唾液樣品中的mNGF蛋白和hNGF蛋白濃度。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

在Excel表中計(jì)算出蛋白濃度及其標(biāo)準(zhǔn)差等數(shù)據(jù)，并繪制柱狀圖，利用IBM SPSS Statistics 21進(jìn)行顯著性分析，比較同一性別不同日齡以及相同日齡、不同性別轉(zhuǎn)基因小鼠的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠綠色熒光表達(dá)及PCR鑒定

熒光燈照射檢測(cè)顯示，轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠有明顯熒光表達(dá)，而野生型小鼠則無熒光表達(dá) (圖1A)；PCR檢測(cè)顯示，轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠基因組中攜帶hNGF基因，而野生型小鼠基因組中無hNGF基因 (圖1B)。熒光燈照射檢測(cè)結(jié)果與PCR檢測(cè)結(jié)果完全一致。

2.2 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液分泌量的影響

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液分泌量差異不顯著，且63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液分泌量也無顯著差異；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液分泌量都極顯著高于28日齡的同一性別轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠 (圖2)。

2.3 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中總蛋白分泌的影響

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白濃度之間差異不顯著，63日齡轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白濃度之間差異也不顯著，即同一日齡不同性別的轉(zhuǎn)hNGF小鼠唾液中總蛋白濃度均無顯著差異；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白濃度都極顯著高于28日齡中同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠 (圖3A)。

圖1 轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠鑒定(A：轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠熒光表達(dá)鑒定；B：轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠PCR鑒定)

圖2 性別和日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液分泌量的影響

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白量之間差異不顯著，63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白量之間差異也不顯著，即同一日齡的不同性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中總蛋白量均無顯著差異；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中總蛋白量都極顯著高于28日齡的同一性別轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠 (圖3B)。

2.4 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中mNGF蛋白分泌的影響

轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中mNGF蛋白的分泌情況與同日齡、同性別的野生型(WT)小鼠唾液中的mNGF蛋白分泌情況差異均不顯著 (圖4)。

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中mNGF蛋白濃度差異不顯著，但63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中mNGF蛋白濃度極顯著高于63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中mNGF蛋白濃度極顯著高于28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠，但63日齡與28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠唾液中mNGF蛋白濃度之間差異不顯著；不同日齡且同一性別的野生型小鼠中，63日齡小鼠唾液mNGF蛋白濃度均高于28日齡，但雄性差異不顯著，而雌性差異極顯著；同一日齡不同性別的野生型小鼠中，雄鼠唾液mNGF蛋白濃度均高于雌鼠，但在63日齡時(shí)差異顯著(圖4A)。

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中mNGF蛋白相對(duì)濃度無顯著差異，但63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中mNGF蛋白相對(duì)濃度極顯著高于63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠；63日齡與28日齡同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中mNGF蛋白相對(duì)濃度差異不顯著；同日齡不同性別的野生型小鼠中，雄性唾液mNGF相對(duì)濃度均大于雌性，但在63日齡差異顯著；而同一性別不同日齡的野生型小鼠唾液mNGF蛋白相對(duì)濃度差異均不顯著 (圖4B)。

28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中mNGF蛋白含量無顯著差異，但63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中mNGF蛋白含量極顯著高于63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠與雌鼠唾液中mNGF蛋白含量極顯著高于28日齡的同一性別轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠；同一日齡不同性別的野生型小鼠中，雄性唾液mNGF蛋白含量均高于雌性，但在63日齡時(shí)差異顯著；同一性別不同日齡的野生型小鼠中，63日齡小鼠唾液mNGF蛋白含量均極顯著地高于28日齡小鼠唾液mNGF蛋白含量 (圖4C)。

2.5 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中hNGF蛋白分泌的影響

28日齡和63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中hNGF蛋白濃度都顯著高于同一日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中hNGF蛋白濃度顯著高于28日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠；28日齡和63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠唾液中hNGF蛋白濃度無顯著差異 (圖5A)。

28日齡和63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中hNGF蛋白相對(duì)濃度都高于同一日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠，差異顯著；28日齡與63日齡同一性別轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中hNGF蛋白相對(duì)濃度差異不顯著 (圖5B)。

28日齡和63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠唾液中hNGF蛋白含量都高于同一日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雌鼠，差異顯著；63日齡的轉(zhuǎn)hNGF基因雄鼠和雌鼠唾液中hNGF蛋白含量都高于28日齡的同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠，差異極顯著(圖5C)。

圖5 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中hNGF蛋白分泌的影響(A：轉(zhuǎn)基因小鼠唾液中hNGF蛋白的濃度；B：轉(zhuǎn)基因小鼠唾液中hNGF蛋白相對(duì)濃度；C：轉(zhuǎn)基因小鼠唾液中hNGF蛋白的含量)

3 討論

本研究結(jié)果顯示，性別對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠在28和63日齡分泌的唾液量、唾液總蛋白濃度、唾液總蛋白量無顯著影響；對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠在63日齡分泌的唾液mNGF蛋白濃度、相對(duì)濃度及總量均有顯著影響，且雄性高于雌性；對(duì)轉(zhuǎn)hNGF唾液hNGF蛋白濃度、相對(duì)濃度及總量都有顯著影響，且雄性高于雌性。

本研究結(jié)果還顯示，日齡對(duì)同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液量、唾液總蛋白濃度、唾液總蛋白量都有顯著影響，且均為63日齡高于28日齡；對(duì)雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液mNGF蛋白濃度有顯著影響，且63日齡高于28日齡；對(duì)同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液mNGF蛋白總量有顯著影響，且63日齡高于28日齡；對(duì)雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF蛋白濃度有顯著影響，且63日齡高于28日齡；對(duì)同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF蛋白總量有顯著影響，且63日齡高于28日齡。

已有研究顯示雄性小鼠唾液中NGF蛋白濃度顯著高于雌性[16]，這與本研究結(jié)果相似。此外，還有研究顯示雄性成年小鼠唾液腺中的NGF含量是雌性成年小鼠的10倍左右，而去勢(shì)后的雄性成年小鼠唾液腺中的NGF含量則與雌性成年小鼠相當(dāng)，用甲狀腺激素和雄激素治療后的去勢(shì)雄性成年小鼠唾液腺中NGF含量分別增加6倍和20倍，且后者基本恢復(fù)至去勢(shì)前的量[23]。劉玲愛等[24]也證明，通過注射外源雄激素可以有效提高小鼠唾液腺NGF的合成量。上述研究結(jié)果顯示雄性激素在小鼠體內(nèi)可以促進(jìn)NGF蛋白的表達(dá)合成。這也提示我們，可以通過注射外源雄激素來提高轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中hNGF蛋白的分泌量，從而更高效生產(chǎn)hNGF蛋白。

本研究結(jié)果還顯示，同一性別的轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠在63日齡分泌的唾液mNGF和hNGF蛋白總量均顯著高于28日齡，說明hNGF基因小鼠分泌的唾液mNGF和hNGF蛋白總量隨日齡增加而增加，這與另一研究報(bào)道的結(jié)果一致[20]。由于小鼠唾液蛋白的表達(dá)分泌主要受激素 (例如性激素) 調(diào)控，隨著日齡的增加，小鼠體內(nèi)的性激素含量也增加，可能就導(dǎo)致其唾液中NGF蛋白表達(dá)分泌增加[25-26]。

根據(jù)本研究結(jié)果，如果選擇63日齡左右 (性成熟后) 的雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠采集其唾液純化hNGF蛋白，與選擇28日齡 (性成熟前) 的雌性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠相比，hNGF蛋白產(chǎn)量將提高約46倍。

綜上所述，性別和日齡均對(duì)轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠唾液中的hNGF蛋白表達(dá)分泌量有顯著影響。選擇性成熟后的雄性轉(zhuǎn)hNGF基因小鼠收集唾液純化hNGF蛋白，將有利于提高該蛋白的制備效率。

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Effects of gender and age on protein secretion in saliva of transgenic mice expressing human nerve growth factor

Sha Liao1, Qingchun Zhu1, Zhenfang Wu1, Zicong Li1, and Fang Zeng1,2

1 College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, Guangdong, China 2 College of Marine Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, Guangdong, China

Nerve growth factor (NGF) can promote the development, differentiation and regeneration of neurons. Recently, in order to efficiently produce human NGF (hNGF) drugs with better efficacy, we created transgenic mice expressing hNGF specifically in their salivary glands, and purified highly active hNGF protein from their saliva. Some studies reported that the NGF secretion in mouse saliva is affected by gender and age. Here, in order to select hNGF transgenic mice with high NGF secretion for saliva collection and hNGF purification, we divided transgenic mice into 4 groups, including 28-day-old young males and females, 63-day-old adult males and females. We compared their saliva volume, total salivary protein amount, salivary mNGF protein amount and salivary hNGF protein amount. The results showed that the saliva volume as well as amounts of total salivary protein, salivary mNGF protein and salivary hNGF protein secreted by 63-day-old transgenic mice were significantly higher than those secreted by sex-match 28-day-old transgenic mice, and the salivary hNGF protein amount secreted by male transgenic mice at the age of 63 days was significantly higher than that of female transgenic mice at the same age; Among 4 groups of mice, 63-day-old male transgenic mice secreted the highest salivary hNGF content, which was about 46 times higher than that secreted by the 28-day-old female transgenic mice. Therefore, 63-day-old male transgenic mice should be selected for saliva collection and hNGF purification.

transgenic mice, gender, age, human nerve growth factor, saliva

November 12, 2018;

February 27, 2019

National Natural Science Foundation of China (No. 31601911).

Fang Zeng. Tel: +86-20-85284985; Fax: +86-20-85280369; E-mail: zengf8210@163.com

國(guó)家自然科學(xué)基金(No. 31601911)資助。

2019-03-19

http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1998.q.20190318.1121.001.html

10.13345/j.cjb.180467

廖莎, 朱慶春, 吳珍芳, 等. 性別及日齡對(duì)轉(zhuǎn)人神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因小鼠唾液中蛋白分泌的影響. 生物工程學(xué)報(bào), 2019, 35(6): 1041–1049.

Liao S, Zhu QC, Wu ZF, et al. Effects of gender and age on protein secretion in saliva of transgenic mice expressing human nerve growth factor. Chin J Biotech, 2019, 35(6): 1041–1049.

(本文責(zé)編 陳宏宇)