超聲提取-氣相色譜法測定高粱中腈菌唑與烯唑醇農(nóng)藥殘留量

陳順琴 楊暉 王愛民

摘要：利用超聲提取-氣相色譜法測定高粱中腈菌唑與烯唑醇農(nóng)藥殘留。高粱樣品用不同比例的乙腈-丙酮進行提取，弗洛里硅藻土凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，最后采用氣相色譜-電子捕獲檢測器（ECD）進行測定。腈菌唑農(nóng)藥線性范圍為0.012 5～0.400 μg/g，方法檢出限（3S/N）為0.002 μg/g，相對標準偏差（n=6）RSD為3.7%;烯唑醇農(nóng)藥線性范圍為0.004 76～0.152 μg/g，方法檢出限（3S/N）為0.000 83 μg/g，相對標準偏差（n=6）RSD為1.2%。該方法簡單、高效、快速、靈敏，能滿足高粱中腈菌唑與烯唑醇農(nóng)藥殘留量的測定。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法;超聲提取;腈菌唑;烯唑醇;高粱

中圖分類號：S132? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）10-0146-04

Abstract： A method of ultrasonic assisted extraction combined with gas chromatography was used to determine pesticide residue of myclobutanil and diniconazole in sorghum.The sample was extracted by a mixture of acetonitrile and acetone，then purified with concentrated flory diatomite acid，concentrated with rotary evaporation，and analyzed with GC-ECD. Linearity range of myclobutanil was found between 0.012 5～0.400 μg/g，and the detection limit（3S/N） was 0.002 μg/g，and the values of RSD（n=6） was 3.7%;Linearity range of diniconazole was found between 0.004 76～0.152 μg/g，and the detection limit（3S/N） was 0.000 83 μg/g，and the values of RSD（n=6） was 1.2%. This developed method is simple，quickness，rapid，sensitive and can therefore be used for the determination of myclobutanil and diniconazole in sorghum.

Key words： gas chromatograph;ultrasonic assisted extraction;myclobutanil;diniconazole;sorghum

腈菌唑、烯唑醇均屬于高效、低毒、廣譜的新型三唑類殺菌劑農(nóng)藥，主要對病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用，對子囊菌、擔子菌均具有較好的防治作用[1，2]。腈菌唑化學名稱為2-（4-氯苯基）-2-（IH-1，2，4三唑甲基）己腈[3];烯唑醇又名病除凈、速保利、特譜唑，化學名字為（E）-1-（2，4-二氯苯基）-4，4-二甲基-2-（1，2，4-三唑-1-基）-1-戊烯-3-醇[3]。該類殺菌劑主要用于防治谷物葉部和穗部病害，如霜霉病、斑枯病、萎凋病、黑粉病、腹黑病、銹病、瘡痂病等;在種子處理中用于預(yù)防治黑粉菌、腥黑粉菌和腔菌導致的病害;也可防治葡萄的霜霉病，玫瑰的霜霉病、銹病和黑斑病，花生的葉斑病，香蕉葉斑病和咖啡銹病;也用于果樹、蔬菜和其他觀賞植物。這類殺菌劑具有極高的殺菌活性、內(nèi)吸性強、持效期長，兼有預(yù)防與治療的作用，是一種高活性的植物生長調(diào)節(jié)劑和殺菌劑。但其對人體的危害不容忽視，很多國家已經(jīng)明確限定該農(nóng)藥在食品中的最高殘留量[4]。

目前國內(nèi)外文獻關(guān)于烯唑醇的殘留檢測方法主要有雙標記時間分辨熒光免疫分析[5]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[6-9]、高效液相色譜法-（HPLC）[10，11]、氣相色譜法（GC）[12-15]。在以上對于腈菌唑、烯唑醇殘留量檢測中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析較多，但氣相色譜分析較少，且均是單獨對其中一種殺菌劑進行分析。本研究以貴州省仁懷高粱為研究對象，因在貴州省高粱主要用于釀酒，在種植過程中會用到烯唑醇、腈菌唑等殺菌劑，因此對于高粱中腈菌唑、烯唑醇檢測具有重要意義。

1? 材料與方法

1.1? 儀器與試劑

Agilent 6890N型氣相色譜儀（配ECD）;GC-2014型氣相色譜儀配氮磷檢測器（FTD）;HB-10250型數(shù)控超聲波清洗器;EYELA OSB-2000型旋轉(zhuǎn)儀蒸發(fā)儀;AL204型電子天平;80-2臺式低速離心機。

標準儲備品：腈菌唑、烯唑醇均為色譜純（純度>99.0%），購自SIGMA-ALDRICH公司，取適量腈菌唑、烯唑醇分別配制成5 μg/mL標準儲備液。

甲醇、乙腈、二氯甲烷均為高效液相色譜純;乙酸乙酯、石油醚、無水硫酸鈉均為分析純;弗洛里硅藻土為農(nóng)殘級（60～100目），中性氧化鋁，層析柱：30 cm×10 mm。

1.2? 色譜條件

載氣：高純氮氣（99.999%）;進樣口溫度（INJ）：280 ℃;檢測器溫度（DET）：320 ℃;色譜柱：弱極性SE-54石英毛細管色譜柱（50 m×0.32 mm×0.32 μm），溫度（COL）：260 ℃;分流進樣，分流比為45∶1，柱流速：1.5 mL/min;尾吹氣流量60 mL/min。

1.3? 試驗方法

1.3.1? 樣品提取? 稱取粉碎均勻的高粱樣品5.00 g于250 mL具塞錐形瓶中，加20 mL乙腈-丙酮（3∶1，V∶V，下同）搖勻，超聲20 min，收集提取液;再加入10 mL乙腈-丙酮（1∶1）超聲10 min，合并兩次提取液，提取液經(jīng)無水硫酸鈉除水過濾至濃縮瓶中，并于45 ℃的水浴下濃縮至近干后用乙腈定容至2 mL，待過柱凈化。

1.3.2? 樣品凈化? 層析柱（30 cm×10 mm）自下而上依次填入2 cm無水硫酸鈉、4 cm弗洛里硅藻土、2 cm無水硫酸鈉。凈化柱填好后用10 mL乙腈-丙酮（3∶1）預(yù)淋洗柱子，棄去淋洗液，將待凈化試樣轉(zhuǎn)移至柱子并用5 mL乙腈-丙酮（3∶1）洗滌濃縮瓶并倒入凈化柱中，重復(fù)3次，再用5 mL乙腈-丙酮（3∶1）淋洗柱子，收集洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，加5 mL的正己烷置換溶劑再次濃縮至近干，用正己烷定容至2 mL供色譜分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 色譜行為

腈菌唑、烯唑醇標準溶液色譜圖見圖1。

2.2? 色譜檢測器的選擇

腈菌唑、烯唑醇這兩種化合物均含有特征元素N、Cl，試驗分別比較了兩物質(zhì)在氣相色譜電子捕獲檢測器（ECD）與火焰熱離子檢測器（FTD）上的參數(shù)大小，結(jié)果見表1，對比分析得到腈菌唑、烯唑醇采用ECD檢測器效果良好，分析靈敏度高。

2.3? 提取溶劑的選擇

腈菌唑、烯唑醇能溶解于不同的有機溶劑，本研究選取乙腈、丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、乙腈-丙酮（1∶1）、乙腈-丙酮（3∶1）作為提取溶劑對比回收率，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，提取溶劑為純乙腈、乙腈-丙酮（1∶1）濃縮時間較長，成本較高。因此，本試驗采用乙腈-丙酮（3∶1）作為試驗提取溶劑。

2.4? 提取方法的選擇

試驗分別比較了不同提取方法下的回收率，結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，多次超聲提取效果較好、回收率較高。

2.5? 凈化方法選擇

試驗分別選取弗洛里硅藻土固相萃取柱、氧化鋁固相萃取柱、活性炭柱對樣品進行凈化，結(jié)果見圖4。結(jié)果表明，活性炭柱對樣品的吸附能力很強，洗脫耗時較長，不利于樣品凈化分析;氧化鋁柱去除樣品色素效果較差，且干擾大回收率較低;弗洛里硅藻土回收率較高，且除干擾物質(zhì)效果良好，有利于色譜定性與定量。弗洛里硅藻土凈化樣品加標回收率見圖4。

2.6? 方法的回收率與精密度

稱取粉粹的高粱樣品6份，每份5.00 g，分別添加相同濃度的混合標準溶液。前處理方法的回收率、精密度見表2。結(jié)果表明，該方法回收率均在83.2%～118.0%范圍內(nèi)，滿足分析要求。方法精密度為8.3%～8.8%，說明該方法穩(wěn)定性良好，適用于樣品分析。

2.7? 方法應(yīng)用

在谷物類糧食（小麥、大米、玉米、蕎麥）中，各物質(zhì)的色素及脂類含量差異較大，為了進一步檢驗該方法的實用性，對以上幾種糧食進行了加標回收率試驗。將小麥、大米、玉米、蕎麥等谷物類糧食連皮一起粉碎，稱取5.00 g樣品置于錐形瓶進行加標回收率試驗，分析條件采用高粱中腈菌唑、烯唑醇的分析條件，設(shè)3個加標梯度，每個加標濃度設(shè)3個平行，回收率取平均值，加標量濃度與回收率見表3。對表3的數(shù)據(jù)進行分析得到小麥、大米、玉米與蕎麥等樣品中腈菌唑的回收率為70.2%～103.8%，烯唑醇回收率為78.0%～96.5%，滿足分析要求，樣品凈化后無雜質(zhì)干擾。因此該方法能用于不同種糧食中腈菌唑、烯唑醇殘留量檢測。

運用已建立并優(yōu)化的方法，對貴陽市各地區(qū)的谷物（高粱、小麥、大米、玉米、蕎麥）中腈菌唑、烯唑醇殘留量進行檢測。結(jié)果表明，腈菌唑、烯唑醇檢出率極小、含量少，低于國家食品安全要求限量值（GB/T 2763-2012）[16]，檢測結(jié)果見表4。

3? 結(jié)論

本研究建立了高粱中腈菌唑、烯唑醇等農(nóng)藥殘留檢測方法，并將該方法應(yīng)用于小麥、大米、玉米、蕎麥等農(nóng)作物中。樣品采用超聲波震蕩提取，弗洛里固相凈化柱凈化，氣相色譜電子捕獲器檢測檢測。結(jié)果表明，該方法檢出限高、靈敏度高，同時回收率也在農(nóng)殘類回收率要求范圍之內(nèi)。

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