薈生源兩種組方對小鼠經(jīng)口急性毒性實驗

姚淮育 吳虹諺 何昊

摘要：目的? 評價薈生源兩種組方的安全性，評估其臨床使用安全性，為功能性食品開發(fā)和臨床安全用藥提供實驗依據(jù)。方法? 將26只SPF級昆明小鼠采用隨機(jī)數(shù)目表法隨機(jī)分為3組，其中實驗組1、實驗組2各10只，空白組6只，雌雄各半。實驗組1以薈生源0.96 g+生理鹽水0.17 ml（按配方1最大溶解度進(jìn)行配置，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、實驗組2以薈生源0.4 g+生理鹽水0.63 ml（按配方2最大溶解度進(jìn)行配置，有效量接近于于成人每日標(biāo)準(zhǔn)服用量200倍），兩組實際灌胃量均為0.8 ml;空白組以生理鹽水0.8 ml灌胃，灌胃后連續(xù)觀察7 d。比較3組一般情況、死亡情況、大體解剖及鏡下特點。結(jié)果? 3組小鼠體重、飲水量、活動度均正常，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;實驗過程中各組均無小鼠死亡，大體解剖肉眼觀察小鼠各臟器均無變性、充血、水腫、壞死等異?，F(xiàn)象;鏡下對照組小鼠肝臟、腎臟細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小均正常，無壞死、無病理性改變。實驗組1小鼠肝細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小均正常，肝小葉組織結(jié)構(gòu)正常;實驗組2中出現(xiàn)1例肝細(xì)胞胞漿疏松化。各組所有動物腎組織結(jié)構(gòu)腎小管結(jié)構(gòu)正常，皮質(zhì)與髓質(zhì)分界線清楚，無淋巴細(xì)胞浸潤。結(jié)論? 薈生源兩種組方對小鼠無急性毒性作用，具有較好的安全性。

關(guān)鍵詞：薈生源;經(jīng)口急性毒性實驗;小鼠

中圖分類號：R285.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.020

文章編號：1006-1959（2019）11-0072-04

Abstract：Objective? To evaluate the safety of Huishengyuan and its clinical safety， so as to provide experimental basis for the development of functional food and the safe use of drugs in clinic.Methods? 26 SPF Kunming mice were randomly divided into three groups： experimental group 1 （n =10）， experimental group （n=10） and blank group （n=6）.Both male and female. In the experimental group 1， 0.96 g + normal saline 0.17 ml （configured according to the maximum solubility of the formula 1 and the effective amount is close to 200 times the daily dosage of the adult） was administered to the experimental group 1 and the experimental group 2 was 0.4 g+0.63 ml（of physiological saline. The maximum solubility of Formulation 2 was configured，and the effective amount was close to 200 times of the daily standard dose of adults.） The actual gastric perfusion volume was 0.8 ml; the blank group was intragastrically administered with 0.8 ml of normal saline， and was continuously observed for 7 d after gavage.Compare the general conditions， death， gross anatomy and microscopic features of the 3 groups.Results? The body weight， water consumption and activity of the three groups were normal， the difference was not statistically significant （P>0.05）. There was no mouse death in each group during the experiment.Gross dissection observed the mice without degeneration and congestion. Abnormal phenomena such as edema and necrosis; the morphology， structure and size of liver and kidney cells of the mice in the control group were normal， no necrosis and no pathological changes. The morphology， structure and size of hepatocytes in experimental group 1 were normal， and the structure of hepatic lobule was normal. In experimental group 2， 1 case of hepatocyte cytoplasmic loosening occurred. The renal tubular structure of all animals in each group was normal， the boundary between cortex and medulla was clear， and there was no lymphocytic infiltration.Conclusion? Huishengyuan two kinds of prescription have no acute toxicity to mice， and have good safety.

Key words：Huishengyuan;Oral acute toxicity test;Mouse

根據(jù)國家衛(wèi)生計生委《中國癌癥防治三年行動計劃（2015～2017年）》統(tǒng)計顯示，每年我國新發(fā)癌癥病例約為310萬?；熓侵委熌[瘤主要手段之一，對腫瘤患者的治療有著明顯效果，化療所帶來的不良反應(yīng)常讓患者的依從性降低，盡管患者的生存時間得到延長，但化療相關(guān)不良反應(yīng)卻影響著患者的生活質(zhì)量[1]，化療所導(dǎo)致化療相關(guān)性嘔吐（chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV）是最常見的胃腸道反應(yīng)。其發(fā)生率為65%～85%，順鉑致吐率幾乎達(dá)100%[2，3]。西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實驗室自主研制的“薈生源”產(chǎn)品，是依據(jù)中醫(yī)“藥食同源”特性，結(jié)合現(xiàn)代微生態(tài)研究進(jìn)展而研制的產(chǎn)品，其根據(jù)化療患者體質(zhì)的不同，有兩種不同的組方供患者使用。本實驗主要通過小鼠對薈生源兩種組方耐受性來驗證其毒性作用，以進(jìn)一步了解其生物學(xué)活性，為更好的應(yīng)用于制藥業(yè)和臨床治療提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組? SPF級昆明種小白鼠（Kunming mice，KM小鼠）38只（預(yù)實驗12只，正式急性毒性實驗26只），周齡為6～8周，體重18～22 g，由西南醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供[許可證號：SCXK（川）2013-17]。動物分組：將26只小鼠，隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，其中實驗組1和實驗組2，各10只，空白組6只，均雌雄各半，編號分籠飼養(yǎng)。本研究通過西南醫(yī)科大學(xué)動物實驗倫理審查，遵照動物福利進(jìn)行實驗，飼養(yǎng)溫度20～25℃，濕度40%～70%。實驗中動物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。

1.2實驗用藥? 薈生源配方1（生姜、黨參、藿香等），褐色水煎劑提取液，由西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實驗室提供;薈生源配方2（生姜、低聚甘露糖、竹茹等），白色粉末，由西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實驗室提供。根據(jù)薈生源的兩種組方，配制兩種藥劑，供實驗組1和實驗組2使用。生理鹽水，四川美大康佳樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.3實驗儀器? 電子秤、1 ml注射器、灌胃針、手術(shù)器械、眼科鑷、刀片、乳膠手套、薄膜手套、棉簽、口罩、濾紙、酒精、安爾碘、甲醛溶液、無毒小鼠籠。

1.4實驗方法

1.4.1預(yù)實驗? 參照《化學(xué)藥物急性毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》[4]進(jìn)行，取體重18～22 g的小鼠12只，隨機(jī)分為實驗組和空白組，每組6只，雌雄各半。第1次灌胃前禁食（不禁水）12 h，實驗組1灌胃給藥濃度為1.2 g/ml，實驗組2灌胃給藥濃度為1 g/ml，給藥容積均為40 ml/kg，空白組灌入等量的生理鹽水，給藥后觀察小鼠7 d內(nèi)毒性反應(yīng)和死亡情況。根據(jù)動物急性毒性實驗觀察項目（表1）記錄各組動物的一般生理狀況、行為活動、進(jìn)食、有無中毒狀和有無動物死亡，試驗結(jié)束后將小鼠用頸椎脫臼致死法處死進(jìn)行解剖學(xué)檢查。結(jié)果未見中毒表現(xiàn)，亦無小鼠死亡。因1.2 g/ml濃度和1 g/ml濃度已經(jīng)分別達(dá)到兩種組方化學(xué)藥物最大給藥濃度（20 g/kg和48 g/kg），受小鼠胃容量限制，未測定出半數(shù)致死量LD50，因此需做最大給藥量測定。

1.4.2急性毒性實驗（最大給藥量測定）? 根據(jù)預(yù)試驗測不到LD50，另取剩余KM小鼠26只，其中實驗組1、實驗組2各10只，空白組6只，雌雄各半。與預(yù)試驗實驗步驟一致，試驗前禁食（不禁水） 12 h，實驗組1以薈生源0.96 g+生理鹽水0.17 ml（按配方1最大溶解度進(jìn)行配置，給藥濃度為1.2 g/ml，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、實驗組2以薈生源0.4 g+生理鹽水0.63 ml（按配方2最大溶解度進(jìn)行配置，給藥濃度為1 g/ml，有效量接近成人每日標(biāo)準(zhǔn)服用量200倍），兩組實際灌胃量均為0.8 ml;空白組以生理鹽水0.8 ml灌胃，三組給藥容積均為40 ml/kg。灌胃次日后每日上、下午各觀察1次，實驗條件同前，連續(xù)觀察7 d。第8天將小鼠用頸椎脫臼致死法處死，取出各組小鼠肝、腎臟，隨后在生理鹽水中輕輕震蕩除去內(nèi)容物，用10%甲醛固定液固定24 h以上，將組織包埋、切片、HE染色。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1一般情況? 根據(jù)動物急性毒性實驗觀察項目記錄動物的外觀、飲食、行為、活動度[5]、體重、有否死亡等情況。

1.5.2肝、腎臟? ①肉眼觀察有無腫脹、囊腫、萎縮、出血、水腫、顏色異常、粘連、硬化等異常改變;②鏡下觀察各組小鼠體重以及肝臟、腎臟病理學(xué)變化。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理? 采用SPSS 20.0，對3組小鼠體重、飲水量、進(jìn)食量進(jìn)行單因素方差分析，計量資料以（x±s）表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況及體重變化趨勢? 給藥后小鼠活動減少， 1 d后活動恢復(fù)正常。試驗期內(nèi)無動物死亡，各給藥組動物均未出現(xiàn)動物急性毒性實驗觀察項目中列舉的急性中毒癥狀和表現(xiàn)，并且毛皮光滑，進(jìn)食、體重增長及大小便正常，眼、鼻無異常分泌物，粘膜無充血、水腫，呼吸正常。在觀察期間，實驗組1、實驗組2與空白組小鼠體重穩(wěn)定增長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），3組相比較體重增長量無顯著差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），實驗操作對小鼠體重?zé)o影響，見表2。

2.2小鼠肝、腎臟功能觀察

2.2.1肉眼觀察? 未發(fā)現(xiàn)器官有腫脹、囊腫、萎縮、出血、水腫、顏色異常、粘連、硬化等異常改變，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.2.2 鏡下觀察? 病理切片結(jié)果（圖1）除實驗組2中有1例肝臟有輕微改變外（主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞胞漿疏松化較為明顯，但未見肝細(xì)胞壞死及肝小葉結(jié)構(gòu)的改變）（圖2），其余所有小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)正常，肝細(xì)胞未見明確變性、壞死改變，間質(zhì)無明顯充血，也未見炎性細(xì)胞浸潤;所有小鼠雙側(cè)腎臟腎小球、腎小管均未見明確形態(tài)、結(jié)構(gòu)的改變，未見細(xì)胞變性、壞死和脫落，腎小管內(nèi)無管壁，間質(zhì)無炎性細(xì)胞浸潤。