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    瘦素/脂聯(lián)素基因多態(tài)性與痰濕質(zhì)睡眠呼吸暫停相關(guān)性研究

    2019-07-02 03:35:02嚴(yán)嫻婷杜堅(jiān)宗吳文娟吳海燕李志軍
    關(guān)鍵詞:濕質(zhì)脂聯(lián)素瘦素

    嚴(yán)嫻婷 顧 亮 杜堅(jiān)宗 吳文娟 吳海燕 李志軍

    阻塞性睡眠呼吸暫停(obstructive sleep apnea,OSA)是由于患者睡眠時(shí)上氣道完全或部分阻塞,導(dǎo)致呼吸暫停和睡眠結(jié)構(gòu)紊亂、引起夜間反復(fù)低氧血癥和高碳酸血癥。根據(jù)其臨床癥狀,歸屬于中醫(yī)“鼾癥”范疇。隋代巢元方《諸病源候論·鼾眠候》首次將鼾癥作為一個(gè)獨(dú)立病證,認(rèn)為痰濕內(nèi)生是其重要的發(fā)病因素。痰濕體質(zhì)為常見的中醫(yī)體質(zhì)類型,是產(chǎn)生“痰濕”這一病理產(chǎn)物的體質(zhì)因素。迄今為止,瘦素及脂聯(lián)素同OSA 發(fā)生發(fā)展的關(guān)系已得到廣大學(xué)者肯定[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),OSA 患者血漿瘦素水平隨著病情嚴(yán)重而逐漸升高,并且同體質(zhì)指數(shù)、呼吸暫停指數(shù)及夜間氧飽和度水平相關(guān)[3]。脂聯(lián)素具有調(diào)節(jié)糖脂代謝紊亂及改善胰島素抵抗等作用,目前尚無研究報(bào)道痰濕質(zhì)OSA 患者同瘦素、脂聯(lián)素基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的關(guān)系。本研究旨在探討痰濕質(zhì)OSA 患者同瘦素及脂聯(lián)素基因SNPs 的關(guān)聯(lián)性,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 所有患者均來自浙江省漢族人群,自2014 年12 月—2016 年12 月在浙江醫(yī)院呼吸睡眠研究中心進(jìn)行多導(dǎo)睡眠儀(polysomnography,PSG)檢測(cè)診斷明確為OSA 患者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。

    1.2 OSA 診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南(2011 年修訂版)》[4],采用多導(dǎo)睡眠儀監(jiān)測(cè)提示呼吸暫停低通氣指數(shù)(apnea hypopnea index,AHI)≥5,同時(shí)伴有典型的夜間睡眠打鼾伴呼吸暫停、日間嗜睡便可診斷OSA。OSA 病情嚴(yán)重程度判定標(biāo)準(zhǔn):輕度(15>AHI≥5 次/分);中度(30>AHI≥15 次/分);重度(AHI≥30 次/分)。

    1.3 中醫(yī)痰濕體質(zhì)判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)王琦制定的痰濕體質(zhì)判定標(biāo)準(zhǔn)[5]:癥狀為體形肥胖,中脘痞滿,口甜黏,身重如裹,大便不實(shí),口干不飲,胸滿昏眩,脈濡或滑,舌苔膩等。凡痰濕癥狀/體征累計(jì)積分≥9 分,診斷為痰濕體質(zhì);<9 分者,為非痰濕體質(zhì)。

    1.4 納入標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)診斷明確的OSA患者和根據(jù)中醫(yī)體質(zhì)學(xué)判定為“痰濕質(zhì)”、“非痰濕質(zhì)”患者。所有患者均自愿簽署知情同意書后納入本研究。

    1.5 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)未滿18 周歲;(2)嚴(yán)重的頜面畸形;(3)存在可能影響血氧飽和度的疾病,如慢性阻塞性肺病、心力衰竭、先天性心臟病等;(4)正在服用影響睡眠的藥物,如苯二氮卓類、巴比妥類、鎮(zhèn)靜劑等;(5)已接受針對(duì)OSA 的治療;(6)多導(dǎo)睡眠儀監(jiān)測(cè)睡眠時(shí)間少于5h;(7)存在腫瘤、糖尿病、肝腎功能不全和自身免疫性疾病等。

    1.6 指標(biāo)檢測(cè) 指標(biāo)檢測(cè)操作程序參照文獻(xiàn)[6]。所有患者經(jīng)PSG 檢查后抽取靜脈血,采用AxyPrep 血液DNA 組提取試劑盒提取外周血DNA;PCR 反應(yīng)引物由上海生工生物工程有限公司合成(見表1)。利用MassARRAY Assay Design 軟件設(shè)計(jì)出各SNPs的PCR 引物和單堿基延伸引物后,根據(jù)PCR 引物進(jìn)行片段擴(kuò)增,再進(jìn)行蝦堿性磷酸酶(shrimp alkaline phosphatase,SAP)處理,單堿基延伸反應(yīng)和產(chǎn)物純化,根據(jù)獲取的Tag SNPs 序列,使用Sequenom 公司的飛行時(shí)間質(zhì)譜平臺(tái)對(duì)瘦素、脂聯(lián)素基因的SNPs 位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)算各個(gè)SNPs 位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率,采用Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)分析瘦素、脂聯(lián)素基因各位點(diǎn)基因型和等位基因的遺傳平衡狀態(tài),采用卡方檢驗(yàn)檢測(cè)各組間SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因組的差異性,P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 病例特點(diǎn) 本研究總共納入130 例OSA 患者,其中痰濕質(zhì)組92 例,非痰濕質(zhì)組38 例,兩組患者性別、年齡、OSA 病情嚴(yán)重程度等資料,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),組間具有可比性;痰濕質(zhì)組體質(zhì)量超重68 例,正常24 例;非痰濕質(zhì)組體質(zhì)量超重21 例,正常17 例,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023),見表2。

    表1 瘦素、脂聯(lián)素各SNPs 引物序列

    表2 兩組OSA 患者基本資料比較[例(%)]

    2.2 瘦素和脂聯(lián)素基因各SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布情況比較 130 例浙江省漢族OSA 人群,共檢測(cè)瘦素基因4 個(gè)SNPs 位點(diǎn)和脂聯(lián)素基因5 個(gè)SNPs 位點(diǎn)。Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示,瘦素和脂聯(lián)素基因各SNPs 處于遺傳平衡狀態(tài),無顯著偏倚。與非痰濕質(zhì)OSA 患者比較,痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素基因4 個(gè)SNPs 位點(diǎn)和脂聯(lián)素基因5 個(gè)SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均>0.05),見表3-4。由于兩組患者體質(zhì)量分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因此,本研究根據(jù)BMI 分層進(jìn)行亞組分析,結(jié)果顯示,不論體質(zhì)量超重亞組、還是正常亞組,痰濕質(zhì)和非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素和脂聯(lián)素基因各SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均>0.05),見表5-6。

    3 討 論

    本研究結(jié)果提示,痰濕質(zhì)及非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素基因4 個(gè)SNPs 位點(diǎn)和脂聯(lián)素基因5 個(gè)SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,通過亞組分析也提示不同體質(zhì)量的兩組患者素和脂聯(lián)素基因各SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表3 兩組阻塞性睡眠呼吸暫停患者瘦素、脂聯(lián)素基因各SNPs 基因型分布比較[例(%)]

    表4 兩組阻塞性睡眠呼吸暫停患者瘦素、脂聯(lián)素基因各SNPs 等位基因分布情況比較[例(%)]

    表5 不同體質(zhì)量痰濕質(zhì)、非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比較[例(%)]

    表5 不同體質(zhì)量痰濕質(zhì)、非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比較[例(%)](續(xù))

    表6 不同體質(zhì)量痰濕質(zhì)、非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比較[例(%)]

    表6 不同體質(zhì)量痰濕質(zhì)、非痰濕質(zhì)OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比較[例(%)](續(xù))

    痰濕體質(zhì)是常見的中醫(yī)體質(zhì)類型,是產(chǎn)生“痰濕”這一病理產(chǎn)物的體質(zhì)因素,“痰”、“濕”是OSA 最常見的病理因素,痰濕壅盛,聚于上焦,阻塞氣道,致肺氣宣降失常,入夜更甚,故出現(xiàn)夜間打鼾、呼吸暫停及反復(fù)憋醒等臨床癥狀。本研究發(fā)現(xiàn),痰濕質(zhì)OSA 患者占總OSA 患者的70.8%(92/130),同付桂玲等[7]研究結(jié)果相類似,付氏等調(diào)查中醫(yī)體質(zhì)與睡眠呼吸暫停發(fā)病的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)的鼾癥患者可高達(dá)71.7%。

    瘦素作為一種調(diào)節(jié)脂肪代謝的重要因子,目前大量研究證實(shí),相對(duì)于正常人群,OSA 患者血漿瘦素水平隨著病情嚴(yán)重而逐漸升高,并且同體質(zhì)指數(shù)、呼吸暫停指數(shù)及夜間氧飽和度水平相關(guān),而當(dāng)OSA 病情好轉(zhuǎn)而瘦素水平逐步降低[3],提示OSA 能引起血漿瘦素水平升高和瘦素抵抗,使瘦素不能正常發(fā)揮調(diào)節(jié)體脂的生理功能,進(jìn)而促進(jìn)脂肪沉積于上氣道和內(nèi)臟,并且引起神經(jīng)功能失調(diào),加重睡眠時(shí)呼吸道塌陷甚至閉塞,從而參與OSA 的發(fā)病過程,因此研究人員認(rèn)為瘦素可能是呼吸睡眠紊亂是一種分子標(biāo)記物[8]。Popko 等[9]研究報(bào)道,歐洲人群瘦素基因s1137101 位點(diǎn)多態(tài)性同OSA 發(fā)病相關(guān)。但是本研究提示瘦素基因各SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因在痰濕質(zhì)和非痰濕質(zhì)患者中分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,通過亞組分析提示兩組不同體質(zhì)量患者瘦素基因各SNPs 位點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組研究得出不一樣的結(jié)果可能與種族差異有關(guān)。

    脂聯(lián)素是一種含有244 個(gè)氨基酸的激素,具有調(diào)節(jié)糖脂代謝紊亂及改善胰島素抵抗等作用,近年來已成為OSA 的研究熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn),OSA 患者血漿脂聯(lián)素水平降低,與疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān),隨著病情的好轉(zhuǎn)而逐漸恢復(fù)正常[2,10]。Nakagawa等[10]發(fā)現(xiàn),同野生型大鼠比較,敲除脂聯(lián)素基因大鼠肺動(dòng)脈壁增厚及右心室肥厚更明顯,證實(shí)脂聯(lián)素參與OSA 導(dǎo)致的肺動(dòng)脈重塑及肺動(dòng)脈高壓等病理改變。Cao 等[11]研究發(fā)現(xiàn),相對(duì)于脂聯(lián)素基因276 位點(diǎn)G/T、T/T 型,G/G 型具有更高的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成為OSA。以上研究表明,脂聯(lián)素及脂聯(lián)素基因多態(tài)性同OSA發(fā)病及并發(fā)癥的發(fā)生密切相關(guān)。本研究提示,脂聯(lián)素基因各SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因在痰濕質(zhì)和非痰濕質(zhì)患者中分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,通過亞組分析提示兩組不同體質(zhì)量患者脂聯(lián)素基因各SNPs 位點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    總之,中醫(yī)體質(zhì)(痰濕質(zhì)和非痰濕質(zhì))同瘦素基因及脂聯(lián)素基因SNPs 位點(diǎn)基因型和等位基因分布無顯著相關(guān)性。

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