無償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定不一致的原因分析

劉德興 虞莉（通訊作者）

（揚(yáng)州市中心血站 江蘇 揚(yáng)州 22507）

正確鑒定ABO血型是輸血前的最重要的一項(xiàng)檢測(cè)，也是血和站最基本的一項(xiàng)業(yè)務(wù)技能，在對(duì)無償獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型鑒定時(shí)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)街頭初篩和實(shí)驗(yàn)室復(fù)核血型不一致、實(shí)驗(yàn)室一檢和二檢血型不一致、正定型和反定型不一致的現(xiàn)象。如何聯(lián)合使用多種檢測(cè)方法，對(duì)無償獻(xiàn)血者的血型進(jìn)行鑒定，找出血型鑒定不一致的原因，確保血液檢測(cè)血型報(bào)告的準(zhǔn)確性，也就成為血站檢驗(yàn)科一個(gè)經(jīng)常遇到但又必須正確解決的問題[1]。在血站ABO血型鑒定結(jié)果不一致中，大部分都是由于街頭血液初篩工作人員的責(zé)任心問題而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技術(shù)性原因，如何保證街頭初篩血型準(zhǔn)確率及提高實(shí)驗(yàn)室血型鑒定的技術(shù)水平是解決血型鑒定不一致的兩個(gè)主要方面。保證初篩血型的正確率和提高正反定型不一致時(shí)的技術(shù)分析水平，也就能夠基本解決絕大部分的血型不符的情況，下面重點(diǎn)對(duì)這兩個(gè)方面的問題如何解決進(jìn)行設(shè)計(jì)和討論研究。

1.資料與方法

1.1 一般資料

從2009年到2014年，血站檢驗(yàn)科共檢測(cè)249082人次，調(diào)查發(fā)現(xiàn)有157例血型鑒定不一致的情況。

1.2 試劑和材料

抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清（單克隆抗體，上海血液生物醫(yī)藥）、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥）、不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（上海血液中心）；全自動(dòng)血型儀（漢泰HEMOtype）。

1.3 方法

嚴(yán)格按照我站實(shí)驗(yàn)室ABO血型鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作和漢泰全自動(dòng)血型分析儀的SOP進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 正反定型結(jié)果不一致的處置方法

如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型不一致，首先要重復(fù)做試驗(yàn)一次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和分析試驗(yàn)結(jié)果和臨床癥狀，就可以解決問題[2]。對(duì)一些疑難問題必須進(jìn)一步研究，初步檢查步驟包括：

（1）首先用鹽水試管法對(duì)血型不一致進(jìn)行檢測(cè)，如果檢測(cè)結(jié)果一致則說明血型不一致由于全自動(dòng)血型儀檢測(cè)過程中出現(xiàn)判讀失誤；如果檢測(cè)結(jié)果不一致，應(yīng)將紅細(xì)胞及血清試驗(yàn)在水浴箱中孵育（37℃）和然后用顯微鏡檢查核實(shí)，以排除冷凝集素影響。

（2）如果檢測(cè)結(jié)果仍然不一致，可以進(jìn)行吸收放散試驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果來判定是否為抗體或抗原減弱導(dǎo)致結(jié)果不一致。如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的Cad抗原活性；被細(xì)菌酶激活的TK受體；或產(chǎn)生機(jī)制不大明了的Tn受體所引起。

（3）如果仍然不一致，可以進(jìn)一步采用篩選譜細(xì)胞或亞型試劑進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)出不同的血型亞型。

2.結(jié)果

2.1 2009年—2014年我站各種血型錯(cuò)誤及具體原因一覽，見表1。

表1 2009年—2014年我站血型不一致情況統(tǒng)計(jì)表

2.2 針對(duì)表1結(jié)果中正反定型不一致的42例標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，查找不一致原因，具體見表2。

表2 42例標(biāo)本正反定型不一致結(jié)果分析表

3.討論

從表1中可以看出在血站ABO血型鑒定結(jié)果不一致中，大部分都是由于街頭血液初篩工作人員的責(zé)任心問題而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技術(shù)性原因，如何保證街頭初篩血型準(zhǔn)確率及提高實(shí)驗(yàn)室血型鑒定的技術(shù)水平是解決血型鑒定不一致的兩個(gè)主要方面。保證初篩血型的正確率和提高正反定型不一致時(shí)的技術(shù)分析水平，也就能夠基本解決絕大部分的血型不符的情況[3]。

針對(duì)以上情況，我站為了提高街頭血型初篩正確率設(shè)計(jì)了一套方案來規(guī)范街頭的初篩工作。每日街頭初篩后要求在全血提交前再次復(fù)核一次血型（同時(shí)核對(duì)電腦登記血型），并且詳細(xì)規(guī)定日常工作中注意事項(xiàng)，包括試劑的儲(chǔ)存和使用注意點(diǎn)，街頭采血車的工作環(huán)境溫度，初篩血型讀結(jié)果的最少時(shí)間，紅細(xì)胞的吸取量（保證抗原抗體反應(yīng)比例），遇到可疑結(jié)果時(shí)應(yīng)用試管法復(fù)查，遇有單位集體獻(xiàn)血時(shí)合理配備人員的數(shù)量，加強(qiáng)工作人員的責(zé)任心教育。提高血站ABO血型鑒定的正確率，首先從源頭和流程上對(duì)街頭血型初篩進(jìn)行質(zhì)量控制，加強(qiáng)初篩工作人員的責(zé)任心教育，遵守規(guī)定的流程和操作規(guī)范，保證采血車的環(huán)境溫度，嚴(yán)格控制好試劑的儲(chǔ)存條件和使用時(shí)間，把握好抗原抗體比例，規(guī)范的進(jìn)行血型鑒定操作，認(rèn)證審核結(jié)果，出現(xiàn)可疑結(jié)果時(shí)不輕易下結(jié)論，及時(shí)進(jìn)行復(fù)核，能夠大大提高血型初篩的準(zhǔn)確率。此套方案的實(shí)施，我站街頭初篩血型錯(cuò)誤由以前的平均每年26例下降到目前現(xiàn)在的每年13例。

對(duì)于正反定型不一致的情況，我們對(duì)42例ABO正反定型不符標(biāo)本分別通過在不同溫度條件下進(jìn)行正反定型檢測(cè)并結(jié)合吸收放散試驗(yàn)或篩選細(xì)胞試劑檢測(cè)結(jié)果，ABO血型鑒定結(jié)果不一致結(jié)果顯示：待檢血球抗原效價(jià)降低12例；有冷凝集素11例；年齡因素導(dǎo)致抗體效價(jià)降低11例；人為判斷原因2例經(jīng)正反定型試管法重新鑒定正反定型符合；通過吸收放散試驗(yàn)鑒定出亞型2例；通過不規(guī)則抗體篩查出不規(guī)則抗體4例。提高實(shí)驗(yàn)室的血型鑒定技術(shù)水平，對(duì)疑難血型鑒定，特別是ABO血型正反定型不符合，切不可以正定型結(jié)果作為最后鑒定結(jié)果，會(huì)造成血型的誤判，造成不必要的輸血反應(yīng)，引起嚴(yán)重后果。以ABO血型抗原效價(jià)減弱是ABO正反定型不符的最常見的原因，占28.57%。紅細(xì)胞A或B抗原的弱化也是造成正反定型不符合的主要原因，抗原弱化是遺傳基因所決定的弱表現(xiàn)型（即亞型），12例抗原效價(jià)降低中，9例為B抗原效價(jià)降低，3例為A抗原效價(jià)降低；1例表現(xiàn)為Am亞型，1例表現(xiàn)為Bm亞型。無論是弱A或是弱B，正定型都容易漏檢出，A抗原和B抗原的弱化既可能是遺傳基因?qū)е碌娜醣憩F(xiàn)型，也可能是某些疾病導(dǎo)致的發(fā)生的，抗原減弱正定型中應(yīng)加做抗A抗體、抗B抗體檢測(cè)，必要情況可以進(jìn)行抗H的檢測(cè)，并觀察紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度，以鑒別是抗原減弱引起的血型正反定型不符，同時(shí)通過吸收放散試驗(yàn)、唾液血型物質(zhì)檢測(cè)，以得到正確的血型結(jié)果[4]。冷凝集也是常見的原因，占26.19%，一般只要測(cè)定時(shí)，保持37℃，冷凝集即可消失。冷凝集素，使用不同溫度條件的正反定型檢測(cè)都能夠得到確證。正常人血清中含有少量冷凝集素且效價(jià)很低，同時(shí)其只有在溫度為4℃左右才具有活性，室溫或37℃均不凝集，對(duì)ABO定型一般均無影響。但是由于個(gè)體差異，個(gè)別人有冷凝集素大量增高的特例，是室溫環(huán)境下常見ABO血型正反定型不一致或交叉配血不相符的原因之一。當(dāng)血清學(xué)反應(yīng)特點(diǎn)考慮是冷凝集素時(shí)，同時(shí)將正、反定型管放置37℃水浴箱孵育30min后用顯微鏡觀察結(jié)果，可以獲得正確的定型結(jié)果。ABO血型系統(tǒng)的抗體丟失或減弱是正反鑒定不一致的原因之一，一般加大反定型管血清量（2倍或數(shù)倍）可出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，表明血型抗體減弱降低，而不是完全缺失；如果是抗體完全缺失，ABO定型通過正定型確定的同時(shí)進(jìn)一步通過吸收放散試驗(yàn)確證比較合理[5]。人為原因多為抗原抗體比例不當(dāng)。ABO以外抗體的存在即不規(guī)則抗體的存在也是正反定型不符的原因。血清中有抗M等不規(guī)則抗體存在時(shí)使用不同溫度條件下的正反定型結(jié)合譜細(xì)胞試劑檢測(cè)可以得到滿意的結(jié)果。此外，環(huán)境溫度高對(duì)標(biāo)準(zhǔn)血清抗A、抗B效價(jià)影響較大，血型試劑應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間高溫環(huán)境放置，以確保血型出篩結(jié)果的準(zhǔn)確性。血型鑒定錯(cuò)誤還與檢驗(yàn)人員責(zé)任心及專業(yè)素質(zhì)相關(guān)，試劑反應(yīng)時(shí)間不足、沒有及時(shí)核對(duì)初篩血型或者馬虎填寫都可以導(dǎo)致差錯(cuò)的發(fā)生。把握好試劑反應(yīng)時(shí)間、加強(qiáng)工作責(zé)任心和提高專業(yè)素質(zhì)對(duì)減少人為差錯(cuò)發(fā)生，確保臨床輸血安全有重要意義。由于無償獻(xiàn)血的血液均經(jīng)過初篩的健康人的血液，出現(xiàn)正反定型不符的情況較少，一般出現(xiàn)的正反定型不符合也容易解決。

綜上所述，采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)街頭采血人員的培訓(xùn)，不斷增強(qiáng)員工的責(zé)任心，減少因人為因素導(dǎo)致的血型鑒定或者錄入錯(cuò)誤；同時(shí)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，提升實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，特別是相關(guān)疑難血型鑒定試劑的采購(gòu)，從而提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力。如部分血型試劑使用較少，可以委托上一級(jí)采供血機(jī)構(gòu)進(jìn)行疑難血型鑒定，以降低成本。