魚金注射液對(duì)大鼠的亞急性肝腎毒性研究

姜嫄 張長(zhǎng)海

【摘 要】目的：比較不同劑量魚金注射液對(duì)大鼠的亞急性肝腎毒性。方法：清潔級(jí)SD大鼠60只隨機(jī)分為3組，每組雌雄各10只，分別為正常組、魚金注射液低劑量組（2mL/kg）、魚金注射液高劑量組（4 mL/kg），分別每日灌胃給予生理鹽水2mL/kg、魚金注射液2mL/kg、4mL/kg，連續(xù)5周。于末次給藥后摘眼球采集大鼠血液，處死，取完整肝臟及腎臟，稱取肝臟、腎臟濕重，計(jì)算肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)，檢測(cè)大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量，HE染色觀察大鼠肝腎組織病理變化。結(jié)果：與正常組比較，魚金注射液低、高劑量組體重、肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr均未見顯著變化（P>0.05）;光鏡下顯示，魚金注射液低、高劑量組肝腎病理?yè)p傷與正常組無(wú)明顯差異。結(jié)論：給予大鼠魚金注射液5周并未引發(fā)機(jī)體肝腎組織的明顯毒性反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】魚金注射液;亞急性肝腎毒性;實(shí)驗(yàn)研究

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）5-0007-07

魚金注射液是一種純中藥注射劑，由魚腥草、金銀花提取制成，現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用GC色譜法測(cè)定甲基正壬酮。魚腥草始載于《名醫(yī)別錄》，為三白草科植物蕺菜（Houttuynia cordata Tunb）的鮮全草或干燥地上部分，性微寒、味辛，歸肺經(jīng)，具有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋的功效，用于肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱痢、癰腫瘡毒等癥[1] 。其主要活性成分為揮發(fā)油和黃酮類化合物，尚含生物堿、脂肪酸、有機(jī)酸、蕺菜堿、鉀鹽等?，F(xiàn)代藥理研究[2-7]表明，魚腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗過(guò)敏、鎮(zhèn)咳、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等藥理作用?，F(xiàn)部分地區(qū)已對(duì)其進(jìn)行人工培植，以四川、貴州、云南等地較為廣泛。金銀花（Lonicera Japonica Thunb）又名忍冬花，具有悠久的用藥歷史，是忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花[1]?！叭潭笔驾d于《名醫(yī)別錄》，初始以莖葉入藥，李時(shí)珍所著《本草綱目》載：“莖葉及花，功用皆同”。自此，花與藤葉以“忍冬”或“金銀花”為名，同作一藥使用，當(dāng)代主以花入藥。金銀花性寒，味甘，入肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、抗炎、補(bǔ)虛療風(fēng)的功效，主治脹滿下疾、溫病發(fā)熱、熱毒癰瘍，丹毒和腫瘤等癥[1，8]。從金銀花中分離鑒定的化學(xué)成分類型較多，主要有揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、黃酮類、三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜類等[9]。藥理研究[10]表明，金銀花具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利膽、降血糖、降血脂、增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗生育、止血等作用。

魚金注射液被廣泛地應(yīng)用于臨床治療呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)的感染性疾病，取得了較好的效果[11]。有研究[12]選取128例支氣管肺炎患者為研究對(duì)象，使用中藥魚金注射液聯(lián)合抗生素治療，臨床療效顯著。另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)山海丹牌魚金注射液口腔霧化給藥具有抗炎、解熱及抗菌作用[13]。研究以小兒支氣管肺炎為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)魚金注射液用于霧化吸入對(duì)發(fā)熱、咳嗽、氣急等癥狀療效顯著，具有起效快、退熱作用好、且全身副作用小等特點(diǎn)[14]。目前，尚未出現(xiàn)專門針對(duì)魚金注射液毒副作用、毒性物質(zhì)基礎(chǔ)和產(chǎn)生毒副作用的劑量范圍的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)以大鼠為研究對(duì)象，觀察2mL/kg、4mL/kg魚金注射液較長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用對(duì)機(jī)體肝、腎功能的影響，為魚金注射液臨床使用劑量、時(shí)間等提供相應(yīng)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物 SD大鼠60只，雌雄各半，（200±20）g，清潔級(jí)，購(gòu)自重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（軍）2012-0011。

1.2 藥品 魚金注射液（批號(hào)：17060621E，朗致集團(tuán)萬(wàn)榮藥業(yè)有限公司）。

1.3 試劑 采血針（批號(hào)：170905，南昌市贛達(dá)醫(yī)療器械有限公司）;采血管（批號(hào)：180529，南昌市贛達(dá)醫(yī)療器械有限公司）;高效切片石蠟（批號(hào)：20180118，上海華靈康復(fù)器械廠）;多聚甲醛（批號(hào)：20180112，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;PBS磷酸鹽緩沖液（批號(hào)：ZLI-9062，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）;無(wú)水乙醇（AR級(jí)，批號(hào)：GB678-90，江蘇海興化工有限公司）;二甲苯（AR級(jí)，批號(hào)：20180110，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）;蘇木素染液（批號(hào)：BA-4097，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）;伊紅染液（批號(hào)：BA-4099，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）;鹽酸（AR級(jí)，批號(hào)：20180118，成都市科龍化工試劑廠）;中性樹膠（批號(hào)：20171009，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;重鉻酸鉀（AR級(jí)，批號(hào)：20180120，成都市科龍化工試劑廠）;濃硫酸：（AR級(jí)，批號(hào)：20180119，成都市科龍化工試劑廠）;組織包埋盒（批號(hào)：31050102W，江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司）。

1.4 儀器 5800全自動(dòng)生化儀（貝克曼）;R35刀片（日本羽毛安全剃刀株式會(huì)社）;轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（德國(guó)徠卡-2016）;TSJ-Ⅱ型全自動(dòng)封閉式組織脫水機(jī)（常州市中威電子儀器有限公司）;BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)（常州郊區(qū)中威電子儀器廠）;PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）;BA400Digital數(shù)碼三目攝像顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）;Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件（美國(guó)Media Cybernetics公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組和給藥 60只清潔級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組20只，雌雄各半。正常組、魚金注射液低劑量組（2mL/kg）、魚金注射液高劑量組（4mL/kg），分別灌胃給予生理鹽水2mL/kg、魚金注射液2mL/kg、魚金注射液4mL/kg，每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5周。

2.2 鼠肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù) 取大鼠新鮮肝臟、腎臟，使用生理鹽水將其沖洗干凈，分別稱取肝臟和腎臟濕重，計(jì)算肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)。肝臟指數(shù)=肝重（mg）/體重（g），腎臟指數(shù)=腎重（mg）/體重（g）。

2.3 大鼠肝、腎功能檢測(cè) 摘眼球采集大鼠血液，以2500rpm/min，4 ℃離心15min后吸取血清，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量。

2.4 大鼠肝臟和腎臟病理檢測(cè) 取大鼠新鮮肝腎組織適當(dāng)大小迅速放入4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片，HE染色，采用麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的BA200Digital數(shù)碼三目攝像顯微攝像系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖像采集，每張切片先于40倍下觀察全部組織，觀察大體病變，選擇要觀察的區(qū)域采集100倍、400倍圖片，觀察具體病變。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s）表示，采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件t檢驗(yàn)分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 大鼠肝、腎臟器指數(shù)檢測(cè)結(jié)果 與正常組比較，魚金注射液低、高劑量組雄性與雌性大鼠體重及肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1～2。

3.2 大鼠血清肝、腎功能檢測(cè)結(jié)果 與正常組比較，魚金注射液低高劑量組雄性與雌性大鼠肝腎功能檢測(cè)指標(biāo)ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3～5。

3.3 大鼠肝組織病理檢測(cè)結(jié)果 正常組肝臟：肝臟被膜完整，肝細(xì)胞分葉不明顯，肝索排列紊亂，少量肝細(xì)胞顆粒或空泡變性，胞質(zhì)染色不均，可見數(shù)量不等的細(xì)小顆粒物質(zhì)或大小不等的空泡;肝竇內(nèi)未見明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn);門管區(qū)結(jié)構(gòu)較為完整，未見明顯的纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn);其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組肝臟組織鏡下所見與正常組比較無(wú)明顯差異。見圖1、圖2。

3.4 大鼠腎組織病理檢測(cè)結(jié)果 正常組腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，腎小球結(jié)構(gòu)完整清晰，未見毛細(xì)血管基底增厚及炎性滲出;部分腎小管可見上皮細(xì)胞變性，胞質(zhì)染色不均;間質(zhì)內(nèi)未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生;其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組腎臟組織鏡下所見與正常組比較無(wú)明顯差異。見圖3、圖4。

4 討論

魚金注射液是一種新型中藥注射劑，具有清熱解毒、疏散風(fēng)寒之功效，療效可靠。臨床應(yīng)用中，其多采用靜脈滴注、穴位注射或霧化吸入等方式，可用于治療急性上呼吸道感染、急性支氣管炎等，有“中藥中的抗生素”之稱。但由于中藥制??? 劑藥物純度一直存在爭(zhēng)議，因此目前在臨床的推廣運(yùn)用上有一定阻礙。目前，尚未出現(xiàn)專門針對(duì)魚金注射液毒副作用、毒性物質(zhì)基礎(chǔ)和產(chǎn)生毒副作用的劑量范圍的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)大鼠灌胃給予魚金注射液低劑量（2mL/kg/d）、高劑量（4mL/kg/d），分別相當(dāng)于人體推薦劑量的 50、100 倍，持續(xù)5周，就肝腎功能血清指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量，肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)及肝腎HE染色組織病理改變，探討其對(duì)肝、腎組織的亞急性毒性。結(jié)果顯示，魚金注射液低劑量組、魚金注射液高劑量組血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr水平，肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)及肝腎組織病理改變與正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明連續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間（5周）應(yīng)用大劑量魚金注射液（臨床等效劑量的50、100倍）無(wú)顯著肝腎毒性，其安全性較佳。本研究部分填補(bǔ)了魚金注射液藥理毒理內(nèi)容，為其在臨床上的推廣運(yùn)用提供了理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2019-01-08 編輯：劉斌）