血清miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平對肝硬化失代償期患者的診斷價值

宋賢超

（商丘市第四人民醫(yī)院普外科，河南 商丘 476000）

乙型肝炎肝硬化失代償期是慢性乙型肝炎、肝纖維化發(fā)展的最終結(jié)局之一[1]。研究顯示，3%的乙型肝炎患者出現(xiàn)失代償期肝硬化，疾病進一步惡化可發(fā)展為原發(fā)性肝癌，5年生存率只有30%左右[2]。所以早診斷早治療，抑制病情進展對于改善肝硬化失代償期患者的預(yù)后質(zhì)量有重要價值。miR-143、miR-145、AFP以及AFP-L3是臨床上常用的肝硬化診斷指標。本研究比較慢性乙肝肝硬化失代償期患者與慢性乙肝患者miR-143、miR-145、AFP、AFP-L3的表達水平，為慢性乙肝肝硬化失代償期患者的臨床診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月—2017年2月我院收治的慢性乙肝肝硬化失代償期患者30例為研究組，選取同期收治的慢性乙肝患者30例為對照組，納入標準：均符合《實用醫(yī)學(xué)》中肝硬化失代償期的診斷標準[3]，并根據(jù)臨床表現(xiàn)等確診；HBeAg陽性患者HBV DNA≥105拷貝/mL，HBeAg陰性患者HBV DNA≥104拷貝/mL；所有病例符合Child-Pugh分級B級和C級。排除標準：合并其他惡性腫瘤患者；合并自身免疫系統(tǒng)疾病患者；妊娠或哺乳期患者。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 檢測miR-143、miR-145無菌操作下分別抽取兩組患者靜脈血3 mL，離心處理之后分離血清，應(yīng)用微量離心管儲存，常溫條件下持續(xù)水浴3 min之后，取200 μL，根據(jù)miR RNA試劑盒說明書完成提取。根據(jù)miRNAcDNA第一鏈合成試劑盒（KR211）說明書要求，將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反轉(zhuǎn)錄體系的配制：解凍2×miRNA RT Reaction Bu ff er并混勻，miRNA RT Enzyme Mix放于冰中備用，在冰上預(yù)冷RNaseFree的反應(yīng)管內(nèi)加入 2×miRNA RT Reaction Bu ff er 10 μL、miRNA RT EnzymeMix 2 μL 至總體積 20 μL（最后加入 miRNA RT Enzyme Mix）。重復(fù)進行3次實驗，反應(yīng)完成之后分析PCR曲線，計算miR-143、miR-145值[4]。

1.2.2 AFP以及AFP-L3檢測方法AFP-L3檢測應(yīng)用吸附離心管法，其中試劑為熱景生物公司生產(chǎn)。AFP檢測應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法，儀器為雅培公司生產(chǎn)，試劑為儀器配套試劑盒[5]。

1.3 觀察指標

比較兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比較

研究組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平比較

3 討論

乙型肝炎肝硬化失代償期的并發(fā)癥比較多，預(yù)后質(zhì)量較差，病死率居高不下，給患者的生命健康以及生活質(zhì)量帶來嚴重不良影響[6]。失代償期的患者長期使用NUC治療能夠有效改善患者的血清學(xué)狀況以及病毒學(xué)狀況，從而避免患者出現(xiàn)失代償期并發(fā)癥例如肝性腦病以及肝細胞癌等。但HBV閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）無法得到完全清除，因此乙肝肝硬化失代償期的患者需要長期堅持進行抗病毒治療。在臨床治療的過程當(dāng)中，一方面需要規(guī)范化進行抗病毒治療，另一方面還需要遵循個體化的原則，根據(jù)患者的經(jīng)濟條件、病情狀況、不良反應(yīng)、藥物特點以及治療依從性等，合理選擇治療方案以及治療時機，同時全程對患者的抗病毒治療加強管理，從而獲得最為理想的治療效果。這就需要準確診斷從而為抗病毒治療提供指導(dǎo)。

微小RNA(miRNA)是一種單鏈RNA，長約為20個左右核糖核苷酸。少數(shù)miRNA同腫瘤疾病的出現(xiàn)存在密不可分的聯(lián)系。傳統(tǒng)上研究人員分析惡性腫瘤組織內(nèi)部miRNA的時候，需要使用病理組織切片，隨著技術(shù)的進步，研究人員發(fā)現(xiàn)血清中也存在miRNA，且腫瘤血清當(dāng)中miRNA含量同健康人群存在明顯差異，可作為特異性腫瘤標記物[7]。也有研究人員認為miR-143、miR-145表達在慢性乙肝患者當(dāng)中明顯下調(diào)，同時在乙肝肝硬化標本當(dāng)中明顯上調(diào)[8]。本研究結(jié)果顯示，肝硬化失代償期患者的miR-143、miR-145水平均顯著高于慢性乙肝患者（P＜0.05），說明miR-143、miR-145水平同患者病情存在顯著相關(guān)性，這是因為乙肝肝硬化失代償期患者肝細胞HBV存在持續(xù)復(fù)制傾向，同時肝臟結(jié)構(gòu)中腫瘤細胞數(shù)量明顯增多，導(dǎo)致miR-143、miR-145水平上升[9-10]。

甲胎蛋白（AFP）是臨床上常用的一種血清學(xué)標志物，研究人員普遍認為血清AFP水平同肝臟疾病存在著密不可分的聯(lián)系，正常肝組織當(dāng)中的肝細胞AFP水平比較低甚至完全檢測不出，但是在肝硬化患者組織以及肝炎患者組織當(dāng)中，AFP含量水平上升異常明顯，同時在肝癌組織當(dāng)中上升的幅度最高。但AFP在早期肝硬化失代償期患者診斷中靈敏度較低，只有50%左右的患者呈現(xiàn)AFP陽性。通常情況下，AFP作為肝硬化失代償期患者早期診斷的血清學(xué)標志之一，敏感度為40%左右，特異度為80%左右[11]，所以單純借助于AFP用來監(jiān)測預(yù)警肝硬化失代償期存在著一定程度的限制。上世紀七十年代，研究人員借助于凝膠電泳分離得到AFP異質(zhì)體，后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)AFP-L3超過10%同肝硬化失代償期患者存在顯著相關(guān)性，可作為早期診斷的重要標志物，因此AFP-L3檢測對于肝硬化失代償期患者的早期診斷有重要的價值。本研究結(jié)果顯示，研究組AFP和AFP-L3水平均顯著高于對照組（P＜0.05）。說明慢性乙肝肝硬化失代償期患者的AFP、AFP-L3水平高于慢性乙肝患者，可作為檢測疾病進展的標志物。

綜上所述，肝硬化失代償期患者的血清miR-143、miR-145、AFP和AFP-L3水平顯著上升，積極采取治療措施，有利于改善患者預(yù)后質(zhì)量。