醋栗番茄LA2093漸滲系的構(gòu)建及花序相關(guān)性狀QTL分析

周艷朝,蔣芳玲,孫敏濤,劉 帥,文軍琴,李思琦,薛靈姿,吳 震

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 華東地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 南京 210095)

番茄(SolanumlycopersicumL.或LycopersiconesculentumMill.)是茄科(Solanaceae)番茄屬(Lycopersicom)草本植物,是一種重要的世界性蔬菜。因其具有風(fēng)味獨(dú)特、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn),在世界各地被廣泛栽培和食用,在鮮食和加工蔬菜供應(yīng)中占有重要地位。栽培番茄在許多果實(shí)特性如形狀和大小等方面表現(xiàn)出廣泛的變異性[1]。但總體來看,栽培番茄遺傳背景狹窄,僅顯示有限的基因型和變異表型。栽培番茄的祖先櫻桃番茄從起源地南美向中美洲和歐洲傳播過程中,其遺傳多樣性大量喪失。長期馴化和現(xiàn)代育種的“瓶頸”效應(yīng)使得栽培番茄的遺傳背景日益狹窄[2],甚至缺乏必要的育種資源。據(jù)統(tǒng)計(jì),番茄栽培種僅占番茄基因庫總遺傳變異性的5%[3]。相反,番茄野生種因其在農(nóng)業(yè)和生物學(xué)的重要特性上具有豐富的遺傳多樣性,成為改善番茄栽培性狀的有益變異來源[4]。早在20世紀(jì)40年代,與栽培番茄相近的野生種就被用于抗病基因的挖掘,進(jìn)行番茄抗病育種[5]。番茄野生種是番茄進(jìn)行遺傳改良的優(yōu)異基因庫。醋栗番茄(S.pimpinellifolium),又稱細(xì)葉番茄,是與栽培番茄最近的一個(gè)野生近緣種,與栽培番茄雜交親和,容易通過有性雜交實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移,且具備栽培番茄所缺乏的優(yōu)異性狀,已被廣泛用于果實(shí)品質(zhì)[6-7]以及抗病性(番茄黃花曲葉病[8]、疫霉病[9]等)的改良。已鑒定出在醋栗番茄LA2093的第7和12染色體上兩個(gè)控制番茄紅素的主要QTL位點(diǎn)(lyc7.1和lyc12.1)[10]。醋栗番茄種已經(jīng)被鑒定為非生物脅迫基因的潛在來源[11-12]。

隨著作圖群體和分子標(biāo)記輔助選擇(marker-assisted selection， MAS)的快速發(fā)展,挖掘野生資源基因庫中的有益基因成為現(xiàn)代作物育種的重要途徑,這將突破傳統(tǒng)育種遺傳背景狹窄的瓶頸限制。漸滲系(Introgression lines, ILs)是一組含有相同遺傳背景,僅在個(gè)別染色體片段上存在差異的株系。構(gòu)建漸滲系是將重要農(nóng)藝性狀從野生近緣種轉(zhuǎn)移到栽培番茄種的優(yōu)良途徑,其能夠解決栽培番茄遺傳背景狹窄、必要農(nóng)藝性狀匱乏的問題。理想的漸滲系是單片段漸滲系,除了一個(gè)滲入片段來自供體親本外,基因組的其他部分全部與受體親本相同,并且通常背景回復(fù)率超過95%,從而避免一些可能的不育性以及栽培種和野生種雜交中所遇的不良連鎖阻力效應(yīng)等問題。理想的漸滲系群體,漸滲系和受體親本間的任何表現(xiàn)型差異均可認(rèn)為由此滲入片段引起,因此可被看作單因素的孟德爾因子,是進(jìn)行QTL定位的優(yōu)良材料[13]。Wehrhahn和Allard(1965)首先構(gòu)建了小麥的漸滲系,并利用含有較短供體親本滲入片段的回交自交系有效地進(jìn)行單個(gè)QTL效應(yīng)的估計(jì)[14]。隨后的幾十年中,在水稻、番茄、油菜、甘藍(lán)、玉米、甜瓜等作物上都相繼構(gòu)建了漸滲系[15]。

迄今為止,番茄漸滲系的構(gòu)建已有報(bào)道,如利用野生番茄S.pennelliiLA716[16]、S.habrochaitesLA1777[17]、S.lycopersicoidesLA2951[18]、S.habrochaitesLYC4[19]、S.pennelliiLA716[15]和S.pimpinellifoliumTO-937[20]等分別構(gòu)建了比較完整的漸滲系群體。但國內(nèi)番茄漸滲系群體研究起步較晚,而且多利用潘那利番茄漸滲系進(jìn)行研究,以醋栗番茄為供體構(gòu)建漸滲系的研究鮮見報(bào)道。遺傳圖譜是構(gòu)建漸滲系的基礎(chǔ),但在漸滲系構(gòu)建過程中,多數(shù)研究者僅參考公共數(shù)據(jù)庫中已有的高密度遺傳圖譜進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇,從而篩選單片段漸滲系,雖省時(shí)省工,但部分分子標(biāo)記順序的差異會(huì)影響一些片段數(shù)目及大小的準(zhǔn)確檢測[13]。有研究者證明,先構(gòu)建遺傳連鎖圖譜再篩選單片段漸滲系,結(jié)果更可靠[21-22]?；ㄐ蛐誀钍欠旬a(chǎn)量的重要構(gòu)成因素,利用高代回交群體進(jìn)行花序相關(guān)性狀的QTL研究也較少。鑒于此,本研究以野生醋栗番茄LA2093(S.pimpinellifolium)為父本,以栽培番茄‘Jina’(S.lycopersicum)為母本,利用InDel、SSR 標(biāo)記在BC1代先構(gòu)建遺傳連鎖圖譜,在此基礎(chǔ)上,通過回交結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇，建立了一套以‘Jina’為遺傳背景、含LA2093基因的漸滲系群體,并利用BC3F1群體對花序相關(guān)性狀進(jìn)行了QTL初步定位。醋栗番茄LA2093漸滲系的構(gòu)建可為挖掘野生番茄的優(yōu)異基因提供新的遺傳材料,為番茄重要農(nóng)藝性狀的遺傳機(jī)理剖析提供基礎(chǔ)群體,對指導(dǎo)番茄分子育種具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與群體構(gòu)建

1.1.1 試驗(yàn)材料 本研究所用材料為野生醋栗番茄LA2093(S.pimpinellifolium)和栽培番茄‘Jina’(S.lycopersicum),均由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜生理生態(tài)實(shí)驗(yàn)室保存。

供體親本:醋栗番茄LA2093,從美國加州大學(xué)番茄遺傳資源中心(Tomato Genetics Resource Center, TGRC)引進(jìn)。其為無限生長型,株型為蔓性,莖葉茸毛短稀。花柱長于雄蕊,花序類型為單式花序,始花節(jié)位為3～5節(jié)位,單花序花數(shù)可達(dá)20～30朵；果實(shí)呈圓形,成熟果紅色,單果重1.02 g左右,可溶性固形物含量在7.2%左右,早熟,耐裂果、耐熱性強(qiáng)。

受體親本:栽培番茄‘Jina’,從荷蘭引進(jìn)并經(jīng)6代以上自交篩選的純合優(yōu)良品系。其為無限生長型,株型為半蔓性,莖葉茸毛短密?；ㄐ蝾愋蜑槎嗥缁ㄐ?始花節(jié)位為7～8節(jié)位,單花序數(shù)可達(dá)35～45朵；果實(shí)呈長圓形,成熟果紅色,單果重15.32 g左右,可溶性固形物含量在9.8%左右。

1.1.2 群體構(gòu)建過程 在2016年3月,以醋栗番茄LA2093為父本,以栽培番茄為母本配制雜交組合并收取F1代種子;在2017年3月，以‘Jina’為母本,以其F1為父本進(jìn)行回交,得到BC1代種子,2017年8月播種BC1代。從BC1代起利用InDel、SSR分子標(biāo)記進(jìn)行全基因組檢測。經(jīng)過GGT軟件分析后,在2018年3月,從BC1代84個(gè)株系中挑選出18個(gè)株系,將其播種后組成378株的BC2代群體。重復(fù)上述方法,在2018年8月,從BC2代378個(gè)株系中挑選出20個(gè)株系,播種組成420株BC3代群體,篩選留種株系,自交得到BC3S1代種子。

1.2 性狀調(diào)查與統(tǒng)計(jì)

在BC3F1群體中,對415個(gè)單株的首花序節(jié)位(node below the first inflorescence, Nfi)、花序間隔節(jié)位(node of interval inflorescence, Nii)、單花序花數(shù)(number of flowers per inflorescence, Nfpi)進(jìn)行調(diào)查與統(tǒng)計(jì),調(diào)查方法參照《番茄種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》。

1.3 分子標(biāo)記篩選

引物序列信息選自前人[23-25]開發(fā)的200對SSR引物、597對InDel引物。利用父母本及F1篩選均勻分布于12條染色體的多態(tài)性標(biāo)記。

采用改良的CTAB法提取DNA。10 μL PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系含基因組DNA(10 ng/μL) 2 μL、2×TSINGKE Master Mix 5 μL、正向和反向引物(50 ng/μL)各0.4 μL,以ddH2O補(bǔ)足至10 μL。PCR擴(kuò)增程序:94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性15 s，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s，共循環(huán)34次;72 ℃ 5 min;16 ℃保存。聚丙烯酰胺凝膠電泳后,進(jìn)行銀染檢測,顯色后在熒光燈下統(tǒng)計(jì)引物多態(tài)性數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

比對父母本的帶型,若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物帶型與‘Jina’一致則記為‘a(chǎn)’；若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物帶型與LA2093一致則記為‘b’；將雜合帶型記為‘h’,將缺失的記錄為‘-’。利用選擇的親本間多態(tài)性SSR、InDel分子標(biāo)記,對BC1群體的141個(gè)單株的基因型數(shù)據(jù)進(jìn)行收集,應(yīng)用Joinmap 4.0構(gòu)建遺傳連鎖圖譜。

根據(jù)Young和Tanksley(1989)的方法計(jì)算代換片段的長度[26]。不考慮兩個(gè)相鄰標(biāo)記區(qū)間發(fā)生的雙交換事件,當(dāng)染色體上相鄰標(biāo)記的基因型相同時(shí),認(rèn)為這兩個(gè)標(biāo)記之間的區(qū)段由相同的標(biāo)記基因型組成;當(dāng)相鄰標(biāo)記的基因型不同時(shí),就認(rèn)為這兩個(gè)標(biāo)記基因型分別組成這個(gè)區(qū)間的一半。

基因型作圖采用 Berloo(2008)開發(fā)的 GGT(2.0)作圖軟件[27],按照軟件的要求將EXCEL原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成GGT數(shù)據(jù)格式，然后導(dǎo)入到GGT(2.0)版基因型作圖軟件中,分析染色體內(nèi)野生滲入片段大小及其所占基因組的比例,并繪出全部單株基因型圖示,從而篩選合適的單株材料。

選擇標(biāo)準(zhǔn):(1)入選的單株含有供體親本LA2093的滲入片段盡可能少,最好只含有1個(gè)片段,但片段長度盡可能較長；(2)所有當(dāng)選單株含有的野生番茄片段盡可能覆蓋整個(gè)基因組。入選單株授粉后留種下一代播種；(3)對于出現(xiàn)的雙交換片段的單株,給予淘汰。

采用Microsoft Excel 2016軟件進(jìn)行花序相關(guān)性狀的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。用WinQTLcart 2.5軟件進(jìn)行QTL定位,采用復(fù)合區(qū)間作圖法以LOD2.5作為QTL位點(diǎn)閾值,對花序相關(guān)性狀進(jìn)行分析研究。

2 結(jié)果與分析

2.1 番茄遺傳圖譜的構(gòu)建

利用受體親本(栽培番茄‘Jina’)和供體親本(醋栗番茄LA2093)進(jìn)行多態(tài)性引物的篩選,從200對SSR引物與597對InDel引物中,篩選出了189對多態(tài)性引物,親本間多態(tài)性為23.71%。圖1為部分標(biāo)記在親本間的檢測結(jié)果。采用189對親本多態(tài)性引物對BC1F1群體內(nèi)141個(gè)單株基因分型的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析；采用作圖軟件Joinmap 4.0構(gòu)建了1張總長1243.80 cM、含158對多態(tài)性InDel與SSR分子標(biāo)記的遺傳圖譜(其中InDel標(biāo)記137對,SSR標(biāo)記21對,刪除了31對在群體擴(kuò)增條帶差異性不明顯或圖譜構(gòu)建中未能連鎖的標(biāo)記),該圖譜包含12個(gè)連鎖群,對應(yīng)番茄的12條染色體,平均遺傳圖距為7.87 cM(表1)。

2.2 追蹤標(biāo)記在染色體組上的分布情況

從所構(gòu)建的番茄遺傳連鎖圖譜中,每10～30 cM選取1個(gè)標(biāo)記,共選取96個(gè)多態(tài)性標(biāo)記(InDel標(biāo)記82個(gè),SSR標(biāo)記14個(gè))用于群體構(gòu)建過程中追蹤染色體的變化,這些標(biāo)記在染色體上的具體位置見圖2。每條染色體上標(biāo)記數(shù)為5～11個(gè),平均8個(gè)；兩個(gè)標(biāo)記間平均圖距在9.22～16.86 cM;標(biāo)記間平均遺傳距離為12.96 cM,共覆蓋番茄染色體組1243.80 cM。兩個(gè)標(biāo)記間最小間距為2.30 cM,間距大于30 cM的有8處,其中最長間距在3號染色體C03M0078與C03M03542之間,長度為47.80 cM。

第1孔道為MARKER；隨后每3個(gè)孔道為1對引物。

圖2 96個(gè)標(biāo)記在染色體上的具體位置與遺傳距離

表1 標(biāo)記在遺傳圖譜上的分布

2.3 BC3代滲入片段在染色體組的分布情況

依據(jù)單株選擇標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過3代回交并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇,將BC3代415個(gè)單株基因型數(shù)據(jù)導(dǎo)入GGT(2.0)分析后,留選了51份互相重疊、完全覆蓋12條染色體的漸滲系材料,其中單片段材料為14份,雙片段材料27份,三片段材料10份。滲入片段總長度為3497.80 cM,滲入片段數(shù)為98個(gè),平均單個(gè)滲入片段長度為35.69 cM,完全覆蓋12條染色體。51份漸滲系的滲入片段在染色體組的具體位置詳見圖3。

從圖3和表2可看出,51份漸滲系材料的滲入片段數(shù)在12條染色體上分布不均勻,平均每條染色體上滲入8.17個(gè)片段。其中1號染色體上的滲入片段數(shù)最多，為14個(gè),滲入片段總長度為517.10 cM;5號染色體上的片段最少，為2 個(gè),滲入片段總長度為116.30 cM。98個(gè)滲入片段長度在3.35～110.00 cM,其中最長片段位于3號染色體上,長度為110.00 cM；最短片段位于2號染色體末端,長度為3.35 cM。

在51份漸滲系材料中，野生染色體片段平均占受體基因組大小的5.6%,每份材料平均滲入片段總長度為69.65 cM。第48號材料基因組含有的野生片段比例最高，為14.2%；第36號材料基因組含有的野生片段比例最低，僅為0.3%。

圖3 51份漸滲系的滲入片段在染色體組上的具體位置

表2 滲入片段在染色體上的分布及覆蓋情況

2.4 QTL分析結(jié)果

利用復(fù)合區(qū)間作圖法(CIM)對BC3F1群體的首花序節(jié)位、花序間隔節(jié)位、單花序花數(shù)進(jìn)行QTL定位,共檢測到6個(gè)QTL,其中控制首花序節(jié)位的有2個(gè)，控制花序間隔節(jié)位的有3個(gè)，控制單花序花數(shù)的有1個(gè),這些QTL分布于第1、2、4、6、9、12染色體上(表3)。

檢測到2個(gè)與首花序節(jié)位相關(guān)的QTL位點(diǎn)：Nfi2.1和Nfi9.1,分別分布于第2、9染色體上,貢獻(xiàn)率分別為7.16%和5.51%;與花序間隔節(jié)位相關(guān)的QTL位點(diǎn)有3個(gè),分布于第1、4、6染色體上,其中,Nii1.1與Nii4.1的貢獻(xiàn)率均大于40%,Nii6.1的貢獻(xiàn)率為4.33%;與單花序花數(shù)相關(guān)的QTL位點(diǎn)Nfpi12.1位于第12染色體上,其貢獻(xiàn)率為8.09%。其中1個(gè)與首花序節(jié)位相關(guān)的QTL位點(diǎn)Nfi9.1的加性效應(yīng)為0.64,說明來源于醋栗番茄LA2093首花序節(jié)位的等位基因在該位點(diǎn)起增效作用;其他5個(gè)QTL位點(diǎn)的加性效應(yīng)值均為負(fù)值,說明源于醋栗番茄LA2093的等位基因起減效作用。

3 討論

在漸滲系構(gòu)建過程中,親本材料的選擇決定了漸滲系群體的質(zhì)量。本研究中選擇的供體親本材料醋栗番茄LA2093,具有優(yōu)良的抗病性、非生物脅迫抗性以及較高的番茄紅素含量等[10,28-30],受體親本‘Jina’經(jīng)多年自交選育后綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)良。構(gòu)建的漸滲系成功將醋栗番茄LA2093的片段滲入到栽培番茄‘Jina’中,可解決栽培番茄遺傳背景狹窄的問題并可深入挖掘更多的優(yōu)良農(nóng)藝性狀。并且這些漸滲系材料覆蓋了整個(gè)野生番茄基因組,是在栽培番茄‘Jina’遺傳背景上構(gòu)建的野生番茄基因組文庫,可通過聚合育種加快多個(gè)優(yōu)良基因聚合,培育出具有更多優(yōu)良性狀的新品種,縮短育種周期,實(shí)現(xiàn)育種目標(biāo)。

表3 BC3F1群體中花序相關(guān)性狀QTL定位分析結(jié)果

遺傳圖譜是構(gòu)建漸滲系的基礎(chǔ)。本研究的構(gòu)建方法是先篩選多態(tài)性引物,利用BC1群體構(gòu)建遺傳圖譜,并采用分子標(biāo)記在回交世代同時(shí)進(jìn)行前景和背景選擇,使野生番茄片段在BC3世代時(shí)占受體基因組的相應(yīng)比例由理論值12.5%降為5.6%。李學(xué)峰利用分子標(biāo)記在回交世代同時(shí)進(jìn)行前景和背景選擇,也將野生黃瓜片段在BC3世代時(shí)基因組中相應(yīng)比例降為7.8%[31]。相比于參考已有高密度遺傳圖譜再進(jìn)行漸滲系篩選的方法,該方法保證了標(biāo)記順序的準(zhǔn)確性。另外在構(gòu)建漸滲系過程中,若只檢測目標(biāo)片段,則可能會(huì)導(dǎo)致部分片段殘留[32]。本研究在各回交世代除對候選漸滲系的目標(biāo)片段進(jìn)行前景檢測外,還對染色體其他部位的遺傳背景進(jìn)行檢測,防止了入選單株中存在漏檢的殘留片段。

漸滲系作為永久性的遺傳群體在當(dāng)前的植物育種中被廣泛應(yīng)用。單片段漸滲系消除了遺傳噪音與QTL互作之間的干擾,穩(wěn)定且不會(huì)分離,可進(jìn)行多年多點(diǎn)的重復(fù)實(shí)驗(yàn),保證了QTL的準(zhǔn)確性與可靠性;可辨別是否存在有利等位基因,為挖掘作物野生資源的有利等位基因、研究基因功能、進(jìn)行遺傳改良提供了新的工具與材料[33]。張桂權(quán)等[34]構(gòu)建了1529個(gè)染色體單片段代換系(CSSL),通過對代換片段的基因鑒定和定位,篩選獲得了包括植株形態(tài)、稻米品質(zhì)、產(chǎn)量、抗病性、生育期等重要性狀共2000多個(gè)優(yōu)良基因(QTL)。本研究留選了以栽培番茄‘Jina’為遺傳背景的51個(gè)含有1～3個(gè)供體片段的番茄漸滲系。從滲入片段分布情況來看,含有單片段的漸滲系為14份,這些材料可自交以獲得純合株系；而其余材料需要繼續(xù)回交,以獲得更多的單片段材料。此外,某些滲入片段長度較大,究其原因,主要是篩選的多態(tài)性標(biāo)記較少,使遺傳圖譜的密度不夠,也就是在BC1世代構(gòu)建的圖譜不夠完善,這也說明雖然本研究的滲入片段在染色體組的覆蓋率為100%,但仍有可能有一定的片段檢測不到。而Arbelaez J D等在水稻的BC3F1DH代利用GBS技術(shù)基因分型提供的標(biāo)記密度超過原始SSR標(biāo)記的600倍[22],大大提高了檢測的準(zhǔn)確性與精確性,省時(shí)省工。綜上,接下來可通過兩種方法進(jìn)行改善:(1)繼續(xù)篩選標(biāo)記,將使標(biāo)記間平均距離加密到5 cM以內(nèi),進(jìn)一步保證檢測的準(zhǔn)確性;(2)利用GBS(genotyping-by-sequencing)簡化基因組測序技術(shù)對群體進(jìn)行基因分型,以提高標(biāo)記密度,檢測前期因InDel、SSR標(biāo)記密度稀疏而未檢測到的供體滲入片段,并準(zhǔn)確定義目標(biāo)片段的滲入位置與大小。這樣可以獲得一整套理想的覆蓋番茄全基因組的漸滲系,為復(fù)雜性狀QTL分析及有效轉(zhuǎn)育供體親本LA2093中優(yōu)異性狀的QTL/基因到其他番茄品種提供理想材料。

花序節(jié)位與單花序花數(shù)作為番茄的重要農(nóng)藝性狀,是番茄產(chǎn)量的重要構(gòu)成因子,對指導(dǎo)番茄育種具有重要意義。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多與番茄花發(fā)育相關(guān)的基因,包括花分生組織特征基因FA[35]、花序分生組織特征基因SFT[36]以及合軸分生組織特征基因SP[37]等。SFT/SP比率調(diào)節(jié)開花與分枝,并決定了番茄生殖和營養(yǎng)分生組織中的生長與終止平衡,影響番茄產(chǎn)量[38]。近年來,通過QTL定位挖掘番茄花發(fā)育相關(guān)基因的研究已有報(bào)道。田小琴[39]利用F2群體將控制番茄花序間隔節(jié)位的兩個(gè)QTLs(qN1SU-1-1和qN1SU-1-2)定位在1號染色體上。位江靜等[40]利用F2群體檢測出控制始花節(jié)位的3個(gè)QTLs，它們均分布在第1染色體上。李景富等[41]利用F2群體檢測出控制番茄始花節(jié)位的7個(gè)QTLs，分布在第1、2、5和11條染色體上。劉楊等[42]利用146個(gè)番茄重組自交系群體在第2、11和12染色體上檢測到3個(gè)與首花序節(jié)位有關(guān)的QTLs,在第6、10和12染色體上檢測到3個(gè)與每花序花數(shù)有關(guān)的QTLs。本研究利用高代回交BC3F1群體在第1、4和6染色體上檢測到與花序間隔節(jié)位相關(guān)的3個(gè)QTLs,在第2、9染色體上檢測到與首花序節(jié)位相關(guān)的2個(gè)QTLs,在第12染色體上檢測到與單花序花數(shù)相關(guān)的1個(gè)QTL。利用高代回交群體進(jìn)行農(nóng)藝性狀定位,與利用F2、BC1和RIL群體相比,它使得QTL的檢測和有利等位基因的導(dǎo)入相結(jié)合,可以消除供體不利基因?qū)亟缓蟠硇偷挠绊慬43]。許多研究表明AB-QTL(Advanced backcross QTL analysis)分析法對野生資源中有利基因的發(fā)掘是可行的[24,43]。為了保證本研究QTL結(jié)果的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性,我們接下來準(zhǔn)備繼續(xù)加密圖譜,通過對花序性狀數(shù)據(jù)進(jìn)行多年多點(diǎn)采集,并通過回交構(gòu)建這些QTL的近等基因系,驗(yàn)證所定位QTL的真實(shí)性,為多個(gè)有利等位基因的進(jìn)一步聚合提供材料。

4 結(jié)論

本研究以野生醋栗番茄LA2093(S.pimpinellifolium)和栽培番茄‘Jina’(S.lycopersicum)為材料,在BC1代構(gòu)建了一張總長1243.80 cM、含158對多態(tài)性InDel與SSR分子標(biāo)記的遺傳連鎖圖譜；以此為基礎(chǔ),在BC3代留選了51份互相重疊、完全覆蓋12條染色體的漸滲系材料,其中單片段材料14份,雙片段材料27份,三片段材料10份;同時(shí)利用BC3F1群體檢測到與首花序節(jié)位、花序間隔節(jié)位、單花序花數(shù)3個(gè)農(nóng)藝性狀相關(guān)的6個(gè)QTL位點(diǎn),單個(gè)位點(diǎn)貢獻(xiàn)率為4.33%～47.93%。