竹黃菌與竹紅菌的化學成分及細胞毒活性比較研究

陳月桂，劉艷春，郭 凱，黎勝紅*，牛雪梅

1云南大學化學科學與工程學院，昆明 650091；2中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，昆明 650201；3云南大學 省部共建云南生物資源保護與利用國家重點實驗室，昆明 650091

竹黃菌(ShiraiabambusicolaP.Henn)屬于真菌界、子囊菌亞門、肉座菌科、竹黃屬，其子座竹黃又稱竹花、竹三七等[1]，主要分布于我國浙江、安徽、四川、云南等南部各省，日本和斯里蘭卡也有分布[2]，可生長于海拔1 500米以下的苦竹、短穗竹和雷竹等竹林下[3,4]。竹黃是一種民間藥材，具有止咳祛痛、舒筋活絡、祛風利濕、散瘀通經(jīng)等功效[2]，民間用于治療中風、小兒驚風、風濕性關節(jié)炎、跌打損傷等病癥[5]。

竹紅菌Hypocrellabanbusae(Berk.et Br.) Sacc.同屬肉座菌科[6]，但為亞肉座菌屬真菌。竹紅菌分布于云南西北部和西藏東南部地區(qū)[7]，生長于海撥2 600～3 500米的亞高山、高山箭竹林下，是用于治療類風濕關節(jié)炎、胃病和真菌感染皮膚病的傳統(tǒng)中藥[8]。竹紅菌的乙醇提取物已應用于臨床，竹紅菌素軟膏用于治療外陰白色病變、瘢痕疙瘩、外陰瘙癢及外陰炎。

竹黃菌和竹紅菌兩種竹寄生真菌子座的外觀顏色有較大差別，前者子座為粉紅色，而后者子座為黑色，二者野生資源匱乏，目前尚不能人工培養(yǎng)，市場上二者混用。國內外對竹黃菌的研究較多，但對竹紅菌的研究主要集中于竹紅菌素的生物活性方面，其它化學成分報道較少。因此，本研究對竹黃菌和竹紅菌子座的化學成分及主要成分的細胞毒活性進行了比較研究，以期找出這兩種藥用真菌的相同和差異成分，探討它們細胞毒活性的差異，為兩種真菌資源的開發(fā)利用提供參考。

1 儀器與材料

Bruker avance III-400和 AV600 核磁共振儀(瑞士Bruker公司)，Waters XEVO TQ-S超高壓液相色譜三重四極桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀(美國Waters Crop.公司)，全波長酶標儀(美國MD公司)。

Sephadex LH-20凝膠(瑞典Amersham Biosciences公司)、硅膠(青島海洋化工廠)、GF254-TLC(青島海洋化工廠)、胎牛血清(以色列FBS實驗室)、RPMI-1640(美國HyClone實驗室)、氨芐青霉素和鏈霉素(以色列BI公司)等，提取分離用試劑為工業(yè)用試劑重蒸處理，HPLC用試劑為默克色譜純乙腈。細胞系：人肺腺癌細胞(NCI-H1975)購自中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫，人肝癌細胞(HepG2)受贈于昆明理工大學黃芬教授，人乳腺癌細胞(MCF-7)受贈于中國科學院昆明植物研究所李艷研究組，Taxol來為本實驗室從云南紅豆杉中分離所得，MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy methoxyphenyl)-2-(4-sulfopheny)-2H-tetrazolium)購自Promega公司。

竹黃菌和竹紅菌樣品由中國科學院昆明植物研究所劉培貴研究員提供，經(jīng)王向華副研究員鑒定，憑證標本竹黃菌(HKAS 59237)和竹紅菌(HKAS 59236)存于中國科學院昆明植物研究所標本館。

2 實驗內容

2.1 高效液相色譜(HPLC)分析

樣品制備：竹黃菌和竹紅菌子座分別用液氮速凍、研磨成粉末，分別稱取0.5 g用甲醇(10 mL)超聲提取20 min，減壓濃縮后用甲醇定容成1 mL備用，兩者各設置三個平行實驗。HPLC分析條件：Aglient 1200系統(tǒng)，Aglient Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4 μm，4.6 × 150 mm)，CH3CN-H2O流動相(0～30 min：5%～95%，v/v)，37 ℃柱溫，5 μL進樣體積， 1 mL/min流速，210 nm檢測波長。

2.2 提取與分離

干燥的竹黃菌子座(1.28 kg)粉碎后用甲醇(5 L)室溫冷浸提取4次，每次48 h，減壓濃縮得甲醇提取物浸膏196 g。浸膏加蒸餾水(2 L)溶解，依次用石油醚(6 L)、乙酸乙酯(6 L)萃取，萃取液減壓濃縮蒸干得石油醚部分75 g和乙酸乙酯部分43 g。乙酸乙酯部分用硅膠(200～300目)拌樣，經(jīng)硅膠柱層析以氯仿-丙酮(0∶1，30∶1，15∶1，5∶1，1∶1，0∶1)梯度洗脫，薄層層析檢測并合并相同組分，再經(jīng)硅膠反復柱層析分離和Sephadex LH-20凝膠柱層析純化，得到化合物1(162.1 mg)、2(97.7 mg)、3(74.4 mg)、5(119.2 mg)、7(3.0 mg)、8(5.7 mg)、9(15.7 mg)、10(16.3 mg)和11(3.5 mg)。

干燥的竹紅菌子座(542 g)粉碎后用甲醇(4 L)室溫冷浸提取6次，每次48 h，減壓濃縮得甲醇提取物浸膏110 g。以硅膠(200～300目)拌樣后經(jīng)硅膠柱層析以氯仿-丙酮(1∶0、20∶1、5∶1、0∶1)梯度洗脫，薄層層析檢測并合并相同組分，再經(jīng)硅膠反復柱層析分離和Sephadex LH-20凝膠柱層析純化得到化合物1(142.3 mg)、2(39.2 mg)、3(24.5 mg)、4(3.5 mg)、6(108.1 mg)、7(15.3 mg)、8(9.5 mg)和9(20.0 mg)。

2.3 體外腫瘤細胞毒活性測定

NCI-H1975、HepG2、MCF-7均用含10%胎牛血清、100 units/mL 氨芐青霉素 及100 μg/mL 鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。采用MTS法測定化合物1、5和6對三株腫瘤細胞的細胞毒活性。腫瘤細胞按照5×103/孔接種于96孔板中，于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。實驗組細胞分別用不同濃度的化合物進行處理，以紫杉醇為陽性對照，置培養(yǎng)箱中同一條件繼續(xù)孵育72 h后，終止培養(yǎng)，去除孔中的培養(yǎng)液，每孔加入100 μL新鮮培養(yǎng)液，其中含20 μL MTS，混合均勻，37 ℃孵育1 h，測定OD490，根據(jù)檢測結果計算化合物對各腫瘤細胞存活率，按Reed & Muench法計算IC50值。

3 實驗結果

3.1 HPLC分析結果

HPLC分析結果(圖1)顯示，竹黃菌有5個主要色譜峰，竹紅菌有4個主要色譜峰，其中3個主要色譜峰為兩者共有。跟蹤分離鑒定化合物并進行HPLC比對分析發(fā)現(xiàn)，3個相同的主要色譜峰分別為竹紅菌甲素(1)、竹紅菌乙素(2)和竹紅菌丙素(3)；竹黃菌的2個特異色譜峰之一為11,11′-二去氧沃替西林(5)，另一個(11.72 min)未分離得到；竹紅菌的1個特異色譜峰為灰黃霉素(6)(圖2)。另外還分離得到化合物4、7～11(圖2)，但在竹紅菌與竹黃菌的甲醇提取物HPLC色譜圖中未顯示色譜峰，推測由于含量較低導致。

圖1 竹紅菌與竹黃菌的甲醇提取物及分離 鑒定化合物的HPLC比對分析Fig.1 Comparison of the HPLC profiles of the methanol extracts of Shiraia bambusicola and Hypocrella bambusae and the isolated authentic compounds注：HPLC檢測條件：Aglient 1200色譜儀，Aglient Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4 μm，4.6 × 150 mm)，CH3CN-H2O 流動相(0～30 min：5%～95%，v/v)， 37 ℃柱溫，1 mL/min流速，210 nm檢測波長。Note:HPLC conditions:Aglient 1200 instrument;column:Aglient Poroshell 120 EC-C18 (4 μm,4.6 × 150 mm);mobile phase:CH3CN-H2O (0-30 min:5%-95%,v/v); column temperature:37 ℃;flow rate:1 mL/min; detection wavelength:210 nm.

3.2 結構鑒定

化合物1紅黑色塊狀結晶(CHCl3)，分子式C30H26O10；1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:15.95 (1H,s,3-OH),15.91 (1H,s,10-OH),6.55 (1H,s,H-8),6.53 (1H,s,H-5),4.10 (3H,s,11-OCH3),4.10 (3H,s,2-OCH3),4.06 (3H,s,6-OCH3),4.06 (3H,s,7-OCH3),3.51 (1H,d,J= 12.1 Hz,H-13a),3.45 (1H,s,H-15),2.62 (1H,d,J= 11.9 Hz,H-13b),1.89 (3H,s,CH3-18),1.70 (3H,s,CH3-16)；13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:207.2 (s,C-17),180.1 (s,C-4 or C-9),179.6 (s,C-9 or C-4),171.5 (s,C-3 or C-10),170.6 (C-10 or C-3),167.2 (s,C-6 or C-7),167.2 (s,C-7 or C-6),150.6 (s,C-2 or C-11),150.4 (s,C-11 or C-2),133.7 (s,C-12),132.9 (s,C-1),128.2(s,C-12a),127.4 (s,C-1a),124.7 (s,C-3b or C-7b),124.7 (s,C-7b or C-3b),118.0 (s,C-6a),117.5 (s,C-7a),106.8 (s,C-3a or C-9a),106.6 (s,C-9a or C-3a),101.8 (d,C-5 or C-8),101.7 (d,C-8 or C-5),78.5 (s,C-14),61.8 (q,2-OCH3),61.4 (d,C-15),60.5 (q,11-OCH3),56.3 (q,6-OCH3),56.2 (d,7-OCH3),41.6 (t,C-13),29.9 (q,CH3-18),26.7 (q,CH3-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9,10]報道基本一致，故確定化合物1為竹紅菌甲素(hypocrellin A)。

圖2 化合物1～11的化學結構Fig.2 The chemical structures of compounds 1-11

化合物2紅黑色塊狀結晶(CHCl3)，分子式C30H26O10；1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:6.56 (1H,s,H-8),6.55 (1H,s,H-5),4.27 (3H,s,11-OCH3),4.18 (3H,s,2-OCH3),4.07 (3H,s,6-OCH3),4.07 (3H,s,7-OCH3),3.73 (1H,s,H-15),3.67 (1H,d,J= 13.8 Hz,H-13a),2.34 (1H,d,J= 13.8 Hz,H-13b),1.83 (3H,s,CH3-18),1.78 (3H,s,CH3-16)；13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:206.4 (s,C-17),179.8 (s,C-9 or C-4),179.4 (s,C-4 or C-9),171.5 (s,C-3 or C-10),171.4 (s,C-10 or C-3),167.4 (s,C-6 or C-7),167.0 (s,C-7 or C-6),151.6 (s,C-2 or C-11),148.9 (s,C-11 or C-2),134.8 (s,C-12),131.0 (s,C-1),128.0 (s,C-12a),127.6 (s,C-1a),125.1 (s,C-3b or C-7b),124.2 (s,C-7b or C-3b),106.8 (s,C-9a),106.4 (s,C-3a),101.9 (d,C-5 or C-8),101.5 (d,C-8 or C-5),78.3 (s,C-14),64.0 (d,C-15),61.6 (q,2-OCH3),60.7 (q,11-OCH3),56.3 (q,6-OCH3),56.2 (q,7-OCH3),42.2 (t,C-13),28.2 (q,CH3-18),24.5 (q,CH3-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9,10]報道基本一致，故確定化合物2為竹紅菌乙素(hypocrellin B)。

化合物3紅黑色塊狀結晶(CHCl3)，分子式C30H24O9；1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:6.43 (1H,s,H-5),6.42 (1H,s,H-8),4.15 (1H,s,11-OCH3),4.08 (3H,s,2-OCH3),4.05 (3H,s,6-OCH3),4.05 (3H,s,7-OCH3),4.05 (1H,d,J= 11.5 Hz,H-13a),3.22 (1H,d,J= 11.5 Hz,H-13b),2.37 (3H,s,CH3-18),1.84 (3H,s,CH3-16)；13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:199.9 (s,C-17),185.7 (s,C-4 or C-9),185.6 (s,C-9 or C-4),168.1 (s,C-3 or C-10),167.8 (s,C-10 or C-3),164.7 (s,C-6 or C-7),163.2 (s,C-7 or C-6),149.3 (s,C-2 or C-11),146.5 (s,C-11 or C-2 ),134.3 (s,C-12),133.9 (s,C-1),124.0 (s,C-12a),123.9 (s,C-1a),123.7 (s,C-3b or C-7b),123.3 (s,C-7b or C-3b),123.0 (s,C-6a),121.8 (s,C-7a),108.5 (s,C-9a),107.2 (s,C-3a),103.0 (d,C-5 or C-8),102.9 (d,C-8 or C-5),61.1 (q,2-OCH3),60.9 (q,11-OCH3),56.4 (q,6-OCH3),56.3 (q,7-OCH3),34.5 (t,C-13),29.2 (q,CH3-18),20.5 (q,CH3-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9,10]報道基本一致，故確定化合物3為竹紅菌丙素(hypocrellin C)。

化合物4棕紅色固體，分子式C30H26O12；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:13.48 (1H,s,10-OH),13.42 (1H,s,3-OH),6.24 (1H,s,H-5),6.24 (1H,s,H-8),4.08 (3H,s,2-OCH3),3.89 (3H,s,11-OCH3),3.88 (3H,s,6-OCH3),3.88 (3H,s,7-OCH3),3.36 (1H,s,H-15),3.08 (1H,d,J= 12.6 Hz,H-13a),2.02 (3H,s,CH3-18),1.92 (1H,d,J= 12.7 Hz,H-13b),1.30 (3H,s,CH3-16)；13C NMR (150 MHz,CD3COCD3)δ:207.7 (s,C-17),193.0 (s,C-4),192.7 (s,C-9),179.5 (s,C-6a),179.4 (s,C-7a),163.2 (s,C-6),162.9 (s,C-7),155.2 (s,C-3),155.1 (s,C-10),152.3 (s,C-2),152.0 (s,C-11),137.1 (s,C-12a),136.7 (s,C-1a),135.2 (s,C-12),132.7 (s,C-1),125.5 (s,C-3b),124.4 (s,C-7b),116.2 (s,C-9a),115.5 (s,C-3a),109.2 (d,C-5),109.0 (d,C-8),78.7 (s,C-14),61.5 (q,2-OCH3),61.3 (q,11-OCH3),58.4 (d,C-15),57.4 (q,6-OCH3),57.4 (q,7-OCH3),39.1 (t,C-13),30.6 (q,CH3-18),26.6 (q,CH3-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故確定化合物4為竹紅菌丁素(hypocrellin D)。

化合物5淡黃色固體，分子式C30H28N6O4S4，ESI-MS：m/z687 [M+Na]+，可推得相對分子量為664；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:7.39 (2H,d,J= 7.5 Hz,H-10,10′),7.21 (2H,t,J= 7.6 Hz,H-8,8′),6.88 (2H,t,J=7.4 Hz,H-9,9′),6.74 (2H,d,J= 7.8 Hz,H-7,7′),5.34 (2H,s,H-6,6′),5.32 (2H,s,H-5a,5′a),3.84 (2H,d,J= 15.1 Hz,H-11a,11′a),2.97 (6H,s,CH3-12,CH3-12′),2.72 (2H,d,J= 15.1 Hz,H-11b,11′b),1.88 (6H,s,CH3-13,CH3-13′)；13C NMR (150 MHz,CD3COCD3)δ:165.5 (s,C-1),162.4 (s,C-4),149.2 (s,C-6a),130.1 (d,C-8),127.6 (s,C-10a),125.1 (d,C-10),119.8 (d,C-9),110.5 (d,C-7),80.5 (d,C-5a),73.5 (s,C-11a),73.0 (s,C-3),59.6 (s,C-10b),39.5 (t,C-11a),27.3 (q,CH3-12),17.4 (q,CH3-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5,11]報道基本一致，故確定化合物5為11,11′-二去氧沃替西林(11,11′-dideoxyverticillin)。

化合物6無色片狀結晶(CH3COCH3)，分子式C17H17ClO5；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:6.54 (1H,s,H-5),5.54 (1H,s,H-3′),4.10 (3H,s,4-OCH3),3.98 (3H,s,6-OCH3),3.68 (3H,s,2′-OCH3),2.82 (2H,m,H-5′),2.35 (1H,m,H-6′),0.91 (3H,d,J= 5.9 Hz,6′-CH3)；13C NMR (150 MHz,CD3COCD3)δ:196.1 (s,C-4′),192.3 (s,C-3),171.6 (s,C-2′),170.3 (s,C-7a),165.8 (s,C-6),159.0 (s,C-4),105.8 (s,C-3a),105.4 (d,C-3′),97.1 (s,C-7),91.6 (d,C-1′),91.4 (s,C-5),58.0 (q,4-OCH3),57.4 (q,2′-OCH3),57.0 (q,6-OCH3),40.8 (t,C-5′),37.3 (d,C-6′),14.6 (q,6′-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5,12]報道基本一致，故確定化合物6為灰黃霉素((+)-griseofulvin)。

化合物7淡黃色針狀結晶(CH3COCH3)，分子式C14H10O5；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:13.45 (1H,s,8-OH),9.71 (1H,br s,3-OH),9.65 (1H,br s,6-OH),6.71 (2H,br s,H-2,4),6.31 (1H,br s,H-5),6.19 (1H,br s,H-7),2.79 (3H,s,1-CH3)；13C NMR (150 MHz,CD3COCD3)δ:183.0 (s,C-9),165.5 (s,C-10a),165.0 (s,C-6),163.5 (s,C-8),160.3 (d,C-4a),158.1 (s,C-3),144.5 (s,C-1),117.0 (d,C-2),112.7 (s,C-1a),103.8 (s,C-9a),101.5 (d,C-4),98.8 (d,C-7),94.0 (d,C-5),23.5 (q,1-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故確定化合物7為3,6,8-三羥基-1-甲基口山酮(3,6,8-trihydroxy-1-methylanthone)。

化合物8淡黃色針狀結晶(CH3COCH3)，分子式C15H12O5；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:13.42 (1H,s,8-OH),9.72 (1H,s,3-OH),6.73 (1H,d,J= 1.9 Hz,H-2 ),6.73 (1H,d,J= 0.8 Hz,H-4),6.43 (1H,d,J= 2.3 Hz,H-5),6.27 (1H,d,J= 2.3 Hz,H-7),3.92 (3H,s,6-OCH3),2.79 (3H,s,1-CH3)；13C NMR (150 MHz,CD3COCD3)δ:183.4 (s,C-9),167.3 (s,C-6),164.9 (s,C-10a),163.8 (s,C-3),160.6 (s,C-4a),158.1 (s,C-8),144.8 (s,C-1),117.2 (d,C-2),112.9 (s,C-1a),104.6 (s,C-9a),101.8 (d,C-4),97.8 (d,C-7),92.8 (d,C-5),56.5 (q,6-OCH3),23.6 (q,1-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故確定化合物8為3,8-二羥基-6-甲氧基-1-甲基口山酮(3,8-dihydroxy-6-methoxy-1-methylanthone)。

化合物9無色針狀結晶(CH3COCH3)，分子式C28H44O3；1H NMR (400 MHz,CD3COCD3)δ:6.49 (1H,d,J= 8.5 Hz,H-6),6.23 (1H,d,J= 8.5 Hz,H-7),5.28 (1H,dd,J= 15.1,7.43 Hz,H-23),5.21 (1H,dd,J= 15.3,7.9 Hz,H-22),3.77 (1H,ddd,J= 16.3,10.9,5.2 Hz,H-3),1.03 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-19),0.93 (3H,d,J= 6.6 Hz,CH3-21),0.89 (3H,s,CH3-28),0.86 (3H,s,CH3-26),0.84 (3H,s,CH3-27),0.83 (3H,s,CH3-18)；13C NMR (100 MHz,CD3COCD3)δ:135.6 (d,C-6),135.5 (d,C-22),131.9 (d,C-23),130.2 (d,C-7),81.5 (s,C-5),78.5 (s,C-8),65.3 (d,C-3),56.1 (d,C-17),51.8 (d,C-14),51.5 (d,C-9),44.3 (s,C-13),42.8 (d,C-24),39.7 (d,C-20),39.3 (t,C-12),37.1 (t,C-4),36.9 (s,C-10),34.8 (t,C-1),32.9 (d,C-25),30.2 (t,C-2),28.3 (t,C-16),23.1 (t,C-11),20.4 (q,CH3-21),19.4 (q,CH3-26),19.0 (q,CH3-27),17.6 (q,CH3-19),17.1 (q,CH3-28),12.3 (q,CH3-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故確定化合物9為過氧麥角甾醇(ergosterol peroxide)。

化合物10白色固體，分子式C28H46O3；1H NMR (400 MHz,CD3OD)δ:5.36 (1H,m,H-7),5.23 (1H,dd,J= 15.3,7.6 Hz,H-23),5.16 (1H,dd,J= 15.3,8.3 Hz,H-22),4.08 (1H,m,H-3),3.66 (1H,br d,J= 4.8 Hz,H-6),1.09 (3H,s,CH3-19),1.03 (3H,d,J= 6.6 Hz,CH3-21),0.92 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-28),0.84 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-27),0.82 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-26),0.60 (3H,s,CH3-18)；13C NMR (150 MHz,CD3OD)δ:144.2 (s,C-8),135.6 (d,C-22),132.4 (d,C-23),117.7 (d,C-7),76.2 (s,C-5),73.9 (d,C-6),67.9 (d,C-3),56.2 (d,C-17),55.0 (d,C-14),44.0 (s,C-9),43.7 (d,C-13),43.0 (d,C-24),40.6 (d,C-20),39.7 (t,C-12),39.4 (t,C-4),37.4 (s,C-10),33.3 (d,C-25),33.2 (t,C-2),31.1 (t,C-1),28.1 (t,C-16),23.1 (t,C-11),22.3 (t,C-15),21.3 (q,CH3-21),20.2 (q,CH3-26),19.9 (q,CH3-27),19.1 (q,CH3-19),17.8 (q,CH3-28),12.6 (q,CH3-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道基本一致，故確定化合物10為麥角甾-7,22E-二烯-3β,5α,6β-三醇(ergosta-7,22E-dien-3β,5α,6β-triol)。

化合物11無色棒狀結晶(CH3OH)，分子式C28H46O3；1H NMR (400 MHz,CD3OD)δ:5.23 (1H,dd,J= 15.4,7.2 Hz,H-23),5.20 (1H,dd,J= 15.3,7.7 Hz,H-22),4.98 (1H,s,H-7),3.89 (1H,m,H-3),1.04 (3H,d,J= 6.6 Hz,CH3-21),0.97 (3H,s,CH3-19),0.94 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-28),0.86 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-26),0.84 (3H,d,J= 6.8 Hz,CH3-27),0.60 (3H,s,CH3-18)；13C NMR (150 MHz,CD3OD)δ:143.0 (s,C-8),137.1 (d,C-22),133.4 (d,C-23),120.8 (d,C-7),77.0 (s,C-9),71.4 (d,C-2),68.2 (d,C-3),57.4 (d,C-17),56.0 (d,C-14),44.8 (s,C-13),44.7 (d,C-24),44.5 (d,C-5),42.0 (d,C-20),40.8 (t,C-12),39.9 (t,C-1),39.8 (s,C-10),34.5 (d,C-25),32.9 (t,C-4),31.7 (t,C-6),29.4 (t,C-16),23.9 (t,C-11),22.4 (t,C-15),21.8 (q,CH3-21),20.6 (q,CH3-26),20.2 (q,CH3-27),18.5 (q,CH3-19),18.4 (q,CH3-28),12.8 (q,CH3-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道基本一致，故確定化合物11為麥角甾-7,22E-二烯-2β,3α,9α-三醇(ergosta-7,22E-diene-2β,3α,9α-triol)。

3.3 體外抗腫瘤活性結果

如表1所示，化合物5對人肺腺癌細胞NCI-H1975、人肝癌細胞HepG2及人乳腺癌細胞MCF-7均具有很強的細胞毒活性，IC50值均小于0.64 μM；化合物1對三株腫瘤細胞均具有較強的細胞毒活性，IC50值為1.32～1.48 μM；化合物6對NCI-H1975和HepG2細胞具有微弱的細胞毒活性，而對MCF-7細胞未顯示活性。

表1 化合物對不同腫瘤細胞株的半數(shù)生長抑制濃度IC50(μM)Table 1 Cytotoxicity of compounds against different cancer cell lines,IC50 (μM)

4 討論

本研究從兩種真菌子座中分離得到6個相同化合物，即化合物1～3、7～9。首次從竹黃菌子座中分離得到化合物10和11，首次從竹紅菌子座中分離得到化合物4、6～8。研究結果表明，竹黃菌和竹紅菌子座主要化學成分(尤其是竹紅菌素類)相同。此外，房立真等[10]亦從竹黃菌中分離到化合物4，劉雙柱等[5]從竹黃菌中分離得到化合物6，因此竹黃菌與竹紅菌可能含有更多相同或類似成分。

竹黃菌和竹紅菌共有的主要成分化合物1具有較強抗腫瘤活性，竹黃菌特有成分化合物5具有很強抗腫瘤活性，而竹紅菌特有成分化合物6活性較弱，表明竹黃菌可能比竹紅菌具有更好抗腫瘤應用前景。此外，本研究還對化合物1、5和6進行了體外抗炎及免疫抑制活性篩選，發(fā)現(xiàn)當濃度分別為0.1、0.02、10 μmol/L時，3個化合物對小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞和人T細胞Jurkat均未顯示明顯的細胞毒活性，對LPS誘導的RAW264.7細胞產生的TNF-α和MCP-1以及PHA/PMA誘導的Jurkat產生的IL-2也沒有明顯抑制活性。本研究對竹黃菌和竹紅菌資源的開發(fā)利用提供了參考。