側(cè)耳屬3個種菌種培養(yǎng)基配方優(yōu)化

王慶武 唐麗娜 崔 曉 安秀榮

（山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安271000）

平菇（Pleurotus osreatus）、杏鮑菇（Pleurotus eryngii）、秀珍菇（Pleurotus pulmonarius）[1]隸屬側(cè)耳屬（Pleurotusspp.），是目前我國栽培量較大、發(fā)展較快、分布較廣的一種食用菌菌類[2]，3個種的栽培較為廣泛，栽培面積逐年增加[3]。為了掌握側(cè)耳屬3個主要栽培種的母種及擴繁種適宜培養(yǎng)基配方及含水量，了解不同培養(yǎng)基上菌絲的生長發(fā)育特性[4]，筆者對其母種菌絲培養(yǎng)的適宜碳氮源和擴繁種配方及培養(yǎng)基含水量進行了相關(guān)研究，旨在為側(cè)耳屬3個種菌種擴繁提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株與培養(yǎng)基

供試菌株為泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院自主保藏菌株平菇99、秀珍菇2、杏鮑菇5。碳源試驗基礎(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨0.2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，瓊脂2%[1]。氮源試驗基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，瓊脂2%[1]。

擴繁種供試培養(yǎng)基配方見表1。

表1 供試擴繁種培養(yǎng)基配方 %%

1.2 試驗方法

1.2.1 適宜碳源試驗

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入2%的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖、淀粉組成碳源供試培養(yǎng)基，制作9 cm平板培養(yǎng)基，接入1塊邊長4 mm的菌種塊，置于25～26℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，每處理5次重復(fù)。

1.2.2 適宜氮源試驗

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入0.2%的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4、NH4NO3、麩皮組成氮源供試培養(yǎng)基，試驗方法同1.2.1。

1.2.3 適宜碳氮配比

在碳氮源試驗基礎(chǔ)上，獲得最佳碳氮源，采用L9（34）法進行正交試驗，試驗方法同1.2.1。因素水平見表3、表4、表5。

1.2.4 擴繁種培養(yǎng)基配方優(yōu)化

以棉籽殼、玉米芯為主原料，組成10個配方，將培養(yǎng)料分別裝入850 mL塑料菌種瓶中，高壓滅菌后無菌條件下接入1塊邊長1.5 cm母種塊，置于25～26℃培養(yǎng)室中暗培養(yǎng)，每處理5次重復(fù)。

1.2.5 擴繁種培養(yǎng)基含水量優(yōu)化

將優(yōu)化得到的3個種最佳擴繁種配方培養(yǎng)基含水量分別設(shè)置為46%、48%、50%、52%、54%、56%、58%、60%、62%、64%、66%、68%、70%共13個處理，試驗方法同1.2.4。

1.2.6 菌落測量方法

采用“十”字交叉法測量菌落直徑，計算各處理菌絲日長速，分析各處理對菌絲生長的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 碳源試驗結(jié)果

不同碳源對側(cè)耳菌絲生長速度及生長勢的影響見表1。

由表1試驗結(jié)果可見，平菇菌絲在供試碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是果糖、蔗糖、淀粉、葡萄糖、麥芽糖、乳糖，除乳糖外菌絲長勢均好；秀珍菇在供試碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是果糖、淀粉、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖，菌絲在蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖、淀粉培養(yǎng)基上長勢均好，葡萄糖次之；杏鮑菇菌絲在供試碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是淀粉、蔗糖、乳糖、麥芽糖、果糖、葡萄糖，除乳糖外菌絲長勢均好。

2.2 氮源試驗結(jié)果

不同氮源對側(cè)耳屬3個種菌絲生長速度及長勢的影響見表2。

由表2試驗結(jié)果可見，平菇菌絲在供試氮源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是酵母膏、（NH4）2SO4、牛肉膏、麩皮、蛋白胨、NH4NO3；菌絲長勢由好到差依次是蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4、NH4NO3、麩皮。秀珍菇菌絲在供試氮源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是酵母膏、蛋白胨、麩皮、牛肉膏、（NH4）2SO4、NH4NO3；菌絲長勢由好到差依次是牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、NH4NO3、（NH4）2SO4、麩皮。杏鮑菇菌絲在供試氮源培養(yǎng)基上菌絲生長速度由快到慢依次是麩皮、牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、（NH4）2SO4、NH4NO3；菌絲長勢由好到差依 次 是 蛋 白 胨 、牛 肉 膏 、酵 母 膏 、（NH4）2SO4、NH4NO3、麩皮。

表1 不同碳源對供試側(cè)耳菌絲生長的影響

表2 不同氮源對供試側(cè)耳屬菌絲生長的影響

2.3 菌絲培養(yǎng)適宜碳氮配比試驗結(jié)果

由表6可以看出，4個單因子對平菇菌絲生長的影響順序為 A＞D＞B＞C，蔗糖影響最大，其次是牛肉膏、淀粉，酵母膏影響最小。極差分析結(jié)果表明，平菇菌絲生長的最佳碳、氮源配比為A1B1C2D2。

4個單因子對秀珍菇菌絲生長的影響順序為A＞C＞D＞B，淀粉影響最大，其次是酵母膏、蛋白胨，蔗糖影響最小。極差分析結(jié)果表明，秀珍菇菌絲生長的最佳碳、氮源配比為A1B2C3D2。

4個單因子對杏鮑菇菌絲生長的影響順序為A＞D＞C＞B，淀粉影響最大，其次是酵母膏、牛肉膏，蔗糖影響最小。極差分析結(jié)果表明，杏鮑菇菌絲生長的最佳碳、氮源配比為A3B3C2D3。

表3 平菇菌絲培養(yǎng)適宜碳氮比正交試驗因素水平%%

表4 秀珍菇菌絲培養(yǎng)適宜碳氮比正交試驗因素水平%%

表5 杏鮑菇菌絲培養(yǎng)適宜碳氮比正交試驗因素水平%%

2.4 擴繁種培養(yǎng)基配方優(yōu)化結(jié)果

試驗結(jié)果見表7。

由表7可見，配方4平菇菌絲長速最快，達到7.9 mm/d，其次是配方5、配方6、配方7、配方8、配方9；配方1、配方2、配方3、配方4菌絲長勢最好，其他配方次之。配方5秀珍菇菌絲長速最快，達到5.2 mm/d，其次是配方6、配方7、配方8、配方10、配方9；配方1、配方2、配方3、配方4菌絲長勢最好，其他配方次之。配方5杏鮑菇菌絲長速最快，達到4.9 mm/d，其次是配方4、配方6、配方3、配方7、配方8；配方1、配方2、配方3、配方4、配方5、配方6菌絲長勢最好，其他配方次之。

表6 L9（34）正交試驗結(jié)果

表7 供試配方擴繁側(cè)耳屬菌種結(jié)果

圖1 不同含水量培養(yǎng)基擴繁菌種發(fā)菌比較

2.5 擴繁種培養(yǎng)基含水量優(yōu)化結(jié)果

試驗結(jié)果見表8。

表8 擴繁種培養(yǎng)基不同含水量試驗結(jié)果

由表8可見，培養(yǎng)基含水量60%平菇菌絲長速最快，達7.6 mm/d，其次是培養(yǎng)基含水量58%、56%、54%、62%；培養(yǎng)基含水量52%、54%、56%、58%、60%、62%菌絲長勢最好，其他含水量次之。培養(yǎng)基含水量56%秀珍菇菌絲長速最快，達6.6 mm/d，其次是培養(yǎng)基含水量58%、54%、60%、52%；培養(yǎng)基含水量52%、54%、56%、58%、60%、62%菌絲長勢最好，其他含水量次之。培養(yǎng)基含水量60%杏鮑菇菌絲長速最快，達4.7 mm/d，其次是培養(yǎng)基含水量58%、56%；培養(yǎng)基含水量 52%、54%、56%、58%、60%、62%菌絲長勢最好，其他含水量次之。

3 小結(jié)與討論

試驗表明，側(cè)耳屬3個種菌種菌絲在不同碳、氮源培養(yǎng)基上長速和長勢均有差異，綜合菌絲長速、長勢及原料成本，結(jié)合生產(chǎn)實踐，平菇菌絲適宜碳源為蔗糖、淀粉，氮源為酵母膏、牛肉膏；秀珍菇菌絲適宜碳源為淀粉、蔗糖，氮源為酵母膏、蛋白胨；杏鮑菇菌絲適宜碳源為淀粉、蔗糖，氮源為牛肉膏、酵母膏。乳糖及無機氮（NH4）2SO4、NH4NO3均不利于側(cè)耳菌絲生長。

菌絲生長需要適宜的碳氮源配比[5]，根據(jù)極差分析結(jié)果，平菇菌絲最佳碳、氮源配比為蔗糖1%，淀粉0.5%，酵母膏0.2%，牛肉膏0.3%；秀珍菇菌絲最佳碳、氮源配比為淀粉1%，蔗糖1%，酵母膏0.3%，蛋白胨0.3%；杏鮑菇菌絲最佳碳、氮源配比為淀粉3%，蔗糖1.5%，牛肉膏0.2%，酵母膏0.4%。

培養(yǎng)基配方會影響擴繁種的純度和活力，培養(yǎng)基營養(yǎng)不足，菌種生長稀疏、活力差；培養(yǎng)基營養(yǎng)過于豐富，易感染雜菌，影響菌種純度；配方單一，營養(yǎng)不全，也影響菌絲生長。試驗中隨玉米芯添加量的逐步增加，菌絲生長速度由慢變快；當(dāng)玉米芯添加到一定量時，菌絲生長速度達到最快；玉米芯添加量繼續(xù)增加時，菌絲生長速度由快變慢，菌絲長勢也是如此，較適宜平菇、秀珍菇為配方4，較適宜杏鮑菇為配方5。

培養(yǎng)基含水量過高或過低[6]，均影響擴繁種菌絲生長。培養(yǎng)基含水量過低，菌絲長速慢、長勢差，且培養(yǎng)基濕熱滅菌不徹底，也易引起雜菌感染[7]；培養(yǎng)基含水量過高，培養(yǎng)基內(nèi)氧氣不足，菌絲長速慢、長勢差；適宜的培養(yǎng)基含水量，菌絲長速快、長勢好、污染率低。試驗中平菇擴繁種培養(yǎng)基較適宜含水量為58%～60%，秀珍菇擴繁種培養(yǎng)基較適宜含水量為54%～60%，杏鮑菇擴繁種培養(yǎng)基較適宜含水量為58%～60%。