虎奶菇菌絲生物學特性研究

吳小建 陳雪鳳 余春麗 韋仕巖 王燦琴 郎 寧 吳圣進*

（1廣西農(nóng)業(yè)科學院微生物研究所，廣西南寧530007；2賀州學院，廣西賀州542800）

虎奶菇（Pleurotus tuber-regium）屬擔子菌亞門層菌綱傘菌目側耳科側耳屬，是熱帶、亞熱帶地區(qū)的一種珍稀藥食兩用真菌[1]（圖1），適合在我國南方地區(qū)栽培，但目前虎奶菇的栽培地區(qū)主要分布在江西、福建等地，栽培面積也不大。有關虎奶菇的生物學特性與栽培研究已有較多報道，20世紀80年代，黃年來等學者就已經(jīng)開展了虎奶菇的栽培研究[2]，此后，江枝和等[3-4]、阮瑞國[5]、丁湖廣[6]相繼開展了虎奶菇生物學特性研究。栽培技術方面，張傳利等將咖啡殼應用到虎奶菇菌種生產(chǎn)中獲得成功，咖啡殼的添加量達到40%[7]。魏云輝等利用稻草配比棉籽殼、玉米芯、木屑栽培虎奶菇獲得成功[8]。但不同的研究報道之間存在較大差異，且生物學特性研究以考察影響菌核產(chǎn)量及各類成分含量的因素為主，針對菌絲生長條件的研究較少，栽培原料以木屑、棉籽殼為主，針對南方地區(qū)豐富的蔗渣、木薯渣、桑枝的原料適應性研究鮮有報道。筆者研究進一步考察虎奶菇菌絲生物學特性，明確碳氮源種類和濃度、培養(yǎng)溫度、初始pH、含水量等對其生長的影響，探索利用蔗渣、木薯渣、桑枝、稻草等南方地區(qū)常見原料為主料栽培虎奶菇的可行性，為其在南方地區(qū)推廣栽培提供理論依據(jù)和技術支持。

圖1 虎奶菇

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株

虎奶菇1號，由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學院微生物研究所提供。

1.1.2 供試原料與培養(yǎng)基

供試栽培料木屑、棉籽殼、木薯渣、蔗渣、玉桂木屑、桑枝、稻草、麩皮、石灰均由廣西農(nóng)業(yè)科學院微生物所食用菌菌種中心提供。

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18～22 g，加水1000 mL，pH自然。

碳源試驗基礎培養(yǎng)基：蛋白胨 3 g，KH2PO41.5 g，MgSO40.5 g，瓊脂 20 g，加水1000 mL，pH自然。

氮源試驗基礎培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，KH2PO41.5 g，MgSO40.5 g，瓊脂 20 g，加水1000 mL，pH自然。

1.2 試驗方法

1.2.1 溫度對菌絲生長的影響

將虎奶菇菌絲接種至PDA培養(yǎng)皿后分別在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和45℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。采用十字交叉法測定菌絲生長速度（菌絲生長速度=菌落半徑/培養(yǎng)天數(shù)），定期觀察并記錄菌絲長勢。每個處理設5個重復。

1.2.2 初始pH對菌絲生長的影響

配制PDA培養(yǎng)基，分別調(diào)整pH至4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5和9.0，滅菌后再分別倒平板。每個處理設5個重復。接種后的平板于30℃恒溫培養(yǎng)，采用十字交叉法測定菌絲生長速度（菌絲生長速度=菌落半徑/培養(yǎng)天數(shù)），定期觀察并記錄菌絲長勢。

1.2.3 培養(yǎng)基含水量對菌絲生長的影響

培養(yǎng)基配方：桑枝屑78%、麩皮20%、白糖1%、石灰1%，設置料含水量分別為50%、55%、60%、65%、70%、75%和80%7個處理。料分別裝入24 mm×200 mm試管，松緊一致，每個處理5個重復。滅菌、接種后置于30℃溫室，直立培養(yǎng)，待菌絲定植料面后再改為臥放。定期觀察菌絲生長情況，記錄其長勢，采用劃線法測量菌絲生長速度（菌絲生長速度=菌絲生長長度/培養(yǎng)天數(shù)）。

1.2.4 不同碳源和碳源濃度對虎奶菇菌絲生長的影響

以碳源試驗基礎培養(yǎng)基為對照，在碳源試驗基礎培養(yǎng)基中分別加20 g/L的果糖、可溶性淀粉、乳糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖、木糖、麥芽糖、甘露糖和玉米粉，制成平板，每個處理5個重復。接種后30℃恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲生長情況，篩選最適碳源。以篩選到的最適碳源制作碳源濃度為10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L和60 g/L 平板，每個處理5個重復。接種后于30℃恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲生長情況。

1.2.5 不同氮源和氮源濃度對虎奶菇菌絲生長的影響

以氮源試驗基礎培養(yǎng)基為對照，在氮源試驗基礎培養(yǎng)基中分別加3 g/L的麥芽浸粉、硫酸銨、尿素、蛋白胨、碳酸銨、牛肉膏、硝酸鉀、硝酸銨和酵母膏。制成平板，每個處理5個重復。接種后于30℃恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲生長情況，篩選出最適氮源。以篩選到的最適氮源制作氮源濃度為1 g/L、2 g/L、3 g/L、4 g/L、5 g/L和6 g/L平板，每個處理5個重復。接種后于30℃恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲生長情況。

1.2.6 培養(yǎng)料主料菌絲適應性試驗

按照表1配方拌料，控制培養(yǎng)料含水量為65%，拌勻后裝入15 cm×33 cm聚丙烯袋，每袋裝料量為500 g（濕重），用無棉蓋體封口，注明編號，121℃滅菌2.5 h。每個配方設3個重復。

將滅菌的料袋放入超凈工作臺接種，每袋接種量約5 g，接種后于28℃恒溫培養(yǎng)，定期觀察記錄菌絲萌發(fā)時間、長勢、生長速度等。

表1 虎奶菇菌絲培養(yǎng)料主料適應性試驗配方 %%

2 結果與分析

2.1 虎奶菇菌絲培養(yǎng)溫度試驗結果

由表2和圖1可以看出，虎奶菇菌絲在培養(yǎng)溫度20～40℃均可生長，35℃時長勢最好，菌絲粗壯濃密，菌落潔白均勻，生長速度達到12.05 mm/d。其次為40℃，低溫15℃或高溫45℃菌絲不生長。培養(yǎng)溫度40℃時虎奶菇菌絲生長良好，表明其具有較強的高溫耐受性。

表2 溫度對虎奶菇菌絲生長的影響

2.2 培養(yǎng)基初始pH試驗結果

由表3可知，虎奶菇對pH的適應能力較強，菌絲在培養(yǎng)基初始pH 4.0～9.0均可生長，當pH為6.5時菌絲長勢最好，生長速度最快，其次為pH6.0；當培養(yǎng)基初始 pH為4.5、5.0、5.5、7.0、7.5時，菌絲長勢和生長速度無顯著差異；pH為4.0時菌絲稀疏，生長速度最慢，長勢最差。

圖1 不同培養(yǎng)溫度虎奶菇菌絲生長形態(tài)（培養(yǎng)5 d）

表3 培養(yǎng)基初始pH對虎奶菇菌絲生長的影響

2.3 培養(yǎng)基含水量試驗結果

由表4可看出，在含水量50%～75%的培養(yǎng)基中菌絲均能夠較好地生長。當培養(yǎng)基含水量為75%時，虎奶菇菌絲長速最快，達到3.25 mm/d；培養(yǎng)基含水量65%、70%和80%時菌絲生長速度差異不顯著。菌絲在含水量65%的培養(yǎng)基上的長勢最好，菌絲粗壯旺盛，潔白濃密。菌絲在含水量50%、55%、60%、75%的培養(yǎng)基上長勢差別不大，菌絲白，較濃密。在含水量80%的培養(yǎng)基上長勢最差，菌絲較稀疏，不均勻。由此可見，虎奶菇菌絲能生長的培養(yǎng)基含水量的范圍較廣，但最適培養(yǎng)基含水量為65%。

表4 培養(yǎng)料含水量對虎奶菇菌絲生長的影響

2.4 碳源試驗結果

由表5可知，虎奶菇菌絲在10種碳源培養(yǎng)基上均能生長，在葡萄糖為碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度最快，其次為蔗糖、玉米粉、果糖?；⒛坦皆谌樘?、半乳糖、木糖、甘露糖培養(yǎng)基上長勢差，菌絲生長速度不如對照，表明乳糖、半乳糖、木糖、甘露糖對虎奶菇菌絲的生長有一定的抑制作用。

表5 不同碳源對虎奶菇菌絲生長的影響

由表6可以看出，菌絲在含10 g/L葡萄糖培養(yǎng)基中生長最好，生長速度最快可達到9.67 mm/d?；⒛坦骄z生長速度隨著葡萄糖濃度的上升而下降，長勢也變差，當葡萄糖濃度為40 g/L、50 g/L和60 g/L時，菌絲長勢和生長速度差異不明顯。

表6 不同葡萄糖濃度對虎奶菇菌絲生長的影響

2.5 氮源試驗結果

由表7可以看出，虎奶菇菌絲在多數(shù)氮源培養(yǎng)基上均能生長，以麥芽浸粉為最佳，菌絲長勢較強，生長速度快，其次為碳酸銨。以硫酸銨、硝酸銨為氮源時菌絲生長速度慢，長勢差，在尿素培養(yǎng)基上菌絲不生長。

表7 不同氮源對虎奶菇菌絲生長的影響

由表8可以看出，虎奶菇菌絲在含4 g/L的麥芽浸粉培養(yǎng)基中生長最好，生長速度達到11.05 mm/d，長勢強，培養(yǎng)6 d就可滿皿，菌落均勻平整，潔白濃密。在含1 g/L麥芽浸粉培養(yǎng)基中菌絲生長最差。其他四個處理差異不顯著。

表8 不同麥芽浸粉濃度對虎奶菇菌絲生長的影響

2.6 虎奶菇菌絲對培養(yǎng)主料適應性

由表9可以看出，虎奶菇菌絲在以純桑枝為主料的（配方8）培養(yǎng)基上生長最快，生長速度達到5.11 mm/d，在以蔗渣和棉籽殼為主料（配方3）培養(yǎng)基上生長最慢，生長速度為2.90 mm/d。

表9 不同栽培原料對虎奶菇菌絲生長的影響

3 小結與討論

虎奶菇屬于高溫型珍稀藥食兩用真菌，有關虎奶菇的生物學特性與栽培研究已有較多報道，但不同的研究報道之間存在較大差異。如：江枝和等[3]研究認為虎奶菇菌絲生長最適溫度為32℃，《中國食藥用菌學》記錄虎奶菇菌絲40℃不生長[9]，阮瑞國[5]報道培養(yǎng)虎奶菇最適pH為7.5等。

研究結果顯示虎奶菇菌絲最適培養(yǎng)溫度35℃，40℃培養(yǎng)仍能生長，且長勢良好，45℃不生長；最適培養(yǎng)基初始pH 6.5；最適碳源為葡萄糖，最適濃度10 g/L，隨著葡萄糖濃度的增加，菌絲生長速度開始下降，長勢也變差；最適氮源為麥芽浸粉，最適濃度4 g/L，在尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上不生長。栽培原料的生長適應性試驗結果表明，菌絲在以純桑枝為主料培養(yǎng)基上生長最快，在以蔗渣和棉籽殼為主料的培養(yǎng)基上生長最慢。

虎奶菇屬高溫菌，南方地區(qū)有適宜其生長的氣候條件，此外，研究結果顯示虎奶菇菌絲對南方地區(qū)常見的原料蔗渣、木薯渣、玉桂木屑、稻草、桑枝具有較好的適應性，表明南方地區(qū)具有很好栽培虎奶菇的原料基礎。