急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性臨床分布特征及與血脂水平的相關(guān)性研究*

劉婷婷，史海峰，劉 靜

(北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，沈陽 110016)

急性腦血管病是一種起病急驟的腦部血管循環(huán)障礙性疾病，按其臨床表現(xiàn)及病理改變可以表現(xiàn)為短暫缺血性發(fā)作(transient ischemic attack，TIA)，腦血管血栓形成或血管栓塞致缺血性腦梗死，腦血管破裂產(chǎn)生腦出血。經(jīng)研究表明，急性腦血管病的發(fā)病率隨年齡增加而增加，其發(fā)病還與環(huán)境、飲食和遺傳等因素相關(guān)，脂質(zhì)代謝異常是重要的危險(xiǎn)因素。載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因，是負(fù)責(zé)產(chǎn)生多態(tài)性蛋白載脂蛋白E的基因，參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化和代謝過程，其基因多態(tài)性決定血脂水平[1-3]。ApoE基因位于19號(hào)染色體，主要有3種表現(xiàn)型E2，E3和E4，6種基因型ε3/ε3，ε2/ε2，ε4/ε4，ε2/ε3，ε2/ε4和ε3/ε4[4-6]。目前關(guān)于ApoE基因與腦血管疾病的研究相對(duì)較少，本研究通過收集北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院12個(gè)月311例急性腦血管病患者，采用焦磷酸測序技術(shù)檢測ApoE基因，旨在探討ApoE基因多態(tài)性在急性腦血管患者中的臨床分布特征，及其與血脂水平的相關(guān)性，為早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防和治療急性腦血管疾病提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1 研究對(duì)象 本次研究共收集2017年3月～2018年2月北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院就診并接受ApoE基因多態(tài)性檢測的急性腦血管病患者的EDTA-K2抗凝靜脈血311份，采用焦磷酸測序法對(duì)ApoE基因的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分析?；颊吣挲g在30～83歲，男性207例(66.6%)，女性104例(33.4%)。根據(jù)年齡將急性腦血管病患者分為三組：青年組(<45歲)27例(8.7%)、中年組(45～59歲)108例(34.7%)和老年組(≥60歲)176例(56.6%)。并根據(jù)臨床診斷將患者分為腦梗死組196例(63.0%)，腦出血組92例(29.6%)和TIA組23例(7.4%)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中國腦血管病防治指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有急性腦血管病患者均未服用他汀類或其它降脂藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：診斷不明確或未區(qū)分腦梗死、腦出血和TIA。本研究經(jīng)過北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有納入患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 DNA提取試劑盒及測序反應(yīng)通用試劑盒均購自長沙三濟(jì)生物科技有限公司，焦磷酸測序儀購自德國凱瑞，型號(hào)為PyroMark Q24 Vacuum workstation。全自動(dòng)生化分析儀購自美國貝克曼庫爾特，型號(hào)為AU5800。

1.3 方法

1.3.1 ApoE基因多態(tài)性檢測：采集EDTA-K2抗凝的受檢者肘靜脈血2 ml，采用血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。采用測序反應(yīng)通用試劑盒將雙鏈DNA樣本變性成單鏈DNA，置于Qiagen PyroMark Q24焦磷酸測序儀中檢測。

1.3.2 血脂測定：所有檢測對(duì)象早晨空腹采集靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min后取上清于全自動(dòng)生化分析儀，檢測樣本三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度。

2結(jié)果

2.1 急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性的分布 見表1。ApoE不同基因型在急性腦血管病患者中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=785.95，P=0.000)，其中以ε3/ε3野生基因型分布頻率最高，占69.1%，其次為雜合突變型ε2/ε3和ε3/ε4，分別為12.9%和15.1%，純合突變型ε2/ε2和ε4/ε4較為少見，占0.3%和1.0%。ApoE表現(xiàn)型在急性腦血管病患者中的分布差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=294.32，P=0.000)，以E3居多，占70.7%，E2與E4在急性腦血管病患者中分布相差不多，分別占13.2%和16.1%。

2.2 急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性在不同性別中的分布 見表1。根據(jù)性別對(duì)納入的急性腦血管病患者分組。急性腦血管病患者ApoE基因型在男女組間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.31，P=0.81)。此外，急性腦血管病患者ApoE表現(xiàn)型在男女組間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.37，P=0.83)?？梢?，急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性的分布可能與性別無關(guān)。

表1 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在不同性別中的分布[n(%)]

2.3 急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性在不同年齡中的分布 見表2。根據(jù)年齡將急性腦血管病患者分為三組：青年組(<45歲)、中年組(45～59歲)和老年組(≥60歲)。急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在各年齡組間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.08，P=0.89；χ2=3.30，P=0.51)。急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性分布可能與年齡無關(guān)。

表2 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在不同年齡中的分布[n(%)]

2.4 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在不同臨床診斷中的分布 見表3。在三組患者中的分布特征，急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在不同臨床診斷中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.54，P=0.92；χ2=0.71，P=0.95)。急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性的分布可能與其臨床診斷無關(guān)。

表3 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型在不同臨床診斷中的分布[n(%)]

2.5 不同ApoE基因型急性腦血管病患者血脂水平 見表4。不同ApoE基因型的急性腦血管病患者在TC，TG，HDL-C及LDL-C濃度水平上的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。ε4/ε4純合突變基因型的急性腦血管病患者其TG，TC及LDL-C濃度水平顯著高于其他基因型急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平低于其他基因型急性腦血管病患者。ε4/ε4基因型可能與血脂濃度水平密切相關(guān)。

表4 不同ApoE基因型急性腦血管病患者血脂水平的比較(mmol/L)

2.6 不同ApoE表現(xiàn)型急性腦血管病患者血脂水平的比較 見表5。不同ApoE表現(xiàn)型的急性腦血管病患者在TC，HDL-C及LDL-C濃度水平上的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，而TG濃度水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.114)。E4表現(xiàn)型的急性腦血管病患者，其TC及LDL-C濃度水平均高于其他表現(xiàn)型的急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平低于其他表現(xiàn)型。E2表現(xiàn)型的急性腦血管病患者，其TC及LDL-C濃度水平要低于其他表現(xiàn)型的急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平高于其他表現(xiàn)型。

表5 不同ApoE表現(xiàn)型急性腦血管病患者血脂水平的比較(mmol/L)

3討論載脂蛋白E(ApoE)可以通過多種途徑來調(diào)節(jié)人體的脂質(zhì)代謝，并影響我們體內(nèi)的血脂水平。有研究表明，當(dāng)體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常時(shí)或出現(xiàn)腦動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)，ApoE會(huì)較早且較顯著的出現(xiàn)變化，并且其靈敏度和特異度優(yōu)于血脂的常規(guī)監(jiān)測指標(biāo)TG和TC，這也是ApoE可以作為急性腦血管病早期發(fā)現(xiàn)和臨床指導(dǎo)用藥的重要原因[6-7]。研究認(rèn)為，不同ApoE的表達(dá)與心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6，8-9]。因此，本研究主要以急性腦血管病患者為研究對(duì)象，通過檢測其血清中ApoE基因型及表現(xiàn)型分布，分析與性別、年齡、臨床診斷以及血脂的關(guān)系，用以指導(dǎo)急性腦血管病患者選擇合適的降脂藥物，為臨床急性腦血管病的治療提供更好的理論指導(dǎo)依據(jù)，同時(shí)提高急性腦血管病患者的預(yù)后。

我們的結(jié)果顯示，急性腦血管病患者基因型及表現(xiàn)型的分布不均勻。在ApoE六種基因型中，以野生基因型ε3/ε3分布頻率最高，純合突變型ε2/ε2和ε4/ε4較為少見。而在ApoE三種表現(xiàn)型中，等位基因的頻率順序?yàn)镋3>E4>E2，這與國內(nèi)外一些研究報(bào)道基本一致[10-11]?？梢?，ApoE基因在急性腦血管病患者中呈多態(tài)性分布[6，12]。本研究證實(shí)了急性腦血管病患者ApoE基因型及表現(xiàn)型的分布不存在性別和年齡差異，同時(shí)也不受臨床診斷的影響。因此，可排除性別、年齡和臨床診斷因素對(duì)ApoE基因的影響，表明ApoE基因不受性別、年齡和臨床診斷等因素的干擾而存在[13-14]。

他汀類藥物可以有效降低血清中膽固醇和三酰甘油濃度，增加高密度脂蛋白濃度，從而減緩急性腦血管病的發(fā)生和發(fā)展，是防治腦血管疾病的基礎(chǔ)用藥[13-14]。有研究表明，ApoE基因多態(tài)性影響他汀類藥物的療效，與血清中TC，TG水平密切相關(guān)[15]。我們發(fā)現(xiàn)，不同ApoE基因型的急性腦血管病患者，其血清TC，TG，HDL-C及LDL-C表達(dá)水平存在明顯差異。

其中，ε4/ε4純合突變型急性腦血管病患者，血清TG，TC及LDL-C水平顯著高于其他基因型急性腦血管病患者，而HDL-C水平低于其他基因型急性腦血管病患者。這可能是由于不同ApoE基因型，其編碼的異構(gòu)體與脂蛋白受體結(jié)合的親和力不同引起的，從而最終影響急性腦血管病患者的血脂水平[16-17]。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，不同ApoE表現(xiàn)型的急性腦血管病患者，TC水平由高到低依次為E4，E3和E2，LDL-C水平由高到低依次為E4，E3，E2，HDL-C水平由高到低依次為E2，E3，E4?？梢?，ApoE4與高TC和LDL-C水平相關(guān)，較高的TC和TDL-C，可以沉積于腦血管動(dòng)脈壁，堵塞腦血管，從而影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，增加患腦血管病的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)也可能導(dǎo)致他汀類藥物治療效果相對(duì)較差。因此，ApoE4可以作為腦血管病的遺傳危險(xiǎn)因素。ApoE2具有較高水平的HDL-C，而血清中HDL-C具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[18]，可見，ApoE2不易患腦梗塞等心腦血管疾病，他汀類藥物治療的效果較好，是一種保護(hù)因子。以上都提示急性腦血管病患者ApoE基因多態(tài)性與血脂水平可能存在相關(guān)性，這與孫謙等[19]的研究相一致。

本次研究仍有不足，納入的樣本量較少，而且部分研究對(duì)象的血脂數(shù)據(jù)不能排除飲食影響，此外本文納入患者多為沈陽及其周邊地區(qū)患者，具有一定的區(qū)域局限性。

綜上所述，本次研究結(jié)果提示ApoE基因多態(tài)性會(huì)影響急性腦血管病患者的血脂濃度，對(duì)腦血管病的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防具有重要意義，可以作為風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測因子。同時(shí)，臨床上在應(yīng)用他汀類降脂藥物之前，對(duì)急性腦血管病患者的ApoE基因型及表現(xiàn)型進(jìn)行篩查，有利于了解患者對(duì)降脂藥物的敏感性，選擇適合的降脂藥物，合理指導(dǎo)臨床用藥。