采用氣相色譜柱快速分離脂肪酸甲酯

文/yunzuo

采用配備DB-FastFAME Intuvo 氣相色譜柱的氣相色譜系統(tǒng)快速分離脂肪酸甲酯 // 脂肪酸甲酯 (FAME) 的分析可用于鑒定食品中的脂類組分，是食品分析中最重要的應(yīng)用之一。采用本方法實(shí)現(xiàn)快速、良好的分離效果。

對油類、脂肪和含脂食品的分析是政府實(shí)驗(yàn)室、質(zhì)量控制 (QC) 實(shí)驗(yàn)室或合同研究組織 (CRO) 實(shí)驗(yàn)室的常見任務(wù)。測定食品中的總脂肪與反式脂肪含量時(shí)，對脂肪酸及其 FAME 衍生物的氣相色譜分析是脂肪表征的重要工具。在許多用于食品（如食用油）檢測的法規(guī)方法中，測定脂肪酸組成時(shí)都要求使用涂覆氰丙基固定相的毛細(xì)管柱對特定的順反脂肪酸異構(gòu)體進(jìn)行分離。

此外，實(shí)現(xiàn)良好的 FAME 分離還需較長的氣相色譜柱（100 米）和較長的分析時(shí)間（超過 70 分鐘）。然而，這種方法分析效率較低且分析成本較高。而采用氰丙基固定相的 DB-FastFAME Intuvo 氣相色譜柱，可實(shí)現(xiàn) FAME 混合物的快速分離（包括分離一些關(guān)鍵順反異構(gòu)體），且能滿足法規(guī)方法的要求。本文簡述了采用 DB-FastFAME Intuvo 氣相色譜柱和氣相色譜系統(tǒng)快速分析FAME 混標(biāo)。

表1 方法 1 的條件。

表2 方法 2 的條件。

表3 方法 3 的條件。

表4 方法 4 的條件。

表5 流路備件。

圖1 采用方法 1得到的 FAME 36 組分混合物的 GC/FID 色譜圖。

圖 2采用方法 1得到的菜籽油 FAME 混合物的典型GC/FID 色譜圖。

實(shí)驗(yàn)部分

試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

FAME 36 組分混合物（部件號(hào) 5191-4276）、C4-C24 偶數(shù)碳飽和 FAME 混合物（部件號(hào) 5191-4278）和菜籽油 FAME混合物（部件號(hào) 5191-4277）均來自安捷倫科技公司。

37 組分 FAME 混標(biāo)（部件號(hào)CDAA-252795-MIX-1 mL）購自上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

將 C4-C24偶數(shù)碳飽和 FAME混合物用己烷稀釋至 500 μg/mL。菜籽油 FAME混合物為 100 mg 凈混合物，用二氯甲烷稀釋 20 倍。

儀器

使用配備火焰離子化檢測器(FID) 的Intuvo 9000 氣相色譜儀進(jìn)行分析。使用配備 5 μL 進(jìn)樣針（部件號(hào) G4513-80213）和分流/不分流進(jìn)樣口的 Agilent 7693A 自動(dòng)液體進(jìn)樣器進(jìn)樣。

實(shí)驗(yàn)步驟

將標(biāo)準(zhǔn)樣品用與之相對應(yīng)的方法進(jìn)行進(jìn)樣分析，檢測方法如表1-表5所示。

結(jié)果與討論

FAME 36 組分混標(biāo)專門為模擬多種食品樣品的脂肪酸組成而設(shè)計(jì)，可用于鑒定多種食品中的關(guān)鍵FAME。該混標(biāo)中包含 C4:0至 C24:1范圍的 FAME，包括多數(shù)重要的飽和、單不飽和及多不飽和 FAME。該混標(biāo)不包含以前用作內(nèi)標(biāo)的一種FAME，即二十三烷酸甲酯 (C23:0)，。圖 1所示為 FAME 36 組分混合物在 20 m ×0.18 mm、0.20 μm DBFastFAME Intuvo氣相色譜柱上的分離結(jié)果，圖2所示為菜籽油按方法1進(jìn)行分析的結(jié)果。該方法采用氦氣作為載氣，可在 5 分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)所有化合物的分離，包括關(guān)鍵AOAC 對，R s ＞ 1.5。

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圖 4采用方法 2得到的 FAME 36 組分混合物的 GC/FID 色譜圖。

圖 5采用方法 3得到的 37 組分 FAME 混標(biāo)的 GC/FID 色譜圖。

圖 6采用方法 4得到的 37 組分 FAME 混標(biāo)的 GC/FID 色譜圖。

采用這種方法獲得了良好的峰形和分離度，且分析時(shí)間為 5 分鐘。采用氫氣作為載氣，可在 4 分鐘內(nèi)完全分離 C4-C24偶數(shù)碳飽和 FAME混合物和 FAME 36 組分混合物（圖3 和圖 4）。這表明使用該色譜柱可實(shí)現(xiàn)快速樣品通量，且分離度不受影響。

對于使用傳統(tǒng) 37 組分 FAME混標(biāo)驗(yàn)證其FAME 方法的實(shí)驗(yàn)室，圖 5 展示了在 Intuvo9000 氣相色譜儀上使用 20 m × 0.18 mm、0.20μm DB-FastFAME 色譜柱得到的色譜圖。該方法采用氦氣作為載氣，在 8 分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)了所有化合物的完全分離。

與預(yù)期結(jié)果一樣，采用氫氣作為載氣可加快分析速度，而分離度幾乎相同。圖 6所示的結(jié)果表明，采用氫氣作為載氣可在6.5分鐘的分析時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn) 37 組分FAME混標(biāo)中所有化合物的完全分離。

結(jié)論

DB-FastFAME Intuvo 氣相色譜柱可快速、出色地分離 FAME混合物。實(shí)驗(yàn)表明，采用氦氣作為載氣時(shí)，DB-FastFAME Intuvo氣相色譜柱可在 5 分鐘內(nèi)完全分離 FAME 36 組分混合物中的所有組分，包括關(guān)鍵 AOAC 對和關(guān)鍵順反脂肪酸異構(gòu)體。本實(shí)驗(yàn)也表明，此方法還能實(shí)現(xiàn)菜籽油的快速分析。采用氫氣作為載氣時(shí)，這種高效的 DB-FastFAME Intuvo氣相色譜柱將運(yùn)行時(shí)間縮短至 4 分鐘以內(nèi)，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了所有化合物的基線分離。 ■