HPLC法測定纈沙坦膠囊中纈沙坦的含量及有關(guān)物質(zhì)

陳 莉 劉秀娟 張玉霖*

（湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100）

纈沙坦為是血管緊張素受體拮抗劑，具有良好的抗高血壓作用，可用于各種類型高血壓，并對心腦腎有較好的保護(hù)作用。選擇性地作用于AT1受體亞型，阻斷AngⅡ與AT1受體的結(jié)合，從而抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用[1]。纈沙坦的含量測定與有關(guān)物質(zhì)檢查主要采用高效液相色譜法，本文參考了相關(guān)文獻(xiàn)[2-5]建立了同時測定纈沙坦膠囊中纈沙坦的含量測定及有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，為纈沙坦及有關(guān)質(zhì)劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜系統(tǒng)（北京清博華科技有限公司，LC300），電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司，F(xiàn)A2004B）。

纈沙坦對照品（中國食品藥品檢定研究院，100651-201604，純度98.6%），纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，510066-201401，純度99%），纈沙坦膠囊（海南奧美華制藥有限公司，批號：180401；湖北千金湘江藥業(yè)股份有限公司，批號：160804），乙腈、甲醇為色譜純，其他為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2 色譜條件

Hypersil ODS色譜柱：（250 mm×4.6 mm，5 μm）；梯度洗脫：0（40∶60∶0.1），10 min（40∶60∶0.1），25 min（70∶30∶0.1），32 min（70∶30∶0.1），33 min（40∶60∶0.1），38 min（40∶60∶0.1）；檢測波長為250 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。纈沙坦膠囊與其對照品色譜圖見圖1。

3 方法的專屬性考察

3.1 溶液配制：未破壞試樣：取膠囊纈沙坦（80 mg），加流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含0.5 mg的溶液，作為未破壞供試品溶液。

纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ赵嚇樱壕芰咳±i沙坦雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ者m量，加流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含5 μg的溶液，作為纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ杖芤骸?/p>

酸破壞試驗：取本品細(xì)粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入1 mol/L的HCl溶液3 mL，置80 ℃水浴中加熱約30 min，放冷至室溫，用1 mol/L的NaOH調(diào)pH至中性，加流動相稀釋定容至50 mL，搖勻。

堿破壞實(shí)驗：取本品細(xì)粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入1 mol/L的NaOH溶液3 mL，置80 ℃水浴中加熱約30 min，放冷至室溫，用1 mol/L的HCl調(diào)pH至中性，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

高溫破壞實(shí)驗：取本品細(xì)粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加流動相5 mL，置100 ℃水浴中加熱約2 h，放冷至室溫，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

氧化破壞實(shí)驗：取本品細(xì)粉適量（約80 mg），置50 mL帶刻度的具塞試管中，加入30%的雙氧水溶液5 mL，靜置2 h，加流動相稀釋至50 mL，搖勻。

3.2 測定結(jié)果：取3.1項下配制溶液，濾過，取續(xù)濾液在色譜條件下進(jìn)樣測定，記錄色譜圖（圖1）。由破壞性實(shí)驗得知，酸、堿及高溫條件下破壞產(chǎn)生雜質(zhì)數(shù)量較少；氧化破壞所產(chǎn)生雜質(zhì)數(shù)量較多。而在此色譜條件下，氧化破壞所產(chǎn)生的各雜質(zhì)分離情況良好，纈沙坦峰計理論塔板數(shù)n=38900 ，纈沙坦峰與其后雜質(zhì)分離度R=2.1。分離情況見圖2。

4 含量測定方法與結(jié)果

4.1 線性關(guān)系與范圍：取纈沙坦對照品適量，加入流動相溶解后，分別逐步稀釋定容至濃度約為20、40、60、80、100 μg/mL。取上述溶液按色譜條件2分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積A對濃度C（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得線性方程為A=29.579C+270.12，r=0.9992，結(jié)果表明：纈沙坦?jié)舛仍?9.6～98.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

4.2 加樣回收實(shí)驗：取同批纈沙坦膠囊（批號：160804）裝量差異項下內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于纈沙坦25 mg），置50 mL量瓶中，用初始流動相溶解定容至刻度，搖勻，過濾，分別取續(xù)濾液500 μL，置于9個10 mL量瓶中，再取1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液150 μL、250 μL、350 μL，各3份加入，再分別用流動定容至刻度，搖勻。按色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果平均回收率為99.5%，RSD=0.96%（n=9）。

4.3 重復(fù)性考察：取同批均纈沙坦膠囊（批號20180401）內(nèi)容物6份（約含纈沙坦50 mg），分別置50 mL量瓶中，加初始流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密移取續(xù)濾液1 mL至20 mL容量瓶中稀釋定容，搖勻，按色譜條件依次進(jìn)樣測定，計算纈沙坦膠囊含量。結(jié)果平均含量為97.1%，RSD=1.06% （n=6）

4.4 穩(wěn)定性考察：取含量測定項下的供試品溶液，在避光條件下放置0、2、4、6、8 h后分別取樣測定，記錄主峰面積，得主峰面積的RSD=1.5%，說明纈沙坦供試品溶液在室溫避光條件下8 h內(nèi)穩(wěn)定（n=5）。

4.5 纈沙坦膠囊的含量測定：取纈沙坦膠囊10顆，取內(nèi)容物混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于纈沙坦50 mg），置50 mL量瓶中，加初始流動相使纈沙坦溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL置20 mL量瓶中，用初始流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算纈沙坦膠囊中纈沙坦含量，結(jié)果見表1。

圖1 纈沙坦HPLC色譜圖

圖2 破壞性試驗HPLC色譜圖

表1 樣品有關(guān)物質(zhì)檢查及含量測定結(jié)果

5 纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ與有關(guān)物質(zhì)檢查

5.1 檢測限與定量限：分別配制系列不同濃度的纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ結(jié)照品溶液，在色譜條件下，調(diào)節(jié)檢測器靈敏度，分別進(jìn)樣測定，以信噪比S/N為3作為檢測限，以信噪比S/N為10作為定量限。試驗表明本試驗條件下，檢測限為0.1 μg/mL，定量限為0.2 μg/mL。

5.2 纈沙坦雜質(zhì)Ⅱ與有關(guān)物質(zhì)檢查：取纈沙坦膠囊內(nèi)容物適量，加初始流動相溶解并稀釋成每1 mL中約含纈沙坦0.5mg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按色譜條件依次進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。測定結(jié)果見表1。

6 討 論

本實(shí)驗比較了各種流動相對分離效果的影響。采用了以下流動相：乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）等度洗脫[2]；不同比例的甲醇-水-冰醋酸梯度洗脫及乙腈-水-冰醋酸梯度洗脫。通過比較這些流動相對分離的影響，確定按文中色譜條件2梯度洗脫時，色譜峰峰形較好，且主峰與雜質(zhì)峰分離效果較好，可同時滿足有關(guān)物質(zhì)與含量測定的要求。作者考查了纈沙坦及其雜質(zhì)Ⅱ紫外吸收光譜，二者光譜相似，在225 nm和250 nm的波長下均有吸收，雖然在225 nm較靈敏，但色譜流出曲線漂移較大，故選擇250 nm檢測。經(jīng)檢驗，在此條件下，雜質(zhì)檢測靈敏度符合要求。