20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑的高效液相色譜分析

劉衛(wèi)榮，康 鳳

（江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司，江蘇揚(yáng)州 225009）

吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是巴斯夫公司研發(fā)的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過抑制病原真菌的線粒體呼吸，防治多種作物真菌性病害[1]。丙硫菌唑（prothioconazole）是拜耳公司研發(fā)的新型廣譜三唑硫酮類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，對作物具有防病治病的作用，安全性好[2]。研究證明，將吡唑醚菌酯和丙硫菌唑復(fù)配，可延長其持效期，且擴(kuò)大殺菌譜，有效防治農(nóng)作物的白粉病、霜霉病、銹病、葉斑病等多種病害，應(yīng)用前景廣闊。關(guān)于吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的檢測方法主要有氣相色譜法和液相色譜法[3-6]，但尚未見兩者復(fù)配制劑檢測方法的公開報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法，在同一色譜條件下對20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑有效成分進(jìn)行定量分析。該方法操作簡便、快速，準(zhǔn)確度和精密度良好，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：日本島津LC-20A型，配備可變波長紫外檢測器；LabSolutions工作站；色譜柱：Eclipse XDB-C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；微孔過濾膜（0.45 μm）；超聲振蕩器。

乙腈（HPLC級）；冰乙酸（AR級）；新蒸2次蒸餾水；吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98.0%）、丙硫菌唑標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98.0%）、20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑（10%吡唑醚菌酯＋10%丙硫菌唑），江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司研制。

1.2 色譜條件

流動相：乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：260 nm；進(jìn)樣體積：2 μL；保留時間：丙硫菌唑約5.7 min，吡唑醚菌酯約7.2 min。標(biāo)樣和試樣典型的液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑液相色譜圖

1.3 溶液制備

1.3.1 標(biāo)樣溶液的制備

分別稱取吡唑醚菌酯標(biāo)樣0.05 g、丙硫菌唑標(biāo)樣0.05 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，于超聲振蕩器中超聲10 min左右使樣品溶解，冷卻至室溫后搖勻，得標(biāo)樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取試樣約0.5 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，于超聲振蕩器中超聲10min左右使樣品溶解，冷卻至室溫后搖勻，過濾，得試樣溶液。

1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器基線平穩(wěn)后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）的峰面積響應(yīng)值相對變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.5 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吡唑醚菌酯、丙硫菌唑峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）峰面積的平均值；m1為吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）標(biāo)樣質(zhì)量，g；m2為試樣質(zhì)量，g；w為標(biāo)樣中的吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

配制一定濃度的吡唑醚菌酯和丙硫菌唑標(biāo)樣溶液，用紫外-可見分光光度計(jì)在波長范圍為200～400 nm時進(jìn)行掃描，得到兩者紫外吸收光譜圖，見圖3。從圖3可以看出，吡唑醚菌酯在275 nm波長處有良好吸收，丙硫菌唑在260 nm波長處有良好吸收。結(jié)合兩者峰面積、質(zhì)量濃度和流動相吸收等，最終選定260 nm為檢測波長。

圖3 吡唑醚菌酯和丙硫菌唑紫外吸收圖譜

2.2 流動相的選擇

將流動相按不同比例甲醇＋水和乙腈＋水進(jìn)行比較試驗(yàn)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）為流動相，流速為1.0 mL/min時，各組分能分離完全，無其他組分干擾，吡唑醚菌酯和丙硫菌唑峰形良好，且保留時間合適，因而選用乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）為流動相。

2.3 方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)

配制一系列不同質(zhì)量濃度的吡唑醚菌酯和丙硫菌唑混合標(biāo)樣溶液，在上述液相色譜條件下，測定相應(yīng)的峰面積值，以吡唑醚菌酯、丙硫菌唑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4、圖5。吡唑醚菌酯線性方程為y=4.5652x-4.5902，相關(guān)系數(shù)R2=1.000 0；丙硫菌唑線性方程為y=4.030 2x-14.861 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。結(jié)果表明，該方法的線性關(guān)系良好。

圖4 吡唑醚菌酯線性關(guān)系圖

圖5 丙硫菌唑線性關(guān)系圖

2.4 方法精密度試驗(yàn)

選取有代表性的20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑樣品，稱取5份平行試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行測定。方法精密度試驗(yàn)結(jié)果見表1。吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.047和0.054，變異系數(shù)分別為0.45%和0.52%，結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法精密度良好。

表1 方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)

采用標(biāo)樣添加法，在已知含量的20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑中添加一定量的吡唑醚菌酯、丙硫菌唑標(biāo)樣，分別測定吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的總質(zhì)量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，吡唑醚菌酯的回收率為98.94%～100.93%，平均回收率為99.72%；丙硫菌唑的回收率為98.73%～101.12%，平均回收率為99.85%。由此可知該方法準(zhǔn)確度較高，滿足定量分析要求。

表2 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

建立了20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑的反相高效液相色譜分析方法，方法線性關(guān)系良好，精密度和準(zhǔn)確度均能滿足分析的要求，且檢測時間短，適用吡唑醚菌酯和丙硫菌唑復(fù)配制劑的分析檢測。