18%四氟·嘧菌酯懸乳劑的高效液相色譜分析

俞霖潔，吳航俊，孫小波，龐雯斐，唐利斌，林夢佳

（浙江省化工研究院有限公司，杭州 310023）

四氟醚唑（tetraconazole）屬三唑類殺菌劑，主要用于防治小麥白粉病、銹病，玉米絲黑銹病，蘋果斑點(diǎn)落葉病和葡萄白粉病等[1]。嘧菌酯（azoxystrobin）是先正達(dá)公司于1997年上市的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，用于防治白粉病、銹病、穎枯病、網(wǎng)斑病、霜霉病等，目前國內(nèi)外登記防治的植物病害有400多種[2]。四氟醚唑和嘧菌酯復(fù)配，既可減少單劑成分用量，降低藥害風(fēng)險(xiǎn)，又可以提高病害防治效果。

目前四氟醚唑的檢測方法主要為氣相色譜法[3-4]，嘧菌酯的檢測方法主要為氣相色譜法[5]和液相色譜法[6]，四氟醚唑和嘧菌酯復(fù)配制劑的分析方法尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)采用Inertsil ODS-3色譜柱和二極管陣列檢測器，建立了四氟醚唑和嘧菌酯同柱分離測定的高效液相色譜法。該方法操作簡便、快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，可為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Dionex U3000高效液相色譜儀（熱電），具二極管陣列檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器和Chromeleon 7.0色譜處理工作站；色譜柱：Inertsil ODS-3不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇（色譜純），臨海市浙東特種試劑有限公司；水：2次蒸餾水；四氟醚唑標(biāo)準(zhǔn)品（≥98.5%）、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（≥98.9%）、18%四氟·嘧菌酯懸乳劑（8%四氟醚唑＋10%嘧菌酯），杭州宇龍化工有限公司提供。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇＋水（體積比為80∶20）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：225 nm；進(jìn)樣量：5 μL；保留時(shí)間：嘧菌酯約4.4 min、四氟醚唑約5.5 min。典型的標(biāo)樣及18%四氟·嘧菌酯懸浮劑樣品液相色譜分離圖見圖1、圖2。

圖1 嘧菌酯、四氟醚唑標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 18%四氟·嘧菌酯懸乳劑液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取約15 mg（精確至0.000 2 g）四氟醚唑標(biāo)樣和20 mg嘧菌酯標(biāo)樣于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋并定容，充分搖勻，靜置，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取約0.2 g（精確至0.000 2 g）18%四氟·嘧菌酯懸乳劑樣品，置于100 mL容量瓶中，先用約5 ml水溶解樣品，再用甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾后待用。

1.4 測定步驟

1.4.1 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液。計(jì)算各針相對響應(yīng)值，待相鄰2針的相對響應(yīng)值小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.4.2 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中四氟醚唑（嘧菌酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；p為標(biāo)樣中四氟醚唑（嘧菌酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果和討論

2.1 檢測波長的選擇

通過二極管陣列檢測器的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得四氟醚唑與嘧菌酯的紫外吸收曲線。四氟醚唑在200～230 nm處有較強(qiáng)的吸收，嘧菌酯在200～270 nm處有較強(qiáng)的吸收。由于懸乳劑配方比較復(fù)雜，為兼顧2種有效成分的吸收強(qiáng)度與比例，減小溶劑、助劑等雜質(zhì)干擾，經(jīng)比對分析，最終確定以225 nm作為檢測波長。在此波長下四氟醚唑和嘧菌酯峰形良好，紫外吸收比例合適，基本不受雜質(zhì)干擾。

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別選用了甲醇＋水、甲醇＋乙腈＋水、乙腈＋水為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，以甲醇＋水（體積比為80∶20）、甲醇＋乙腈＋水（體積比為40∶40∶20）、乙腈＋水（體積比為75∶25）為流動(dòng)相時(shí)，均能將2種成分有效分離，獲得的峰形尖銳對稱。其中，以甲醇＋水（體積比為80∶20）流動(dòng)相獲得的目標(biāo)物峰形最為理想，分離效率最高，且用時(shí)較短。最終確定甲醇＋水（體積比為80∶20）為流動(dòng)相。

2.3 線性關(guān)系的測定

分別稱取四氟醚唑和嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品約10 mg（準(zhǔn)確至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解，稀釋，定容，搖勻。用移液管分別準(zhǔn)確移取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 mL上述溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋，定容，搖勻。在上述液相色譜操作條件下進(jìn)行測定。以四氟醚唑（嘧菌酯）質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，四氟醚唑（嘧菌酯）峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算得四氟醚唑線性回歸方程為y=21.669x-0.174 2，相關(guān)系數(shù)為0.999 5，嘧菌酯線性回歸方程為y=60.798x-1.051 4，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。試驗(yàn)結(jié)果表明，四氟醚唑和嘧菌酯在測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 方法精密度的測定

任意稱取一個(gè)18%四氟·嘧菌酯懸乳劑在上述方法下重復(fù)測定5次，分別獲得四氟醚唑和嘧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

由表1可知，樣品中四氟醚唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.85%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.010，變異系數(shù)為0.16%；嘧菌酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.46%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.015，變異系數(shù)為0.06%。結(jié)果表明該分析方法精密度良好。

表1 方法的精密度實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度的測定

在已知含量的18%四氟·嘧菌酯懸乳劑樣品，分別準(zhǔn)確加入一定量四氟醚唑和嘧菌酯標(biāo)樣溶液，根據(jù)稱取樣品量和加入標(biāo)樣量計(jì)算出四氟醚唑和嘧菌酯的理論含量。按照上述色譜操作條件操作，分析結(jié)果見表2。四氟醚唑回收率為98.49%～100.98%，平均回收率為99.99%，嘧菌酯回收率為99.23%～100.37%，平均回收率為99.23%，均滿足常量分析要求，方法準(zhǔn)確度良好。

表2 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

3 結(jié)論

本方法以O(shè)DS-3 C18為分離柱，二極管陣列為檢測器，225 nm為檢測波長，測定18%四氟·嘧菌酯懸乳劑中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。該方法分離效果好，操作簡便，定量準(zhǔn)確，重復(fù)性、線性關(guān)系良好，滿足產(chǎn)品質(zhì)量分析要求。