黃芩素在大鼠體內(nèi)對氟苯尼考藥動學(xué)的影響研究

李旭廷，李思聰，王紅寧，李金良，王斌，楊銳

（1.四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室，四川 成都 610064；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川 成都 610066）

在當(dāng)前畜牧生產(chǎn)中，用中獸藥與化藥聯(lián)合防治畜禽疾病已經(jīng)成為一種普遍現(xiàn)象。盡管中獸藥有著天然、低毒、低殘留等諸多優(yōu)點，但有研究表明中獸藥可以通過調(diào)節(jié)機體代謝酶和轉(zhuǎn)運體等方式，改變聯(lián)用藥物的藥效學(xué)或藥動學(xué)特征，甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)[1]。因此，中獸藥與化藥聯(lián)合使用可能產(chǎn)生的藥物互作值得重視和研究。

黃芩是中獸醫(yī)臨床上最常用的藥物之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎的功能[2]。黃芩素是黃芩中的主要活性成分，研究顯示：黃芩和黃芩素均能作用于藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運蛋白的調(diào)控和表達[3-4]，對一些化學(xué)藥物如諾氟沙星等的體內(nèi)代謝產(chǎn)生影響，引起療效改變[5]。氟苯尼考是獸醫(yī)常用抗菌藥，臨床實踐中經(jīng)常與黃芩類中藥如雙黃連等聯(lián)合應(yīng)用來防治畜禽細(xì)菌性感染。黃芩及其有效成分黃芩素是否對氟苯尼考的藥代動力學(xué)產(chǎn)生影響值得研究。本文開展了黃芩素對氟苯尼考在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的影響研究，探討可能發(fā)生的藥動學(xué)相互作用及其機制，為臨床安全、合理、有效用藥提供參考。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 12只SD大鼠，每只體重280±25 g。試驗前按常規(guī)飼養(yǎng)1周，自由飲水和采食，飼料為不含任何抗生素的大鼠專用日糧。大鼠和飼料均由成都達碩實驗動物有限公司提供，合格證號：SCXK（川）2013-24。

1.2 實驗儀器 賽默飛UltiMate3000高效液相色譜儀；CQ250超聲洗滌器；800B臺式離心機；WH-3微型旋渦混合儀；MiniSpin plus高速離心機。

1.3 藥品與試劑 黃芩素（含量為98.5%，中國藥品生物制品檢定所，批號：111595-201808）；氟苯尼考對照品（含量為99.1%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，編號：K0301703）；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130555-201704）；氟苯尼考原料藥（含量為98.9%，浙江康牧藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：201710163）。

乙腈為色譜純，乙酸乙酯等其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

1.4 分組及給藥方法 將12只健康大鼠隨機分為單用組和合用組，每組6只。合用組連續(xù)7d每天灌服一次黃芩素（50mg/kg），單用組連續(xù)7d給予相應(yīng)體積的生理鹽水。兩組大鼠禁食12h，于第8d按25mg/kg劑量灌服氟苯尼考（氟苯尼考原粉溶于PEG400，配制成5%溶液），給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h從眼眶靜脈叢采血約0.2 mL，EDTA抗凝，4 000 r/min離心5min，分離血漿，于-20℃冰箱中保存待用。

1.5 樣品處理 精確取血漿0.1mL于試管中，加入10 μL氯霉素內(nèi)標(biāo)液（500 μg/mL）和400 μL乙酸乙酯，渦動混合2 min，4 000 r/min離心10 min，吸取上層液于另一離心管中，然后再加入乙酸乙酯400 μL重復(fù)提取1次，合并兩次提取液。在40℃水浴中氮氣吹干，殘渣加入100μL流動相溶解，渦動混合2min，12000r/min離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至進樣瓶，取20μL進樣檢測。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取空白血漿80μL，加入20μL氟苯尼考系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成50、20、10、5.0、2.5、0.5、0.1、0.05 μg/mL 系列標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按“1.5”項下方法處理樣品，以氟苯尼考與氯霉素峰面積的比值（S）對相應(yīng)氟苯尼考濃度（C）作線性回歸，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果得出：氟苯尼考在質(zhì)量濃度0.05～50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為S=0.0735C-0.0142，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9997。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 血漿藥物濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.7 分析方法質(zhì)量控制 以血漿樣品低、中、高（0.1、2.5、20 μg/mL）3個濃度考察氟苯尼考的提取回收率和精密度，每個樣品做5個重復(fù)，測得方法平均回收率分別為（81.5±3.8）%、（94.2±2.6）%和（87.6±2.7）%，測得日內(nèi)RSD分別為5.1%、1.6%和2.3%，測得日間RSD分別為6.4%、2.1%和2.4%。按信噪比S/N＝3計算，最低檢測限為0.02μg/mL。

1.8 色譜條件色譜柱：Agilen HC-C18（250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-水（27∶73，V/V）；流速1.0 mL/min；檢測波長223 nm；柱溫40℃；進樣量20μL。

1.9 數(shù)據(jù)分析處理 用DAS2.0軟件以非房室模型分析方法計算藥代動力學(xué)參數(shù)，所有數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示；單用組和合用組組間采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件對藥動學(xué)參數(shù)進行t檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法專屬性 本色譜條件下，氟苯尼考保留時間約13.4 min，氯霉素（內(nèi)標(biāo)）保留時間約17.7 min。氟苯尼考與內(nèi)標(biāo)分離良好，樣品處理過程中未引入干擾性雜質(zhì)，內(nèi)源性成分不干擾藥物的分離測定（見圖2）。本方法具有較高的特異性，能準(zhǔn)確測定血漿中的氟苯尼考濃度，重現(xiàn)性好。

圖2 血漿中氟苯尼考典型色譜圖

2.2 藥動學(xué)參數(shù) 單用組和合用組大鼠均按單劑量（25 mg/kg）給予氟苯尼考后，測定不同時間點的氟苯尼考血藥濃度，其血藥濃度-時間曲線如圖3所示，具體藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)見表1。

圖3 單用組和合用組大鼠體內(nèi)的氟苯尼考血藥濃度-時間曲線（x±s，n＝6）

表1 單用組和合用組大鼠體內(nèi)的氟苯尼考藥動學(xué)參數(shù)（x±s，n＝6）

聯(lián)用黃芩素后，氟苯尼考藥時曲線下面積 AUC0～24h（32.16±1.74 mg/L·h）極顯著高于單用組的22.66±2.69 mg/L·h（P＜0.01），最大血液濃度 Cmax（8.68±0.98 mg/L）顯著高于單用組的7.79±0.67 mg/L（P＜0.05），清除速率CLz（0.77±0.04L/h·kg）極顯著低于單用組的1.11±0.13L/h·kg（P＜0.01），平均滯留時間MRT0～24h（3.06±0.18 h）顯著高于單用組的2.60±0.18h（P＜0.01），組織分布容積 Vz（1.57±0.50 L/kg）顯著低于單用組的2.21±0.66L/kg（P＜0.05），達峰時間Tmax兩組間無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

中西藥相互作用是指中藥與西藥合用或先后序貫使用時，所引起的藥物作用與效應(yīng)的變化。細(xì)胞色素P450酶系和P-糖蛋白介導(dǎo)的藥物相互作用，是中西藥聯(lián)用發(fā)生藥動學(xué)相互作用最主要的因素，也是最常見的原因[6]。周常等[7]研究表明，黃芩對異育銀鯽肝微粒體CYP1A和CYP3A有抑制作用；田碩等[4]用特異性探針底物法測定大鼠肝微粒體CYP450酶系6種同工酶活性的變化，顯示黃芩素對大鼠CYP2C9、CYP2E1和UGT有顯著抑制作用。Gao等[3]采用非那西丁作為人肝微粒體CYP1A2的探針，發(fā)現(xiàn)黃芩苷和黃芩素能顯著增加非那西丁的藥時曲線下面積（AUC），抑制CYP1A2。劉娜等[8]研究表明，CYP1A酶是大鼠體內(nèi)氟苯尼考的主要代謝酶，采用氟伏沙明抑制CYP1A后，氟苯尼考AUC上升了3倍。本次試驗采用黃芩素（50mg/kg）連續(xù)7 d灌服大鼠后，氟苯尼考AUC0～24h增加了42.0%，Cmax增加了11.5%，提示黃芩素增加了氟苯尼考的吸收；MRT延遲17.7%，CLz值降低31.6%，提示黃芩素延緩了氟苯尼考的消除速率。從作用機制分析，引起氟苯尼考體內(nèi)代謝動力學(xué)改變的原因，可能與長期使用黃芩素抑制了大鼠肝藥酶CYP450和葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶有關(guān)。

4 結(jié)論

黃芩素對氟苯尼考在大鼠體內(nèi)的代謝有一定的影響，可以增加氟苯尼考口服生物利用度。從本次試驗藥動學(xué)角度分析，臨床上將氟苯尼考與黃芩類中藥合用可能存在改變氟苯尼考藥代動力學(xué)的可能，獸醫(yī)臨床具體的藥效學(xué)結(jié)果有待進一步確證。