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    寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因多態(tài)性研究

    2019-06-11 11:01曾青華
    關(guān)鍵詞:寧鄉(xiāng)等位基因多態(tài)性

    曾青華

    摘 要:為探討寧鄉(xiāng)豬遺傳多樣性,本研究以外來(lái)豬種大白豬為對(duì)照,研究了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性。通過(guò)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)分析檢測(cè)了該基因A/G位點(diǎn)。結(jié)果表明,寧鄉(xiāng)豬全部為GG型,大圍子豬和黔邵花豬的優(yōu)勢(shì)等位基因都為G;而外來(lái)品種(大白豬)的優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锳,其基因頻率為0.6433,中外品種的差異較大。本研究為寧鄉(xiāng)豬的保種和選育提供了有益的資料。

    關(guān)鍵詞:豬;GLP2R基因;遺傳多態(tài)性

    寧鄉(xiāng)豬是我國(guó)著名的四大地方豬品種之一,原產(chǎn)于湖南省寧鄉(xiāng)縣的流沙河及草沖一帶,其特征是“絲頸葫蘆肚,耳薄嘴筒齊,稀毛現(xiàn)薄皮,魚(yú)尾后腳直,奶子一斬齊,四腳要撒蹄”、“烏云蓋雪銀頸圈”。其體型中等,體質(zhì)疏松細(xì)致,體軀呈圓筒狀,毛色為黑白花,四肢、肋腹及頸下部為白色,頭和臀部呈黑色。GLP2R屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族[1]。GLP2R為GLP2的特異性受體,GLP2與其受體結(jié)合從而發(fā)揮作 用[2-3]。Luo等[4]認(rèn)為GLP2R基因與豬肌內(nèi)脂肪含量有關(guān)。

    本研究首次檢測(cè)了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性,旨在為揭示豬GLP2R基因的分子遺傳機(jī)制奠定基礎(chǔ),并為寧鄉(xiāng)豬保種和選育提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    以4個(gè)地方豬種(大圍子豬、寧鄉(xiāng)豬、沙子嶺豬、黔邵花豬)和1個(gè)外來(lái)豬種(大白豬)為試驗(yàn)材料,共計(jì)523頭,分別采取豬耳組織樣品,于-20 ℃保存。

    1.2 基因組DNA提取

    基因組DNA提取按常規(guī)酚-氯仿法進(jìn)行。

    1.3 引物合成及聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增

    用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物,其中正向引物:5'-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3';反向引物:5'-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3',由華大基因公司合成。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)體系:2×PCR Master·Mix 10 μL,雙蒸水8.0 μL,引物1.0 μL,基因組DNA 1.0 μL。PCR擴(kuò)增程序:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s;55 ℃復(fù)性30 s;72 ℃延伸30 s,共35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸 5 min;4℃保存。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 基因型分型

    在擴(kuò)增的746 bp的片段中,709 bp處A/G突變位點(diǎn)導(dǎo)致了限制性內(nèi)切酶BstE Ⅱ的變化。GLP2R基因的A/G位點(diǎn)存在3種基因型,分別為GG基因型(506 bp、240 bp)、AG基因型(746 bp、506 bp、240 bp)和AA基因型 (746 bp)(圖1)。

    2.2 豬GLP2R基因的多態(tài)性分析

    GLP2R基因A/G突變位點(diǎn)PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型頻率見(jiàn)表1。大圍子豬和黔邵花豬這兩個(gè)地方品種的優(yōu)勢(shì)等位基因都為G;而外來(lái)品種(大白豬)的優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锳,基因頻率為0.6433。從基因型分布頻率看,GG型占優(yōu)勢(shì),AA型個(gè)體較少,只在沙子嶺豬中發(fā)現(xiàn)1個(gè),在黔邵花豬中發(fā)現(xiàn)4個(gè),在桃源黑豬中檢出15個(gè);但大白豬中GG型較少(41個(gè)),而AA型和AG型分別有125個(gè)和127個(gè)。

    3 討論與結(jié)論

    寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因A/G位點(diǎn)基因型全部為GG型,可能的原因是該品種經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期高度近交的人工選育,此位點(diǎn)已全部純合,這也反映了該品種比較純。大圍子豬在該位點(diǎn)也是全部為GG型。沙子嶺豬和黔邵花豬G等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因,而在外來(lái)品種(大白豬)中A等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因,這也反映了中外品種的遺傳背景差異大。在該位點(diǎn)上的差異有望作為品種標(biāo)記的一種手段,應(yīng)用于標(biāo)記輔助選擇。□□

    參考文獻(xiàn):(4篇,略)

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