糖化血紅蛋白檢測技術和質(zhì)量控制管理

王玉敏　巴提拉　李進平

[摘要] 該文探討糖化血紅蛋白的常見檢測技術和實驗室的質(zhì)量控制管理。對常見的檢測技術包括離子交換層析技術、電泳法、親和層析技術、免疫法、均相酶法和現(xiàn)場即時檢驗6種方法。進行介紹，并提出實驗室的質(zhì)量管理控制方法，主要包括加強實驗室工作人員專業(yè)化相關培訓、建立檢測的標準操作流程、明確質(zhì)量管理的具體要求、構建網(wǎng)絡化管理平臺等。

[關鍵詞] 糖化血紅蛋白;檢測技術;質(zhì)量控制;管理

[中圖分類號] R446.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2019）02（c）-0079-02

慢性高血糖癥是糖尿病的主要臨床癥狀，長期機體處于血糖高的狀態(tài)會造成患者的機體功能受到損害、臟器功能障礙甚至多種器官的衰竭[1]。糖尿病死亡率已躍升為我國疾病死亡的第3大死亡原因，我國目前糖尿病患者人數(shù)約4千萬且患病人數(shù)呈上升趨勢[2]。有研究發(fā)現(xiàn)通過控制糖化血紅蛋白水平可以間接地治療糖尿病[3]，同時降低多種糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病率，如：視網(wǎng)膜病變、腎病、神經(jīng)病變等?，F(xiàn)今糖化血紅蛋白的檢測已經(jīng)作為鑒定糖尿病的一種方法，如何進行正確的檢測，需要有嚴格的質(zhì)量控制管理方法?，F(xiàn)對我國常見的幾種糖化血紅蛋檢測方法以及質(zhì)量控制管理方法進行如下報道。

1? 糖化血紅蛋白的常見檢測方法

離子交換層析技術。這種方法主要通過電荷的差異對糖化血紅蛋白進行分析。利用緩沖液將糖化血紅蛋白所帶的陽離子置換出來，再根據(jù)峰值下的面積計算糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的比例。這種方法受溫度、pH值、血脂、膽紅素等外界因素的干擾。通過近幾年在檢測技術方面的不斷提高，在精確度方面已經(jīng)取得了很大的改善，但是在非特異性方面還是存在一些問題，如仍然會受到氨基甲?；⒀t蛋白變異體和乙?；t蛋白的影響。目前已經(jīng)將高通量的高效液相色譜法和低壓系統(tǒng)HPLC法引入到臨床?，F(xiàn)在臨床上存在幾種常見的檢測方法：①離子交換層析法。離子交換層析法已經(jīng)成為美國糖化血紅蛋白標準化計劃的實驗室參考方法。②電泳法。這種方法在上世紀80年代就已經(jīng)出現(xiàn)了，原理也是通過電荷的不同將糖化血紅蛋白與非糖化血紅蛋白進行分離。與離子交換層析技術相比，這種方法不受pH以及溫度等影響且精密度較高。但是這種方法對樣本量的要求比較高，且分析時間較長，因此在臨床上已經(jīng)很少使用。③親和層析技術。這種方法主要是針對結(jié)構的不同進行分析。這種方法主要是利用糖化血紅蛋白的離子與硼酸陰離子的特殊反應而設計的，這種檢測的結(jié)果是“總”糖化血紅蛋白，這種方法不受溫度、尿毒癥、HbF等因素的干擾，精密度較高但檢測結(jié)果變異性較大。④免疫法。這種檢測方法在1978年就有相關文獻做過介紹[4]，但產(chǎn)品直到1988年才出現(xiàn)。這種方法的發(fā)展基于單克隆抗體技術的運用，最早是英國Dako公司研制出的單克隆抗體，用酶免疫（EIA）原理進行檢測。這種方法的精密度較好且與其他方法也有良好的相關性。但是一旦糖化血紅蛋白的第6位氨基酸發(fā)生變異，它將不會被識別。對于這種變異發(fā)生的檢測，有許多研究學者進行了相關研究，但是結(jié)果存在一定的偏倚[5-6]。⑤均相酶法。這是一種新型的檢測方法，原理是在蛋白酶的作用下反應生成了過氧化氫，過氧化物酶顯色劑能夠與過氧化氫發(fā)生顯色反應，這種顯色反應可以被量化，通過測定吸光度值近而求出糖化血紅蛋白的百分濃度。

2? 糖化血紅蛋白檢測的質(zhì)量控制管理

2.1? 加強實驗室工作人員專業(yè)化相關培訓管理

糖化血紅蛋白的檢測都是在實驗室進行的，檢測人員的專業(yè)性對整個實驗的結(jié)果至關重要，因此要對實驗室的工作人員進行嚴格的培訓。首先是理論上的培訓，要熟練掌握實驗的每個環(huán)節(jié)的具體操作步驟、注意事項、操作要點等。其次是操作技術的加強，實驗室的工作人員要經(jīng)過嚴格的操作考核才允許上崗。最后要增強實驗室工作人員的質(zhì)控意識，了解質(zhì)控的各項規(guī)章制度并嚴格遵守實驗室的各項制度，學會正確判斷質(zhì)控的結(jié)果，對失控情況能夠采取正確的處理措施。每個季度進行一次考核，并對成績優(yōu)異者給予獎勵，考核成績不合格者要定期提交學習筆記，直到下一次考核成績合格。

2.2? 建立檢測的標準操作管理流程

建立檢測的標準操作規(guī)程，規(guī)范實驗室的各項常規(guī)操作，規(guī)范質(zhì)控物品的使用和貯存。同時，選擇合適的室內(nèi)質(zhì)控樣本用于針對地區(qū)性的質(zhì)量控制。編寫糖化血紅蛋白項目的臨床實驗室規(guī)范和相應的操作規(guī)程和質(zhì)控規(guī)程。將標準的操作規(guī)程張貼在實驗室檢測的相關部位，方便檢測人員及時閱讀。

2.3? 明確質(zhì)量管理的具體要求

將質(zhì)控管理落實下去，每周做1次正常值和異常值的室內(nèi)質(zhì)控檢測，并將質(zhì)控的結(jié)果輸入質(zhì)控軟件中，對質(zhì)控結(jié)果進行判斷，整理出失控的情況并加以分析，最后找出失控原因并做好糾正，將每個月質(zhì)控的結(jié)果進行匯總并上報至當?shù)厥信R床檢驗中心，每年參加2次以上實驗室的室間質(zhì)評。實驗室成立管理小組，挑選出操作技術過硬，管理能力較強的人作為小組長，將實驗室檢測技術人員進行分組，交由小組長直接分配管理。

2.4? 構建網(wǎng)絡化管理平臺

建立糖化血紅蛋白實驗室檢測公眾號，由專人管理、定期維護。定期在公眾號內(nèi)投放糖化血紅蛋白實驗室檢測的相關內(nèi)容，定期組織網(wǎng)絡學習課程，推薦有助于實驗室檢測的相關鏈接，幫助大家學習。要求實驗室檢測技術人員每天將工作量進行網(wǎng)上匯報，工作中的問題及時提出，每周將問題在微信群里進行總結(jié)，再探討出解決辦法。

3? 討論

糖化血紅蛋白作為糖尿病診斷中的常見應用，可以及時發(fā)現(xiàn)早期糖尿病。同時糖化血紅蛋白還可以監(jiān)測糖尿病患者并發(fā)癥的發(fā)生情況，糖尿病常見的并發(fā)癥有糖尿病足、糖尿病腎病、心臟病等，降低糖化血紅蛋白的水平將有效降低糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生率。反之隨著糖化血紅蛋白的升高，神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變和腎臟病變的發(fā)生幾率均增加。也有研究顯示[7]，糖化血紅蛋白是臨床中鑒別糖尿病冠心病和非糖尿病冠心病的重要標準。

有研究顯示[8]，在2008年和2009年糖化血紅蛋白室間評價標準為組間均值±20%。隨著檢測水平的提高，區(qū)域性質(zhì)控的評價標準和質(zhì)控頻次有所提高，2010年糖化血紅蛋白室內(nèi)質(zhì)控標準為組間均值±15%。經(jīng)過規(guī)范的質(zhì)量控制管理，臨床實驗室的糖化血紅蛋白的檢測質(zhì)量有了一定的改進。但這個結(jié)果與其他發(fā)達國家相比還有一定的差距。由此可見，我們在糖化血紅蛋白質(zhì)量控制管理上尚有很大發(fā)展空間。

我國雖然一直致力于糖尿病的臨床治療和并發(fā)癥的檢測，但是關于糖化血紅蛋白檢測的研究還是較國外晚很多，也沒有標準的臨床檢驗方法，現(xiàn)有的實驗室檢測技術和方法種類繁多，檢測出來的結(jié)果也存在較大的差異。同時有的檢測方法也受到血紅蛋白相關疾病、婦女妊娠、血液透析、溶血、重大器質(zhì)性疾病等多方面因素的影響。因此，為了保證糖化血紅蛋白檢測結(jié)果的準確性，各級臨床醫(yī)學檢驗實驗室必須嚴格執(zhí)行《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準（WS/T 461-2015）-糖化血紅蛋白檢測》的標準。根據(jù)糖化血紅蛋白水平對糖尿病患者進行規(guī)范治療和監(jiān)測的同時，實驗室也應該積極、認真地做好糖化血紅蛋白檢測的質(zhì)量控制管理，提高實驗室檢測技術人員的專業(yè)水平，積極參加室間質(zhì)量評價，通過室間質(zhì)量評價驗證實驗室檢測結(jié)果的可靠性和可比性，建立標準的檢測流程，制定明確的質(zhì)量管理條例。深信在不久的將來，針對國人的糖化血紅蛋白臨床檢驗技術會逐步得到完善，并融入到國際標準化的進程中。著眼未來，參考方法細則化、制備參考物質(zhì)、搭建參考實驗室網(wǎng)絡，是未來我國糖化血紅蛋白檢測的發(fā)展之路，這對提高臨床實驗室間的糖化血紅蛋白檢測結(jié)果的準確性具有重大的意義。此外通過中國的糖化血紅蛋白發(fā)展計劃可以推動世界糖化血紅蛋白檢測標準化和質(zhì)量管理的進一步發(fā)展，為糖尿病的治療、診斷、血糖控制、療效觀察、并發(fā)癥控制等提供科學、準確的檢測結(jié)果，從而更好地服務于糖尿病患者和廣大醫(yī)務工作者。

[參考文獻]

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[6]? 蘇淑娟.血糖及糖化血紅蛋白聯(lián)合檢測糖尿病的臨床意義及分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2017，14（z2）：380-383.

[7]? 宋明愛，王璐.糖尿病腎病血液透析患者血清氨甲酰血紅蛋白、糖化血紅蛋白含量檢測及其臨床價值評估[J].海南醫(yī)學院學報，2016，22（12）：1296-1299.

[8]? 潘柏申.我國醫(yī)學檢驗部門自建檢測方法發(fā)展與管理建議[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2017，40（3）：162-164.