基于板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量研究板藍(lán)根加工方法

王 林，金傳山,2,3，張 偉,2,3，鄭曉倩，朱月健

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2.中藥復(fù)方安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012；3.中藥飲片制造新技術(shù)安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012；4.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800)

板藍(lán)根為十字花科植物菘藍(lán)IsatisindigoticaFort.的干燥根，有清熱解毒、涼血利咽之功效[1]。板藍(lán)根作為傳統(tǒng)抗病毒中藥之一，2015年版《中華人民共和國藥典》即以(R,S)-告伊春作為含量測定項，現(xiàn)代藥理研究表明，(R,S)-告伊春是板藍(lán)根水提液中明確的抗病毒活性成分[2]。而(R,S)-告伊春是由芥子苷類物質(zhì)(表原告伊春和原告伊春)在加熱或其他條件下發(fā)生降解反應(yīng)轉(zhuǎn)化而得到的。因為芥子苷類物質(zhì)并無生物活性，只有被降解后才具有抗病毒的活性[3-4]。

課題組前期產(chǎn)地調(diào)研時發(fā)現(xiàn)，黑龍江產(chǎn)板藍(lán)根在產(chǎn)地加工過程中存在兩個問題：一是在產(chǎn)地加工過程中，以曬干為主要干燥方式，這種模式獲得的板藍(lán)根藥材中(R,S)-告伊春的含量僅能達(dá)到《中華人民共和國藥典》規(guī)定的下限，品質(zhì)較差；二是中成藥加工中，直接將產(chǎn)地曬干的板藍(lán)根藥材破碎為粗顆粒投料使用，這種生產(chǎn)模式不符合優(yōu)質(zhì)藥材生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)飲片，進(jìn)而生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)中成藥的指導(dǎo)原則。

因此，本研究以黑龍江大慶、齊齊哈爾等生產(chǎn)的板藍(lán)根為研究對象，共收集4批新鮮板藍(lán)根藥材以及15批曬干藥材，采用高效液相色譜法測定板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量，對比板藍(lán)根烘干品與曬干品、板藍(lán)根藥材軟化切制形成飲片與板藍(lán)根藥材直接破碎成顆粒之間的質(zhì)量差異，以期通過工藝優(yōu)化提升板藍(lán)根質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(G1312C二元泵，G1316B二極管陣列檢測器)：美國安捷倫公司；DZKW-S-4型電熱恒溫水浴鍋：上?？坪銓崢I(yè)發(fā)展有限公司；Sartorius BSA224S 萬分之一電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司；Sartorius ME5百萬分之一電子天平：德國Sartorius公司；電熱鼓風(fēng)式干燥箱：上海博迅實業(yè)有限公司。

1.2 試藥 (R,S)-告伊春對照品(批號Z27M8X36933，純度≥98%)：上海源葉生物科技有限公司；甲醇(色譜級)；純凈水：杭州娃哈哈公司。

19批藥材均于2017年10月采自黑龍江省大慶市及齊齊哈爾市等地，采收信息見表1。所采樣品經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)俞年軍教授鑒定為十字花科植物菘藍(lán)IsatisindigoticaFort.干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 (R,S)-告伊春含量測定

2.1.1 供試品制備 取本品粉末(過4號篩)約1 g，精密稱定，置圓底瓶中，精密加入水50 mL，稱定質(zhì)量，煎煮2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 對照品制備 取(R，S)-告依春對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為40.70 μg/mL的對照品溶液，即得。

2.1.3 色譜條件 Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱；以甲醇-0.02%磷酸溶液(7∶93)為流動相；檢測波長為245 nm。理論板數(shù)按(R，S)-告依春峰計算應(yīng)不低于5 000。

2.2 板藍(lán)根烘干藥材與曬干藥材(R,S)-告伊春含量比較

2.2.1 不同溫度干燥對板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量的影響 取S16新鮮板藍(lán)根樣品，洗凈，平攤至表面無水珠。選擇粗細(xì)均勻的板藍(lán)根，置于敞口式烘干機(jī)，烘干組按照40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃不同溫度梯度設(shè)置，直至烘干；曬干組置于空曠地方曬干，干燥程度以掰斷有清脆響聲即可。依據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》板藍(lán)根項下(R,S)-告伊春含量測定法進(jìn)行測定，不同烘干溫度對板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量的影響見表2。

表1 板藍(lán)根藥材樣品信息

表2 不同溫度干燥對板藍(lán)根(R,S)-告依春含量的影響(n=3)

2.2.2 不同產(chǎn)地板藍(lán)根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比較 取3批不同產(chǎn)地新鮮板藍(lán)根樣品，洗凈，平攤至表面無水珠。將烘干組板藍(lán)根置于敞口式烘干機(jī)，60 ℃烘干；將曬干組板藍(lán)根置于空曠地方曬干，測得不同工藝下板藍(lán)根(R,S)-告伊春含量。結(jié)果表明，60 ℃烘干工藝能夠明顯提升板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量。見表3、圖1。

2.3 板藍(lán)根飲片與板藍(lán)根藥材粗顆粒中(R,S)-告伊春含量比較

2.3.1 板藍(lán)根飲片軟化切制工藝正交實驗優(yōu)選 取S16板藍(lán)根曬干藥材，除去雜質(zhì)，凈選粗細(xì)均勻的板藍(lán)根藥材300 g，平行9份，以浸潤用水量(A)、浸潤時間(B)、飲片厚度(C)和烘干溫度(D)為考察因素，采用L9(34)正交試驗表優(yōu)選軟化切制工藝，將9份平行樣置于托盤中，均勻擺放，每隔1 h噴淋1次，潤透，取出，切片，烘干。取出放涼，置于塑封袋中，備用。見表4、表5。

表3 不同產(chǎn)地板藍(lán)根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比較(n=3)

注：1.(R,S)-告伊春對照品；2.板藍(lán)根60 ℃烘干藥材；3.板藍(lán)根曬干藥材

圖1 板藍(lán)根曬干品與60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量對照色譜圖

表5 板藍(lán)根飲片軟化切制工藝優(yōu)選正交試驗(n=2)

由表5直觀分析可知，影響板藍(lán)根軟化切制的主次因素依次是D、A、B、C，軟化切制最佳工藝組合為A1B1C2D2，即0.6倍水浸潤12 h，飲片厚度為3 mm，60 ℃烘干。

2.3.2 板藍(lán)根粗顆粒與板藍(lán)根飲片(R,S)-告伊春含量比較 按照同一組樣品平行對照原則，采用“2.3.1”項中優(yōu)選出的最佳軟化切制工藝對15批不同來源的板藍(lán)根進(jìn)行加工，得到軟化切制前后板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量。結(jié)果表明，軟化切制過程能明顯提升板藍(lán)根中(R,S)-告伊春的含量。見表6、圖2。

表6 板藍(lán)根藥材及軟化切制后飲片(R,S)-告伊春含量測定(n=3)

圖2 (R,S)-告伊春對照品(1)、板藍(lán)根飲片(2)

3 討論

在烘干工藝研究中，60 ℃烘干所得板藍(lán)根(R,S)-告伊春含量最高。對比同一批新鮮板藍(lán)根藥材以60 ℃烘干和曬干兩種工藝獲得的(R,S)-告伊春含量，發(fā)現(xiàn)60 ℃烘干制得的板藍(lán)根藥材中(R,S)-告伊春含量明顯高于曬干者，且烘干法干燥藥材大約需要12～14 h，曬干法則需要15 d左右。烘干板藍(lán)根不僅有效成分(R,S)-告伊春含量得到提升，而且加工周期短，因此建議產(chǎn)地加工以烘干法代替曬干法，以提升黑龍江產(chǎn)板藍(lán)根的質(zhì)量。

在軟化切制研究中，利用正交設(shè)計試驗法優(yōu)選出最佳的軟化切制工藝為0.6倍水，噴淋12 h，切片厚度3 mm，60 ℃烘干。通過比較板藍(lán)根粗顆粒與板藍(lán)根飲片(R,S)-告伊春含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過軟化切制再烘干的工藝過程能明顯提升板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量。但由于板藍(lán)根烘干成本較高，故難以在產(chǎn)地全面推廣烘干法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的曬干法，軟化切制工藝研究表明，若使用產(chǎn)地曬干品藥材作為中成藥投料，需要采用軟化切制后的飲片，以確保中成藥的質(zhì)量。

(R,S)-告伊春是一對對映體，分別為R-告伊春和S-告伊春，現(xiàn)有文獻(xiàn)研究表明，R-告伊春是板藍(lán)根抗病毒的有效成分[2]，而S-告伊春具有致甲狀腺腫大的不良反應(yīng)[5]。本研究表明，烘干工藝及軟化切制工藝均能使板藍(lán)根中(R,S)-告伊春含量升高，而其提升的是R-告伊春還是S-告伊春則有待進(jìn)一步研究，從而更加科學(xué)地評價兩種工藝的合理性。

[安徽省高?？蒲袆?chuàng)新平臺團(tuán)隊(中藥飲片產(chǎn)地加工與炮制一體化關(guān)鍵技術(shù)研究創(chuàng)新團(tuán)隊)對本課題給予了支持，謹(jǐn)致謝意！]