乳油木化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展

李達(dá)，張杰，柳文媛，馮鋒,

(1. 中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇 南京210009；2.中國藥科大學(xué)藥物分析教研室，江蘇 南京210009；3. 江蘇食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 江蘇淮安223003)

乳油木（Vitellaria paradoxaC. F. Gaertn）是山欖科（Sapotaceae）牛油果屬（Butyrospermum Kotschy） 硬木[1]。由于氣候及種植業(yè)方面的原因，乳油木只能在非洲大陸存活，主要產(chǎn)于西經(jīng)16°至東經(jīng)34°、北緯1°至15°的亞撒哈拉地區(qū)間。乳油木屬“藥食同源”植物，樹葉、樹皮、果實(shí)（又稱乳木果）、根等均可藥用；果實(shí)營養(yǎng)豐富，果肉可直接食用，其中高含量的油脂是當(dāng)?shù)厥秤弥镜闹饕獊碓粗籟2-4]。乳油木在當(dāng)?shù)厮幱脷v史悠久，其各藥用部位常用于治療炎癥、皮疹、曬傷、風(fēng)濕、頭痛、胃病、腹瀉、潰瘍、痢疾、麻風(fēng)病等疾病[5-9]。藥妝學(xué)研究顯示：乳油木中提取的乳木果油，近年來被廣泛用于皮膚護(hù)理產(chǎn)品和化妝品的產(chǎn)品配方，具有滋養(yǎng)補(bǔ)濕、防紫外線、抗炎、抗過敏等作用[10-15]。化學(xué)成分研究表明：乳油木中含有的化學(xué)成分包括三萜類、酚類及揮發(fā)油類等成分[16-17]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：乳油木具有抗黑色素、抑制EB病毒早期抗原（EBVEA）、抗炎、驅(qū)蟲、抗菌、抗氧化和細(xì)胞毒等藥理作用[18-23]。本文對(duì)乳油木植物的化學(xué)成分與藥理作用進(jìn)行了系統(tǒng)的綜述，為資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 乳油木化學(xué)成分研究

國內(nèi)外學(xué)者對(duì)乳油木化學(xué)成分的研究主要集中在乳木果仁、樹皮及樹葉部位。隨著分離技術(shù)的提高、結(jié)構(gòu)鑒定手段的進(jìn)步，乳油木中被發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分的種類與數(shù)量越來越多，目前主要有三萜類、酚類、有機(jī)酸和甾體類等若干成分。

1.1 三萜類成分

三萜類成分在乳油木中分布最為廣泛，且由于其良好的生物活性而受到重視。目前從乳油木中鑒定了近40個(gè)三萜類化合物（1 ～ 38），其中齊墩果烷型、烏蘇烷型和羽扇豆烷型等五環(huán)三萜是其主要的結(jié)構(gòu)類型（見表1）。

表1 乳油木中的三萜類成分Table 1 Terpenoids from Vitellaria paradoxa

1.2 酚類成分

乳油木中存在著豐富的酚類成分，包括黃酮、酚酸（及其苷）等，其中黃酮類成分主要是兒茶素和表兒茶素類化合物（39 ～ 52，見表2）。

1.3 有機(jī)酸及甾體類成分

從乳油木中還分離鑒定了部分有機(jī)酸和甾體類化合物（53 ～ 58，見表3），其中有機(jī)酸類成分主要是茉莉酮酸及其衍生物。

1.4 揮發(fā)油及其他類成分

Aboaba等[27]采用GC-MS法，對(duì)乳油木樹葉和樹皮中的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析，分別鑒定了68和33個(gè)揮發(fā)油組分，分別占檢出量的90.1%和95.1%；其中主要成分為芳樟醇（12.2%，15.0%）、（E）-β-紫羅蘭酮（8.4%，＜0.1%）、水楊酸甲酯（7.0%，＜0.1%）、壬醛（6.9%，5.5%）、1-壬醇（5.8%，ND）（ND即未檢出）、反式丁香烯（4.9%，1.5%）、香葉基丙酮（3.7%，5.2%）、檸檬烯（3.0%，14.8%）、正癸烷（2.9%14.4%）、均三甲苯（1.2%，8.1%）、偏三甲苯（ND，8.6%等。Owolabi等[28]采用GC-MS法，對(duì)乳油木樹皮中的揮發(fā)油進(jìn)行了分離鑒定，共鑒定了42個(gè)成分，占檢出量的93.0%；主要成分為大根香葉烯D（21.8%）、芳樟醇（6.5%）、反式石竹烯（6.3%）、植物醇（4.9%）、β-欖香烯（3.8%）等。此外，乳油木中還含有脂肪醇、微量元素（Ca、Fe等）、維生素（VB、VC等）等營養(yǎng)成分[29-30]。

表2 乳油木中的酚類成分Table 2 Phenols from Vitellaria paradoxa

表3 乳油木中的有機(jī)酸及甾體類成分Table 3 Organic acids and steroids from Vitellaria paradoxa

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2 乳油木藥理作用研究

2.1 抗黑色素作用

經(jīng)紫外線照射后，人體皮膚表面產(chǎn)生過量自由基，經(jīng)一系列反應(yīng)后造成諸多皮膚問題，如黃褐斑、雀斑、老年斑等。人體內(nèi)的α-促黑色素（α-MSH）與黑皮質(zhì)素受體1（MC1R）結(jié)合后，刺激腺苷酸環(huán)化酶活化，進(jìn)而產(chǎn)生過量的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）；cAMP在蛋白激酶A（PKA）作用下，引起環(huán)磷酸腺苷效應(yīng)元件蛋白（CREB）轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，并影響細(xì)胞內(nèi)主要調(diào)節(jié)子（TORC1），結(jié)果導(dǎo)致小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（MITF）蛋白水平上調(diào)。隨后，MITF與黑色素生成基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合，使酪氨酸酶羥化成多巴（DOPA），DOPA繼而氧化成多巴醌，最終導(dǎo)致黑色素的異常過度積累，使得皮膚變得暗淡，甚至發(fā)黑[31-32]。

Zhang等[16]前期研究了脫脂乳木果仁甲醇提取物、乙酸乙酯（EtOAc）部位、正丁醇（n-BuOH）部位、水（H2O）部位及分離的單體化合物的抗黑色素活性。對(duì)α-MSH誘導(dǎo)下的B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞，提取物（100 mg · L-1）具有明顯的抗黑色素活性（黑色素抑制率71.8%），但同時(shí)細(xì)胞毒性也較強(qiáng)（細(xì)胞存活率51.8%）；EtOAc部位具有較好的抗黑色素活性（黑色素抑制率42.0%），但細(xì)胞毒性也較強(qiáng)（細(xì)胞存活率63.4%）。提取物中分離的部分黃酮、酚酸和三萜類成分對(duì)B16細(xì)胞具有較好的抗黑色素活性，同時(shí)無顯著的細(xì)胞毒性。蛋白質(zhì)印跡法（Western-blot）分析表明：齊墩果烷型化合物paradoxoside E（濃度為100 μmol · L-1時(shí)，黑色素抑制率58.0%，細(xì)胞存活率90.5%）通過抑制MITF、酪氨酸酶、酪氨酸相關(guān)蛋白1（TRP-1）和TRP-2等蛋白的表達(dá)產(chǎn)生抗黑色素活性。另外，Zhang等[18]還研究發(fā)現(xiàn)，脫脂乳木果仁中的茉莉酮酸、葡萄糖基茉莉酮酸和茉莉酮酸甲酯對(duì)B16細(xì)胞亦顯示良好的黑色素生成抑制活性。Western-blot分析結(jié)果表明：茉莉酮酸、葡萄糖基茉莉酮酸亦通過抑制MITF、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2等蛋白的表達(dá)（TRP-2呈濃度依賴性）產(chǎn)生抗黑色素作用。

2.2 EB病毒早期抗原抑制作用

Zhang等[18]研究了乳木果仁中茉莉酮酸衍生物和對(duì)12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯（TPA）誘導(dǎo)下淋巴瘤細(xì)胞（Raji）內(nèi)的EBV-EA的抑制活性。研究結(jié)果表明：葡萄糖基茉莉酮酸對(duì)EBV-EA顯示了較強(qiáng)的抑制活性，茉莉酮酸、茉莉酮酸甲酯和葡萄糖基茉莉酮酸甲酯對(duì)EBV-EA顯示了較弱的抑制活性。基于EBVEA與體內(nèi)促腫瘤過程相關(guān)，因此，茉莉酮酸衍生物可以作為潛在促腫瘤抑制劑。

2.3 抗炎作用

Foyet等[34]采用了由角叉菜膠（carrageenan）誘導(dǎo)的Wistar大鼠足腫脹方法來評(píng)估乳油木樹皮甲醇提取物的抗炎作用。實(shí)驗(yàn)中，在注射100 μg角叉菜膠30 min前對(duì)大鼠后爪足底表面進(jìn)行處理；注射角叉菜膠6.5 和7 h后檢測(cè)爪容積脈搏波。而后，對(duì)大鼠經(jīng)口給予不同劑量的甲醇提取物。結(jié)果顯示：甲醇提取物（75 mg · kg-1）處理模型在1 h作用時(shí)間后，對(duì)炎癥表現(xiàn)出顯著的抑制活性（抑制率66.67%）。結(jié)果分析表明，注射角叉菜膠后引起的急性炎癥反應(yīng)通過3個(gè)階段發(fā)生：初始階段（1.5 h）涉及血清素和組胺的釋放；第2階段（1.5 ～ 2.5 h）由緩激肽介導(dǎo)；第3階段（2.5 ～ 6 h）是炎癥反應(yīng)過程中最重要的階段，該過程由前列腺素和β-受體介導(dǎo)。提取物抗炎作用主要通過抑制核因子κB（NF-κB）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、黏附分子（細(xì)胞間黏附分子-1和血管細(xì)胞黏附分子-1）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和IL-8等細(xì)胞因子水平，同時(shí)促進(jìn)IL-4和IL-10的產(chǎn)生實(shí)現(xiàn)。Eyong等[24]研究了乳油木樹皮乙酸乙酯提取物對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)的炎癥模型Wistar大鼠的抗炎活性。研究結(jié)果表明：乙酸乙酯提取物（150 mg · kg-1）處理模型在第1階段和第2階段能顯著地抑制（抑制率66.67 %）大鼠的水腫形成。藥理機(jī)制研究表明：提取物降低了血清素和組胺的水平，并抑制了前列腺素合成的關(guān)鍵酶——環(huán)氧酶1（COX-1）和環(huán)氧酶2（COX-2）。

Verma等[7]采用了脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的鼠巨噬細(xì)胞系J774研究乳油木樹脂甲醇提取物的抗炎機(jī)制。研究結(jié)果表明：甲醇提取物處理模型能顯著地降低LPS誘導(dǎo)的一氧化氮（NO）、TNF-α、IL-1β和IL-12的水平，并呈劑量依賴關(guān)系。此外，促炎癥酶、iNOS和COX-2也被抑制。上述抗炎作用是由于樹脂甲醇提取物有效抑制了NF-κB抑制蛋白（IκBα）的磷酸化，從而抑制了iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β和IL-12的信使RNA（mRNA）和蛋白的表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)直接從分子水平上解釋了乳油木樹脂甲醇提取物抗炎活性機(jī)制。目前，基于其開發(fā)的有關(guān)藥妝產(chǎn)品已可用于皮膚的抗炎抗敏護(hù)理，因此，進(jìn)一步探究有抗炎作用的乳油木成分能否作為藥妝活性組分具有重要意義。

2.4 驅(qū)蟲作用

Ramsay等[35]研究了乳木果仁中富含原花青素組分的驅(qū)蟲活性。實(shí)驗(yàn)中，使用了丙酮/水（7 : 3）混合溶劑對(duì)乳木果仁進(jìn)行提取，并經(jīng)葡萄糖凝膠柱色譜分離得到3個(gè)富含原花青素的組分。這3個(gè)組分經(jīng)遷移抑制實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)豬蛔蟲幼蟲的遷移有明顯抑制作用，且呈濃度依賴性。研究證明：原花青素在機(jī)體內(nèi)的生物利用度非常低，因此可以在胃腸道長時(shí)間發(fā)揮作用，且B環(huán)中具有高比例羥基數(shù)量的黃烷-3-醇及其沒食子酸化衍生物（如化合物46）是黃烷-3-醇中抑制幼蟲蛻鞘活性最強(qiáng)的化合物。此外，研究還發(fā)現(xiàn)了乳木果仁中分離的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，46）具有良好的驅(qū)蟲活性，可作為潛在驅(qū)蟲藥的合成替代品，其進(jìn)一步證明了黃烷-3-醇中B環(huán)高比例羥基數(shù)量及其沒食子酸化有利于增強(qiáng)化合物的驅(qū)蟲活性。

2.5 抗菌作用

Ndukwe等[3]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、傷寒沙雷菌和傷寒沙門菌，乳油木根、樹皮和樹葉的甲醇提取物較石油醚提取物有著更強(qiáng)的抑菌作用。此外，樹皮提取物對(duì)蠟狀芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、傷寒沙雷菌和傷寒沙門菌的最低抑菌濃度（MIC）為50 g · L-1；樹葉提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和傷寒沙門菌的MIC為70 g · L-1；根提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、傷寒沙雷菌和傷寒沙門菌的MIC為60 g · L-1。所有提取物的最低殺菌濃度（MBC）均略高于MIC。El-Mahmood等[6]研究發(fā)現(xiàn)，乳油木樹皮的水、丙酮和乙醇提取物對(duì)致病性大腸埃希菌、奇異變形桿菌和沙門菌的生長有著良好的抑制作用，且呈濃度依賴性。其中以乙醇提取物的抗菌活性最強(qiáng)，3種提取物的 MIC 和 MBC 范圍均為 6.5 ～ 200 g · L-1。

Ajijolakewu等[36]采用瓊脂擴(kuò)散法和肉湯稀釋法評(píng)價(jià)了乳油木種子、樹皮和樹葉乙醇提取物對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙雷菌的抑制活性。研究結(jié)果顯示：所有提取物對(duì)受試細(xì)菌均有抑制作用，且對(duì)大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌抑制作用較傷寒沙雷菌更為明顯。Falana等[37]采用紙片擴(kuò)散法測(cè)定了乳油木根、樹皮和樹葉的甲醇、omidun（發(fā)酵3 d的玉米水）、無菌omidun和水提取物對(duì)大腸埃希菌、沙門菌、傷寒沙門菌和弗氏志賀菌的抑制活性。研究結(jié)果顯示：所有提取物對(duì)選取的各類型細(xì)菌均表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性。不同提取物在不同濃度下的抑菌效果有顯著性差異（P＜0.05），且提取液濃度越高，抑菌范圍越寬。各部位甲醇提取物具有最好的抑菌效果，其次是omidun提取物。無菌omidun和水提取物在高濃度時(shí)抑菌活性弱，低濃度時(shí)無抑菌活性。

2.6 抗氧化作用

Fodouop等[38]研究了乳油木樹葉水提取物體內(nèi)外的抗氧化活性。1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除實(shí)驗(yàn)顯示：水提取物抗氧化IC50為320.03 μg ·kg-1。對(duì)鼠傷寒沙門菌感染的大鼠每日給予不同劑量的水提取物（55、110、220 和 440 mg · kg-1），連續(xù)給藥18 d后，發(fā)現(xiàn)水提取物處理模型能夠抑制鼠傷寒沙門菌感染引起的細(xì)菌感染和細(xì)胞氧化，且總膽固醇、三酰甘油酯、膽汁酸、血脂、丙二醛、還原型谷胱甘肽和膽紅素等參數(shù)水平顯著降低。

Foyet等[39]研究了乳油木樹皮甲醇提取物在東莨菪堿誘導(dǎo)的大鼠模型中的氧化應(yīng)激作用。實(shí)驗(yàn)中，大鼠每天單次注射東莨菪堿（1.5 mg · kg-1）和甲醇提取物（25和50 mg · kg-1），連續(xù)8 d。研究結(jié)果表明：甲醇提取物處理模型通過衰減氧化應(yīng)激改善東莨菪堿誘導(dǎo)的大鼠海馬中的記憶障礙，此時(shí)總還原型谷胱甘肽和總丙二醛等參數(shù)顯著降低?；谶^量自由基與黑色素的產(chǎn)生有密切的關(guān)系，抗氧化活性的評(píng)價(jià)是篩選潛在抗黑色素活性成分的重要實(shí)驗(yàn)部分，故乳油木樹葉水提物和樹皮甲醇提取物具有進(jìn)一步篩選黑色素抑制活性成分的研究價(jià)值。

2.7 細(xì)胞毒作用

Aboaba等[27]采用了鹵蟲致死試驗(yàn)方法，研究了乳油木樹皮和樹葉中揮發(fā)油的細(xì)胞毒活性。結(jié)果表明：樹皮和樹葉中揮發(fā)油的半數(shù)致死質(zhì)量濃度（LC50）分別為160.098和171.240 mg · L-1，表明揮發(fā)油具有中等毒性并且含有相關(guān)活性化合物。Zhang等[16]研究了脫脂乳木果仁甲醇提取物、各萃取部位及分離的單體化合物對(duì)人癌細(xì)胞系中的人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞（HL-60）、肝癌細(xì)胞（A549）、人胃癌細(xì)胞（AZ521）和人乳腺癌細(xì)胞（SK-BR-3）的細(xì)胞毒活性。研究結(jié)果表明：總提物對(duì)HL-60具有較好的細(xì)胞毒活性（IC50= 76.6 mg · L-1）；萃取部位中，H2O部位活性最強(qiáng)，對(duì)4種癌細(xì)胞均有良好的細(xì)胞毒活性（IC50為 43.2 ～ 88.0 mg · L-1）。分離得到單體化合物中三萜類成分具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性。

3 結(jié)語

乳油木作為非洲當(dāng)?shù)刂匾摹八幨惩础敝参?，生活中常被用于治療各類炎癥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究則進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了其抗黑色素、抑制EBV-EA、驅(qū)蟲等方面的活性。其中，特別是抗黑色素、抗氧化活性，被認(rèn)為是乳油木植物具有美白潛力的重要依據(jù)。結(jié)合目前藥妝品臨床多應(yīng)用于祛除皮膚色斑、消除皮膚暗黃、祛除皮膚皺紋等情況，乳油木及其活性成分在藥妝領(lǐng)域皮膚美白方面存在較大的開發(fā)潛力，為發(fā)現(xiàn)新的美白活性成分，提供了新的植物來源。故應(yīng)對(duì)顯示抗黑色素活性的乳油木提取物及單體化合物深入開展皮膚美白相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，可將活性成分制成護(hù)膚霜或護(hù)手霜等劑型，并評(píng)價(jià)該劑型對(duì)花色豚鼠模型的皮膚美白效應(yīng)。

此外，對(duì)乳油木化學(xué)成分研究多集中于乳木果仁部位及三萜類化合物，且藥理作用的研究也多是抗炎、抗菌及細(xì)胞毒活性。因此，需進(jìn)一步對(duì)乳油木其他藥用部位的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，并結(jié)合傳統(tǒng)藥用功效與最新藥理活性研究進(jìn)展，注重對(duì)有效成分的作用機(jī)制進(jìn)行深入探究，以期發(fā)現(xiàn)具有臨床使用價(jià)值的藥物，為乳油木資源開發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)。筆者所在課題組已開展了對(duì)乳木果美白活性成分研究及乳木果殼降糖機(jī)制研究, 有望對(duì)乳油木資源在功能性食品和新藥開發(fā)方面提供理論指導(dǎo)依據(jù)。