• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微生物顯色法檢測(cè)禽畜肉中混合抗生素殘留

    2019-06-05 01:05:26高曉月范維陳淑敏李瑩瑩王守偉郭文萍
    肉類研究 2019年4期
    關(guān)鍵詞:畜禽肉高通量

    高曉月 范維 陳淑敏 李瑩瑩 王守偉 郭文萍

    摘 要:以微生物顯色為原理,建立一種對(duì)畜禽肉中單一或配伍使用的抗生素進(jìn)行聯(lián)合初篩的高通量方法,并用色譜法對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行驗(yàn)證。以大腸埃希氏菌(Escherichia coli,CICC 23657)作為指示菌,選取適當(dāng)?shù)目股貧埩籼崛》椒?,并通過(guò)單因素試驗(yàn)優(yōu)化檢測(cè)液配方及檢測(cè)體系組成,最終實(shí)現(xiàn)對(duì)不同類別抗生素的聯(lián)合檢測(cè)。結(jié)果表明:選取檸檬酸-丙酮緩沖液進(jìn)行提取,提取效率達(dá)到86%~88%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.9%~4.3%;蛋白胨添加量為1.0 g/100 mL、溴甲酚紫指示劑添加量為2.0 mg/100 mL、pH值為7.2時(shí),檢測(cè)液顯色效果較好;菌懸液初始吸光度(A600 nm)為0.4,檢測(cè)液、菌液、樣品提取液體積為150 μL∶50 μL∶100 μL時(shí),檢測(cè)效果最佳,對(duì)畜禽肉中喹諾酮類抗生素的檢出限為60~180 μg/kg,氨基糖苷類檢出限為60~140 μg/kg,喹諾酮類與氨基糖苷類配伍使用時(shí)的檢出限為40~180 μg/kg;進(jìn)一步用色譜法對(duì)50 份樣品的初篩結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,無(wú)假陰性樣品存在,說(shuō)明該方法可用于畜禽肉中抗生素殘留的初篩。

    關(guān)鍵詞:微生物顯色法;畜禽肉;抗生素殘留;高通量

    Abstract: A new microbial chromogenic assay was developed for high throughput screening for single and compatible combinations of antibiotic residues in livestock and poultry meat, and it was validated by liquid chromatography (LC). Escherichia coli was used as the indicator strain to detect a variety of antibiotics simultaneously. The optimal extraction conditions were determined and the reaction system and conditions were optimized by one-factor-at-a-time method. The results showed that citric acid-acetone mixture was the solvent of choice for the extraction procedure, giving an extraction efficiency of 86%–88% with a relative standard deviation ranging from 3.9% to 4.3%. Addition of 1.0 g/100 mL of peptone and?2.0 mg/100 mL of bromocresol purple and pH adjustment to 7.2 were found to be the optimal conditions for chromogenic reaction. The optimal detection conditions were as follows: initial absorbance value (A600 nm) of bacterial suspension 0.4, and ratio of reaction system to bacterial suspension to sample extract 150:50:100 (V/V). The limit of detection of the proposed method was 60–180, 60–140 and 40–180 μg/kg for quinolones, aminoglycosides and their combinations in livestock and poultry meat, respectively. For 50 positive samples with antibiotic residue determined by the microbial chromogenic assay, no false negative results were obtained.? Thus this assay can be used in screening for antibiotic residues in livestock and poultry meat.

    Keywords: microbial chromogenic assay; livestock and poultry meat; antibiotic residues; high-throughput

    DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20190222-032

    中圖分類號(hào):TS251.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1001-8123(2019)04-0036-06

    喹諾酮類抗生素是一類廣譜抗生素,在畜禽獸藥中得到廣泛應(yīng)用[1-3],用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病或微生物污染以及作為膳食補(bǔ)充劑[4-6]。相關(guān)研究[7-8]表明,畜禽肉中喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素的殘留率較高,這主要是因?yàn)閲?guó)內(nèi)養(yǎng)殖業(yè)為了縮短療程,降低藥物毒副作用,減少致病菌耐藥情況發(fā)生,常常把氨基糖苷類等抗生素與其配伍使用,這無(wú)形中加大了抗生素殘留檢測(cè)的難度,尋求高通量檢測(cè)方法將成為未來(lái)發(fā)展的主要方向[9-11]。抗生素殘留的檢測(cè)方法包括微生物檢測(cè)法、免疫分析法和色譜法[12-14]。在這3 類方法中,色譜法和免疫分析法具有靈敏性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn),但是均存在檢測(cè)具有單一性、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備投入大和對(duì)技術(shù)人員要求高等問(wèn)題[15-17],不能滿足高通量、快速檢測(cè)的發(fā)展需要。相較于以上2 種方法,微生物檢測(cè)法在應(yīng)用中具有操作便捷、成本較低、有廣泛篩查性的特點(diǎn)[18-20],可作為一種高通量初篩方法用于畜禽肉中抗生素殘留的檢測(cè),在中小型禽畜肉養(yǎng)殖加工企業(yè)中具有良好的推廣前景。

    目前,在我國(guó)微生物顯色法主要采用嗜熱脂肪芽孢桿菌[21-23]、蠟樣芽孢桿菌[24]等作為指示菌對(duì)原料乳中殘留的青霉素類抗生素進(jìn)行檢測(cè),在畜禽肉中應(yīng)用較少[25-27],主要原因有兩點(diǎn):一是由于畜禽肉的體系較復(fù)雜,抗生素提取存在困難;二是由于現(xiàn)有指示菌對(duì)禽畜肉中常見的喹諾酮類抗生素不敏感。因此,本研究針對(duì)以上技術(shù)難題選擇大腸埃希氏菌為指示菌[28-29],開發(fā)適合畜禽肉中抗生素殘留檢測(cè)的提取方法,并優(yōu)化檢測(cè)液配方及檢測(cè)體系組成,建立一種可同時(shí)對(duì)畜禽肉中喹諾酮類及常與其配伍使用的氨基糖苷類抗生素進(jìn)行聯(lián)合初篩的高通量方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 菌種與樣品

    大腸埃希氏菌(Escherichia coli)由中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供、菌號(hào)為CICC 23657的標(biāo)準(zhǔn)菌株;禽畜肉購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

    1.1.2 試劑

    喹諾酮類:恩諾沙星、環(huán)丙沙星、司帕沙星、麻保沙星、達(dá)氟沙星、氟甲喹、二氟沙星;氨基糖苷類:慶大霉素、鏈霉素、新霉素、安普霉素、丁胺卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma公司;蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖、溴甲酚紫指示劑、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(violt red bile agar,VRBA) 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;其他試劑為分析純或色譜純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    ESJ120-4電子天平 龍騰儀器有限公司;PHSJ-4A實(shí)驗(yàn)室pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;UltiMate 3000高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(配備電噴霧離子源)、1510-07269C酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司;BPC-150F培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司;KDC-140HR離心機(jī) 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品處理

    1.3.1.1 溶液配制

    標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制:準(zhǔn)確量取各抗生素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用去離子水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制:準(zhǔn)確量取各抗生素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,兩兩等體積混合,用去離子水稀釋成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    檸檬酸-丙酮緩沖溶液的配制:將0.2 mol/L檸檬酸溶液和0.5 mol/L氫氧化鉀溶液等體積混合,向35 mL混合液中加入35 mL丙酮和30 mL蒸餾水,充分混勻。

    檸檬酸-乙醇緩沖溶液的配制:將0.2 mol/L檸檬酸溶液和0.5 mol/L氫氧化鉀溶液等體積混合,向35 mL混合液中加入35 mL乙醇和30 mL蒸餾水,充分混勻。

    檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液的配制:將0.2 mol/L磷酸氫二鈉16.47 mL、0.1 mol/L檸檬酸3.53 mL充分混勻。

    1.3.1.2 樣液提取

    取3 個(gè)50 mL離心管,分別加入10 g均質(zhì)好的肌肉組織樣品,再向各管中分別加入20 mL檸檬酸-丙酮緩沖溶液、20 mL檸檬酸-乙醇緩沖溶液和20 mL檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液,用漩渦振蕩器振蕩3 min,充分振蕩后于70~75 ℃水浴20 min,10 000 r/min離心5 min,取上清液作為樣液。

    1.3.1.3 提取液的選擇

    對(duì)3 種提取液(檸檬酸-丙酮緩沖溶液、檸檬酸-乙醇緩沖溶液和檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液)的蛋白沉淀效果進(jìn)行比較,并將各上清液進(jìn)行色譜法測(cè)定,確定不同提取液中各類抗生素的提取效率,最終選取適宜的抗生素提取液。

    1.3.2 檢測(cè)液配方優(yōu)化

    檢測(cè)液配制方法為:蛋白胨0.5~2.0 g、溴甲酚紫指示劑2.0~8.0 mg、葡萄糖1.0 g、NaCl 0.5 g、牛肉浸膏0.3 g、加水定容至100 mL,pH值調(diào)至6.8~7.4,加熱煮沸至完全溶解,121 ℃高壓滅菌15 min。

    1.3.2.1 反應(yīng)變色時(shí)間及指示菌菌落總數(shù)的確定

    按檢測(cè)液∶菌懸液∶生理鹽水體積比3∶1∶2的比例進(jìn)行混合后,于36 ℃恒溫培養(yǎng),確定變色(檢測(cè)液由紫紅色變黃色)時(shí)間。之后取1 mL進(jìn)行梯度稀釋,選擇適宜的稀釋度,傾注于平皿中,倒入VRBA液體培養(yǎng)基,充分混勻,待瓊脂凝固后,再加入3~4 mL VRBA覆蓋平皿表層,翻轉(zhuǎn)平板,置于36 ℃培養(yǎng)24 h后計(jì)數(shù),確定指示菌生長(zhǎng)情況。

    1.3.2.2 蛋白胨添加量的確定

    在100 mL檢測(cè)液中分別加入0.5、1.0、1.5、2.0 g的蛋白胨,滅菌冷卻后按照1.3.2.1節(jié)的方法進(jìn)行變色時(shí)間和菌落總數(shù)測(cè)定,選取蛋白胨的最佳加入量。

    1.3.2.3 溴甲酚紫添加量的確定

    分別取2.0、4.0、6.0、8.0 mg溴甲酚紫指示劑添加到100 mL檢測(cè)液中,按照1.3.2.1節(jié)的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),選取指示劑的最佳加入量。

    1.3.2.4 檢測(cè)液初始pH值的確定

    將檢測(cè)液初始pH值分別調(diào)為6.8、7.0、7.2、7.4,按照1.3.2.1節(jié)的方法進(jìn)行變色時(shí)間和菌落總數(shù)測(cè)定,從而選取最適的檢測(cè)液初始pH值。

    1.3.3 菌懸液初始吸光度測(cè)定和檢測(cè)體系組成的確定

    無(wú)菌狀態(tài)下,挑取已培養(yǎng)好的指示菌菌落接入營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,配制成不同初始吸光度(A600 nm)的菌懸液,其吸光度分別為0.1、0.4、0.6、0.8、1.0,加入到以下3 組體系中,體系比例如表1所示,于36 ℃恒溫培養(yǎng),確定各組檢測(cè)液的變色時(shí)間。選擇變色時(shí)間較短的檢測(cè)體系組成,將體系中的生理鹽水換成等體積的0.1 μg/mL環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液或環(huán)丙沙星與鏈霉素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,于同一溫度下恒溫培養(yǎng),進(jìn)行抗生素敏感性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),觀察變色情況,選出檢測(cè)液仍呈紫色組,最終確定最適的菌懸液初始吸光度及檢測(cè)體系組成。

    1.3.4 微生物顯色法檢測(cè)

    按樣品數(shù)取出所需數(shù)量的微孔板,將樣品和對(duì)照組對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣品和對(duì)照做2 孔平行。按照1.3.3節(jié)優(yōu)化的比例,向各微孔中依次加入檢測(cè)液和菌懸液,再按照編號(hào)向各微孔中加入陽(yáng)性對(duì)照(不同抗生素標(biāo)準(zhǔn)液)、陰性對(duì)照(無(wú)抗生素殘留的肉提取液)、空白對(duì)照(生理鹽水)及樣液,于36 ℃恒溫培養(yǎng),觀察變色情況。當(dāng)陰性對(duì)照孔變成黃色時(shí),觀察其他樣品孔顏色變化。

    1.3.5 抗生素檢出限的確定

    1.3.5.1 單標(biāo)檢出限確定

    用去離子水對(duì)12 種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行梯度稀釋,稀釋成10 個(gè)梯度。按上述微生物法進(jìn)行檢測(cè),確定各種抗生素的檢出限。

    1.3.5.2 聯(lián)用檢出限確定

    對(duì)常配伍使用的喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素進(jìn)行混合,使2 種抗生素在混合體系中的終質(zhì)量濃度均為0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 μg/mL,具體如表2所示。按上述微生物法進(jìn)行檢測(cè),確定各種聯(lián)用抗生素檢出限。

    1.3.6 樣品的測(cè)定

    將50 份樣品按照1~50進(jìn)行編號(hào),為保證一定的陽(yáng)性檢出比例,部分樣品采用人工添加的方式。用微生物顯色法進(jìn)行測(cè)試,結(jié)果用色譜法進(jìn)行驗(yàn)證。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和繪圖均采用Origin 8.0數(shù)據(jù)分析軟件。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 抗生素提取液的確定

    通過(guò)觀察3 種提取液的蛋白沉淀效果發(fā)現(xiàn),檸檬酸-丙酮緩沖溶液沉淀蛋白效果較好,上清液呈無(wú)色澄清狀,其他2 種提取液處理的樣品上清液呈微紅色,并有少許殘?jiān)嬖?。取上清液進(jìn)行色譜法檢測(cè),由表3可知,檸檬酸-丙酮緩沖溶液的提取率及穩(wěn)定性均較高,因此,選擇檸檬酸-丙酮緩沖溶液作為提取液。

    2.2 檢測(cè)液配方優(yōu)化結(jié)果

    2.2.1 蛋白胨添加量的確定結(jié)果

    由圖1可知,隨著蛋白胨添加量的增加,菌落總數(shù)呈先升高后下降的趨勢(shì),這與劉冬梅等[30]的研究結(jié)果相似。當(dāng)?shù)鞍纂颂砑恿繛?.0 g/100 mL時(shí),菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值最高,達(dá)7.81 (lg(CFU/mL)),之后隨著蛋白胨添加量的提高,培養(yǎng)基的pH值降低,從而影響了菌種的生長(zhǎng)繁殖。從反應(yīng)時(shí)間上看,菌落總數(shù)越高,檢測(cè)液變色時(shí)間相對(duì)越短,這主要是由于較高濃度的指示菌產(chǎn)酸較多,使指示劑變色較快。因此選擇蛋白胨添加量為1.0 g/100 mL。

    2.2.2 溴甲酚紫添加量的確定結(jié)果

    由圖2可知:當(dāng)溴甲酚紫指示劑的添加量為2.0、4.0 mg/100 mL時(shí),檢測(cè)液的初始顏色呈紫色,反應(yīng)終點(diǎn)顏色變成黃色,區(qū)分度明顯[31],且反應(yīng)時(shí)間可控制在4 h內(nèi);隨著溴甲酚紫指示劑添加量的提高,檢測(cè)液初始顏色呈紫黑色,終點(diǎn)顯色不明顯,且變色時(shí)間較長(zhǎng),因此選擇溴甲酚紫添加量為2.0 mg/100 mL。

    2.2.3 檢測(cè)液初始pH值的確定結(jié)果

    溴甲酚紫指示劑的變色范圍是pH值5.2~6.8,為了保證指示劑正常變色,將檢測(cè)液初始pH值設(shè)定為高于6.8。由圖3可知,當(dāng)檢測(cè)液初始pH值為7.2時(shí),菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值達(dá)到最高,說(shuō)明該pH值是指示菌生長(zhǎng)的最適pH值。并且從反應(yīng)時(shí)間可知,隨著檢測(cè)液初始pH值的升高,反應(yīng)時(shí)間隨之延長(zhǎng),當(dāng)pH值小于7.2時(shí),反應(yīng)時(shí)間可以控制在4 h內(nèi)。由于抗生素對(duì)微生物的抑制作用需要一定的反應(yīng)時(shí)間[32],為防止由于檢測(cè)液初始pH值設(shè)定過(guò)低,導(dǎo)致藥效沒(méi)產(chǎn)生之前指示菌的產(chǎn)酸量就使其變色,失去檢測(cè)意義,因此選擇最適檢測(cè)液初始pH值為7.2。

    2.3 菌懸液初始吸光度和檢測(cè)體系組成的確定結(jié)果

    用生理鹽水作為樣品提取液,確定菌懸液初始吸光度和檢測(cè)體系組成對(duì)檢測(cè)液變色時(shí)間的影響。由表4可知,當(dāng)菌懸液初始吸光度不小于0.4時(shí),B、C組均能在4 h內(nèi)變色。因此,用B、C 組檢測(cè)體系組成進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),反應(yīng)時(shí)間較短。

    由表5可知,對(duì)于抗生素敏感性來(lái)說(shuō),菌懸液初始吸光度大于0.4或加入體積為80 μL時(shí),反應(yīng)終點(diǎn)檢測(cè)液變?yōu)辄S色,抗生素對(duì)菌的抑制效果不明顯,達(dá)不到檢測(cè)目的。因此選擇菌懸液初始吸光度為0.4,檢測(cè)液∶菌液∶樣品提取液為150 μL∶50 μL∶100 μL時(shí),檢測(cè)效果最佳。

    2.4 抗生素的檢出限

    按照1.3.5節(jié)的方法進(jìn)行檢測(cè),確定各抗生素的最小檢測(cè)濃度(顏色未發(fā)生變化時(shí)的抗生素標(biāo)準(zhǔn)液濃度)。由表6~7可知,本方法選擇的大腸埃希氏菌對(duì)喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素均有較好抑制作用,其中喹諾酮類檢出限為60~180 μg/kg、氨基糖苷類檢出限為40~140 μg/kg,均低于我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量[33],因此該法可以滿足喹諾酮類及氨基糖苷類抗生素初篩檢測(cè)的要求。

    2.5 樣品測(cè)定結(jié)果

    將50 份樣品用微生物顯色法進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果用色譜法進(jìn)行驗(yàn)證。由表8可知,采用微生物法測(cè)定時(shí),共有15 個(gè)樣品檢出結(jié)果呈陽(yáng)性,其中12 個(gè)陽(yáng)性樣品人為添加了抗生素,其余3 個(gè)樣品經(jīng)過(guò)與色譜方法比對(duì),發(fā)現(xiàn)是假陽(yáng)性樣品。用色譜法對(duì)35 個(gè)呈陰性樣品進(jìn)行驗(yàn)證,沒(méi)有測(cè)出以上藥物殘留,說(shuō)明該微生物顯色法無(wú)假陰性結(jié)果存在,結(jié)果較可靠。

    3 結(jié) 論

    以大腸埃希氏菌作為指示菌,選取檸檬酸-丙酮緩沖液作為提取液,通過(guò)單因素試驗(yàn)優(yōu)化檢測(cè)液配方及檢測(cè)體系組成,選擇菌懸液初始吸光度為0.4,檢測(cè)液(蛋白胨含量1.0 g/100 mL、溴甲酚紫指示劑含量2.0 mg/100 mL、pH 7.2)∶菌液∶樣品提取液為150 μL∶50 μL∶100 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn),之后用色譜法對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行驗(yàn)證。優(yōu)化后的檢測(cè)方法可在3~4 h內(nèi)使指示劑變色(檢測(cè)液由紫變黃),顏色變化明顯,易用肉眼區(qū)分。該方法適用于畜禽肉中喹諾酮類、氨基糖苷類單獨(dú)或二者配伍使用時(shí)抗生素殘留的檢測(cè),其檢出限均低于我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量,滿足初篩要求。用色譜法對(duì)微生物法測(cè)定結(jié)果呈陰性的35 個(gè)樣品進(jìn)行復(fù)測(cè),以上抗生素均未檢出,說(shuō)明該方法測(cè)定準(zhǔn)確性較高,沒(méi)有假陰性結(jié)果存在。本方法使用微孔板作為反應(yīng)器,微孔可根據(jù)樣品數(shù)量自由獨(dú)立拆分,可同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè),不受樣品數(shù)量限制,便于操作者使用。此外,該方法所用試劑均以微升計(jì),較傳統(tǒng)微生物法省時(shí)、省力,且重復(fù)性較好,無(wú)需大型儀器[34],大大降低了檢測(cè)成本。因此,本研究建立的微生物顯色法可在中小型禽畜肉養(yǎng)殖加工企業(yè)中推廣,并可應(yīng)用在農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管環(huán)節(jié)中。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 李磊, 周貽兵, 張權(quán), 等. QuEChERS凈化超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定雞蛋中13 種喹諾酮類抗生素[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2018, 45(24): 4482-4486; 4490.

    [2] TONG Changlun, ZHUO Xiajun, GUO Yun. Occurrence and risk assessment of four typical fluoroquinolone antibiotics in raw and treated sewage and in receiving waters in Hangzhou, China[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2011, 59(13): 7303-7309. DOI:10.1021/jf2013937.

    [3] 姚倩鈺, 賀德春, 龔道新, 等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定廢水中5 種喹諾酮類抗生素[J]. 中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè), 2017, 33(3): 139-146. DOI:10.19316/j.issn.1002-6002.2017.03.21.

    [4] BOXALL A B A. The environmental side effects of medication[J]. EMBO Reports, 2004, 5(2): 1110-1116. DOI:10.1038/sj.embor.7400307.

    [5] 王秀茹. 大環(huán)內(nèi)酯類藥物的性質(zhì)、特點(diǎn)及應(yīng)用[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊, 2018(19): 54-55.

    [6] 杜業(yè)剛, 陽(yáng)洪波, 古麗君, 等. UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物源性食品中8 種多肽類抗生素[J]. 食品工業(yè)科技, 2016, 37(8): 85-91. DOI:10.13386/j.issn.1002-0306.2016.08.009.

    [7] 劉少穎, 黃希匯, 胡柯君, 等. 杭州市動(dòng)物性食品中喹諾酮類抗生素殘留水平及安全性評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2018, 28(18): 2280-2282; 2285.

    [8] 劉曉冬, 林洪, 江潔. 動(dòng)物源性食品中氨基糖苷類抗生素檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(8): 4128-4132. DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.08.132.

    [9] 朱虹. 動(dòng)物源性食品中抗生素殘留的危害和檢測(cè)方法[J]. 產(chǎn)業(yè)與科技論壇, 2016, 15(14): 64-65.

    [10] KARAGEORGOU E, CHRISTOFORIDOU S, IOANNIDOU M, et al. Detection of β-lactams and chloramphenicol residues in raw milk-development and application of an HPLC-DAD method in comparison with microbial inhibition assays[J]. Foods, 2018, 7(6): E82. DOI:10.3390/foods7060082.

    [11] 張亞莉, 哈婧, 趙靜, 等. 動(dòng)物組織中抗生素殘留研究進(jìn)展[J].?河北科技大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 34(6): 517-525. DOI:10.7535/hbkd.2013yx06004.

    [12] 盧坤, 童群義. 動(dòng)物源性食品中抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)研究發(fā)展[J]. 廣州化工, 2015, 43(12): 13-14.

    [13] 李小會(huì), 李海星, 段亞軍, 等. 免疫分析技術(shù)在乳及乳制品抗生素類獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2018, 9(4): 776-780. DOI:10.3969/j.issn.2095-0381.2018.04.016.

    [14] 羅瑞香, 朱靜, 王海濱. 2011—2014年屎腸球菌和糞腸球菌臨床分布特點(diǎn)及耐藥性分析[J]. 感染、炎癥、修復(fù), 2016, 17(2): 95-97. DOI:10.3969/j.issn.1672-8521.2016.02.009.

    [15] LINK N, WEBER W, FUSSENEGGER M. A novel generic dipstick-based technology for rapid and precise detection of tetracycline, streptogramin and macrolide antibiotics in food samples[J]. Journal of Biotechnology, 2007, 128(3): 668-680. DOI:10.1016/j.jbiotec.2006.1 1.011.

    [16] 張志超, 程和發(fā). 環(huán)境介質(zhì)中喹諾酮類抗生素的前處理與檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 環(huán)境化學(xué), 2019, 38(1): 1-22. DOI:10.7524/j.issn.0254-6108.2018020203.

    [17] NOEMI D G, ALEXANDRA J, ALBERTO Z G, et al. Simultaneous determination of quinolone and β-lactam residues in raw cow milk samples using ultrasound-assisted extraction and dispersive-SPE prior to UHPLC-MS /MS analysis[J]. Food Control, 2016, 60: 382-393. DOI:10.1016/j.foodcont.2015.08.008.

    [18] PARK Y K, FOX L K, HANCOCK D D, et al. Prevalence and antibiotic resistance of mastitis pathogens isolated from dairy herds transitioning to organic management[J]. Journal of Veterinary Science, 2012, 13(1): 103-105. DOI:10.4142/jvs.2012.13.1.103.

    [19] 黃曉蓉, 鄭晶, 吳謙, 等. 食品中多種抗生素殘留的微生物篩檢方法研究[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(8): 418-421. DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2007.08.102.

    [20] 朱建恩. 牛奶中抗生素殘留的微生物檢測(cè)方法應(yīng)用分析[J]. 食品安全導(dǎo)刊, 2018(21): 66-67. DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2018.21.054.

    [21] 福建省疾病預(yù)防控制中心. 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn): GB/T 4789.27—2008[S]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2008.

    [22] 中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局. 動(dòng)物源食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留檢測(cè)方法 第3部分: 微生物抑制法:?SN/T 1777.3—2008[S]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2008.

    [23] 王媛媛, 王攀, 劉曉輝, 等. 不同抗生素檢測(cè)方法檢測(cè)乳清粉樣品結(jié)果差異性分析[J]. 中國(guó)乳業(yè), 2015(1): 60-63. DOI:10.3969/j.issn.1671-4393.2015.01.016.

    [24] 農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心. 豬組織中四環(huán)素族抗生素殘留量檢測(cè)方法 微生物學(xué)檢測(cè)方法: GB/T 20444—2006[S].?北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2006.

    [25] SLAVKO M, NIKOLETA N. Influence of preservative concentration, pH value and fat content in raw mlk at detection limit of microbial Inhibitor tests (Delvotest? Accelerator) for amoxicillin and oxytet-racycline[J]. Food Analytical Methods, 2016, 9(10): 2864-2871. DOI:10.1007/s12161-016-0476-8.

    [26] 任皓威, 馬明, 劉寧, 等. 原料乳及乳制品中抗生素殘留微生物檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估技術(shù)初探[J]. 飼料博覽, 2017(1): 11-13. DOI:10.3969/j.issn.1001-0084.2017.01.003.

    [27] 劉興泉, 馮震, 姚蕾, 等. 采用高通量微生物法和HPLC法檢測(cè)豬肉中四環(huán)素和磺胺類抗生素殘留[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2011, 37(4): 194-197. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2011.04.006.

    [28] OKERMAN L, NOPPE H, CORNET V, et al. Microbiological detection of 10 quinolone antibiotic residues and its application to artificially contaminated poultry samples[J]. Food Additives and Contaminants, 2007, 24(3): 252-257. DOI:10.1080/02652030600988020.

    [29] 張盼, 沈振華, 張燕華, 等. 8 株產(chǎn)NDM-1腸桿菌科細(xì)菌的耐藥特點(diǎn)和流行性分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2018, 33(7): 616-621. DOI:10.3969/j.issn.1673-8640.2018.07.009.

    [30] 劉冬梅, 郭均, 梁潔英, 等. 牛奶中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留檢測(cè)試劑盒的研制[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2014, 30(10): 251-256. DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.042.

    [31] 劉雪杰. 牛奶中抗生素殘留檢測(cè)指示菌的篩選鑒定及檢測(cè)試劑盒研發(fā)[D]. 福州: 福州大學(xué), 2013: 50-53.

    [32] 王超逸, 馬凱, 王勇軍. 微生物法檢測(cè)乳粉中抗生素殘留的構(gòu)建[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013(3): 309-311. DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.2013.03.037.

    [33] 農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局. 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)[EB/OL]. (2008-03-04) [2019-02-20]. http://jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.

    [34] 謝莉, 程華, 董超, 等. 牛奶中抗生素殘留檢測(cè)試劑盒的研制及應(yīng)用[J].?食品工業(yè)科技, 2010, 31(2): 321-323. DOI:10.13386/j .issn1002-0306.2010.02.070.

    猜你喜歡
    畜禽肉高通量
    高通量衛(wèi)星網(wǎng)絡(luò)及網(wǎng)絡(luò)漫游關(guān)鍵技術(shù)
    中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院發(fā)現(xiàn)畜禽肉新鮮度快速檢測(cè)新方法
    高效液相色譜法對(duì)畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素的殘留檢測(cè)研究
    高通量血液透析臨床研究進(jìn)展
    Ka頻段高通量衛(wèi)星在鐵路通信中的應(yīng)用探討
    畜禽肉
    中國(guó)通信衛(wèi)星開啟高通量時(shí)代
    綿羊骨骼肌轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序從頭組裝和特征分析
    中草藥改善畜禽肉品質(zhì)作用機(jī)理的研究進(jìn)展
    生產(chǎn)管理對(duì)畜禽肉風(fēng)味的影響探析
    欧美日韩乱码在线| 久久久久九九精品影院| 精品熟女少妇八av免费久了| x7x7x7水蜜桃| 正在播放国产对白刺激| 国产亚洲精品一区二区www| 麻豆久久精品国产亚洲av | 夫妻午夜视频| 中文字幕av电影在线播放| av免费在线观看网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成在线人永久免费视频| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲情色 制服丝袜| a级毛片黄视频| 亚洲成人免费av在线播放| av有码第一页| 老司机午夜十八禁免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品91蜜桃| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 麻豆av在线久日| 成人三级做爰电影| 美女国产高潮福利片在线看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲五月天丁香| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲国产欧美网| 老熟妇仑乱视频hdxx| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久午夜亚洲精品久久| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产亚洲av高清不卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| av网站在线播放免费| 欧美乱色亚洲激情| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 黄色视频,在线免费观看| 午夜老司机福利片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久人人精品亚洲av| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 超碰成人久久| 亚洲欧美激情在线| 精品国产美女av久久久久小说| 人成视频在线观看免费观看| svipshipincom国产片| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产高清激情床上av| cao死你这个sao货| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品人妻在线不人妻| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美黑人精品巨大| 高清毛片免费观看视频网站 | 久久国产乱子伦精品免费另类| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99riav亚洲国产免费| 高清在线国产一区| 亚洲三区欧美一区| 欧美激情 高清一区二区三区| 看免费av毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 1024香蕉在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 天堂影院成人在线观看| 久久精品91蜜桃| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产精品免费一区二区三区在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产亚洲av高清不卡| 黄片小视频在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 欧美黄色淫秽网站| 女性被躁到高潮视频| 国产真人三级小视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 婷婷丁香在线五月| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品国产av在线观看| 国产精品久久视频播放| 男女高潮啪啪啪动态图| 超碰97精品在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 一级作爱视频免费观看| 在线观看舔阴道视频| 国产av在哪里看| 欧美日韩乱码在线| 精品日产1卡2卡| 色尼玛亚洲综合影院| 高清在线国产一区| 亚洲 欧美一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 91老司机精品| 在线国产一区二区在线| 水蜜桃什么品种好| 亚洲专区中文字幕在线| 国产一区在线观看成人免费| 男女床上黄色一级片免费看| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品日产1卡2卡| 亚洲在线自拍视频| 欧美乱色亚洲激情| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 精品久久久久久,| а√天堂www在线а√下载| 国产亚洲欧美精品永久| 激情视频va一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 一进一出抽搐动态| 国产精品国产高清国产av| 日本 av在线| 国产黄色免费在线视频| 国产精品野战在线观看 | 老司机福利观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲五月婷婷丁香| 99久久99久久久精品蜜桃| av中文乱码字幕在线| 午夜亚洲福利在线播放| 久久热在线av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产高清国产精品国产三级| 嫩草影视91久久| 久久中文字幕人妻熟女| 国产av一区在线观看免费| 在线观看www视频免费| 日韩三级视频一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 动漫黄色视频在线观看| 午夜福利免费观看在线| www.精华液| 日本黄色视频三级网站网址| 中文字幕人妻丝袜制服| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲在线自拍视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 多毛熟女@视频| 在线观看www视频免费| 国产免费现黄频在线看| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲中文字幕日韩| 叶爱在线成人免费视频播放| 9色porny在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 最新美女视频免费是黄的| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲av成人一区二区三| avwww免费| 91国产中文字幕| 99国产精品99久久久久| 日本欧美视频一区| 一区二区三区精品91| 色综合婷婷激情| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中国美女看黄片| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美在线黄色| tocl精华| 无限看片的www在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 午夜老司机福利片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美乱妇无乱码| 在线观看免费日韩欧美大片| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 最好的美女福利视频网| 亚洲,欧美精品.| 一个人免费在线观看的高清视频| 男人操女人黄网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 超碰成人久久| av天堂在线播放| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 成人免费观看视频高清| 国产av一区在线观看免费| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 黄色丝袜av网址大全| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄频高清免费视频| 麻豆一二三区av精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 成年人黄色毛片网站| 韩国av一区二区三区四区| 另类亚洲欧美激情| 成人国语在线视频| 男人舔女人的私密视频| www.www免费av| 丝袜美足系列| 亚洲av美国av| 精品日产1卡2卡| 午夜视频精品福利| 久久久久九九精品影院| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 操出白浆在线播放| 九色亚洲精品在线播放| 久久人妻熟女aⅴ| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 美女大奶头视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 咕卡用的链子| 免费高清视频大片| 搡老乐熟女国产| 婷婷精品国产亚洲av在线| 日韩高清综合在线| 亚洲国产精品合色在线| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 老汉色∧v一级毛片| 天堂中文最新版在线下载| 高清在线国产一区| 啦啦啦免费观看视频1| 国产av又大| 欧美性长视频在线观看| videosex国产| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲片人在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 女性被躁到高潮视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久久国产一区二区| 国产高清视频在线播放一区| 夜夜爽天天搞| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 婷婷丁香在线五月| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产亚洲欧美98| 天堂俺去俺来也www色官网| 51午夜福利影视在线观看| 国产99久久九九免费精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 中文字幕色久视频| 乱人伦中国视频| 国产色视频综合| 欧美性长视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产看品久久| 老司机午夜福利在线观看视频| 黄色 视频免费看| 中文字幕人妻丝袜制服| 多毛熟女@视频| 美国免费a级毛片| aaaaa片日本免费| 精品久久久精品久久久| 97碰自拍视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 午夜老司机福利片| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美日韩一级在线毛片| av电影中文网址| 一级a爱片免费观看的视频| 男女下面插进去视频免费观看| 9色porny在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 在线免费观看的www视频| 国产麻豆69| 老司机在亚洲福利影院| 国产三级黄色录像| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲人成电影观看| 我的亚洲天堂| 12—13女人毛片做爰片一| 天堂动漫精品| 热99re8久久精品国产| 看黄色毛片网站| 一级a爱片免费观看的视频| 老鸭窝网址在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费高清视频大片| 桃色一区二区三区在线观看| 午夜91福利影院| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美日韩黄片免| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 一级a爱片免费观看的视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 神马国产精品三级电影在线观看 | 日本一区二区免费在线视频| 手机成人av网站| 91成年电影在线观看| 9色porny在线观看| 欧美在线黄色| 国产成人av教育| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲九九香蕉| 大码成人一级视频| 手机成人av网站| 亚洲,欧美精品.| 欧美日韩一级在线毛片| 在线观看免费高清a一片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| a在线观看视频网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品九九99| 精品午夜福利视频在线观看一区| e午夜精品久久久久久久| 免费在线观看黄色视频的| 级片在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 操出白浆在线播放| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲 国产 在线| 极品教师在线免费播放| 久久草成人影院| 757午夜福利合集在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 午夜福利在线免费观看网站| 99久久精品国产亚洲精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 性少妇av在线| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| √禁漫天堂资源中文www| 欧美一区二区精品小视频在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲三区欧美一区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久香蕉精品热| 日韩大码丰满熟妇| 动漫黄色视频在线观看| 久久久国产成人免费| 老汉色∧v一级毛片| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产一区二区三区视频了| 午夜免费激情av| 麻豆成人av在线观看| 1024视频免费在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 中文欧美无线码| 超碰97精品在线观看| 午夜精品在线福利| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产成人av教育| 韩国精品一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲成国产人片在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲avbb在线观看| 两个人免费观看高清视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲男人天堂网一区| 我的亚洲天堂| videosex国产| 无限看片的www在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲av五月六月丁香网| 18美女黄网站色大片免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产成人影院久久av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩中文字幕欧美一区二区| 99香蕉大伊视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看一区二区三区激情| 国产激情久久老熟女| 黄色女人牲交| 久久人妻av系列| 免费高清视频大片| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| av网站免费在线观看视频| 水蜜桃什么品种好| 成年人黄色毛片网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 美女 人体艺术 gogo| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产高清视频在线播放一区| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜福利欧美成人| 成人18禁在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 满18在线观看网站| 九色亚洲精品在线播放| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 日本wwww免费看| av中文乱码字幕在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 中文字幕最新亚洲高清| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 真人做人爱边吃奶动态| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产精品 欧美亚洲| 在线免费观看的www视频| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费日韩欧美在线观看| 十八禁人妻一区二区| 国产99白浆流出| 视频区图区小说| av中文乱码字幕在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲片人在线观看| 我的亚洲天堂| 亚洲精品在线观看二区| 精品欧美一区二区三区在线| 国产主播在线观看一区二区| 两个人看的免费小视频| av有码第一页| 欧美国产精品va在线观看不卡| 免费搜索国产男女视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产极品粉嫩免费观看在线| 无遮挡黄片免费观看| 人妻久久中文字幕网| 1024香蕉在线观看| 美女福利国产在线| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 香蕉国产在线看| 久久久久亚洲av毛片大全| 首页视频小说图片口味搜索| 一进一出好大好爽视频| 在线观看免费高清a一片| 一夜夜www| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 村上凉子中文字幕在线| 国产高清videossex| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产熟女xx| 欧美在线一区亚洲| 国产成人欧美| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人av激情在线播放| 露出奶头的视频| 老司机亚洲免费影院| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 视频区图区小说| 99re在线观看精品视频| 久久人妻av系列| 亚洲av电影在线进入| 欧美性长视频在线观看| 青草久久国产| 亚洲美女黄片视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人免费观看视频高清| 亚洲av五月六月丁香网| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲自拍偷在线| 国产精品 欧美亚洲| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 黄色a级毛片大全视频| 亚洲性夜色夜夜综合| av免费在线观看网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品国产一区二区三区四区第35| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲五月色婷婷综合| 热99re8久久精品国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美最黄视频在线播放免费 | 午夜日韩欧美国产| 免费搜索国产男女视频| 精品电影一区二区在线| 国产激情久久老熟女| 在线天堂中文资源库| 热99国产精品久久久久久7| 99riav亚洲国产免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费av中文字幕在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| a级毛片黄视频| 99在线视频只有这里精品首页| 美女大奶头视频| 亚洲情色 制服丝袜| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 女同久久另类99精品国产91| 99久久精品国产亚洲精品| 免费av毛片视频| 亚洲av成人一区二区三| 这个男人来自地球电影免费观看| 少妇的丰满在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 成年女人毛片免费观看观看9| 美女大奶头视频| 国产亚洲欧美精品永久| 精品人妻在线不人妻| 欧美中文综合在线视频| 美女大奶头视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品在线观看二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩高清综合在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 成年人黄色毛片网站| 久久国产精品影院| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品99久久99久久久不卡| 又大又爽又粗| 身体一侧抽搐| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日本亚洲视频在线播放| 性欧美人与动物交配| 男人舔女人下体高潮全视频| 高清在线国产一区| 天堂动漫精品| 麻豆一二三区av精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 757午夜福利合集在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一区在线观看完整版| 精品人妻1区二区| 大码成人一级视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 人妻久久中文字幕网| 精品人妻在线不人妻| 亚洲 欧美一区二区三区| 香蕉丝袜av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 无人区码免费观看不卡| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一级片'在线观看视频| 一区福利在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品一区二区免费欧美| а√天堂www在线а√下载| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 免费av中文字幕在线| 国产av精品麻豆| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 五月开心婷婷网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品福利观看| 久久这里只有精品19| 日韩欧美三级三区| 国产精品久久久久成人av| 男人操女人黄网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 咕卡用的链子| 成人黄色视频免费在线看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲午夜理论影院| 中亚洲国语对白在线视频| 色在线成人网| 日韩大尺度精品在线看网址 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 嫩草影院精品99| 亚洲精品国产区一区二| 大码成人一级视频| videosex国产| 在线观看www视频免费| 欧美另类亚洲清纯唯美| 天天添夜夜摸| 激情视频va一区二区三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 黑丝袜美女国产一区| 老汉色∧v一级毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 91av网站免费观看| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 欧美成人午夜精品| 色综合欧美亚洲国产小说|