蛋白芯片法與膠體金法檢測(cè)結(jié)核抗體對(duì)結(jié)核病的臨床價(jià)值

仇祝強(qiáng) 于輝

肺結(jié)核是當(dāng)前臨床常見的一種通過呼吸道傳播的傳染性疾病，該病病死率居各類傳染性疾病的第2位[1-2]。肺結(jié)核常見發(fā)病部位主要在肺部，該病患者在臨床上多表現(xiàn)出夜間盜汗、低熱以及咳嗽等癥狀[3]。該病作為消耗性疾病之一，在感染機(jī)體后引發(fā)Ⅳ型超敏反應(yīng)（遲發(fā)型超敏反應(yīng)），嚴(yán)重影響到患者的身體健康與生命安全[4]。對(duì)于該病需在臨床上進(jìn)行及早診斷、及早治療與干預(yù)。當(dāng)前主要通過培養(yǎng)與涂片等細(xì)菌學(xué)檢查進(jìn)行診斷，但由于對(duì)結(jié)核桿分枝菌培養(yǎng)的耗時(shí)較長(zhǎng)，且進(jìn)行痰涂片法檢測(cè)的敏感性相對(duì)較低，細(xì)菌學(xué)檢查方法難以取得較滿意的效果。隨著當(dāng)前醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，逐漸將結(jié)核抗體檢測(cè)方法用于對(duì)結(jié)核病的篩選，當(dāng)前主要采用的結(jié)核抗體檢測(cè)方法包括蛋白芯片法與膠體金法[5-6]。研究主要以探討分析膠體金法與蛋白芯片法兩種方法檢測(cè)結(jié)核抗體對(duì)結(jié)核病的臨床診斷價(jià)值，內(nèi)容見下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入本院2018年1—6月收治臨床確診活動(dòng)性肺結(jié)核病患者68例建立觀察組，同期納入非結(jié)核病受檢者80例建立對(duì)照組。觀察組納入患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核分會(huì)2000年制定的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。觀察組納入患者包括男性36例、女性32例，患者年齡21～67歲，平均（44.7±5.2）歲；對(duì)照組納入受檢者男性45例、女性35例，受檢者年齡21～67歲，平均（44.9±5.1）歲。兩組研究對(duì)象一般資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且受檢者入組前均對(duì)研究?jī)?nèi)容知情同意。

1.2 方法

分別應(yīng)用膠體金法與蛋白芯片法對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行結(jié)核抗體檢測(cè)。（1）膠體金法檢測(cè)。應(yīng)用迪比多檢驗(yàn)試劑盒（上海奧普生物公司）進(jìn)行檢測(cè)，通過斑點(diǎn)免疫-膠體金滲濾技術(shù)（DIGFA），對(duì)結(jié)核分枝桿菌的特異性膜蛋白抗原進(jìn)行分離與純化處理，于硝酸纖維素膜上進(jìn)行點(diǎn)樣并固定，使膜上結(jié)核抗原與血清樣品當(dāng)中的結(jié)核分枝桿菌抗體進(jìn)行結(jié)合，結(jié)核IgG抗體通過葡萄球菌-A蛋白（SPA）的膠體金綴合物進(jìn)行標(biāo)記呈色，若發(fā)現(xiàn)存在紅色斑點(diǎn)，可提示有結(jié)核分枝桿菌抗體存在。（2）蛋白芯片法檢測(cè)。應(yīng)用結(jié)核分支桿菌IgG抗體檢驗(yàn)試劑盒（南京大淵生物）進(jìn)行蛋白芯片法檢測(cè)，檢測(cè)按試劑盒說明書進(jìn)行操作。蛋白芯片試劑盒應(yīng)用經(jīng)基因工程表達(dá)結(jié)核分枝桿菌所表達(dá)的LAM、16 KDa與38 KDa蛋白3種結(jié)核菌復(fù)合群的特異性抗原對(duì)受檢血清中抗體進(jìn)行檢測(cè)，以任一抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性判定檢測(cè)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，檢測(cè)陽(yáng)性率資料采用百分比形式描述，組間對(duì)比通過χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示對(duì)比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組患者經(jīng)膠體金法檢測(cè)的陽(yáng)性率77.94%（53/68），對(duì)照組受檢者經(jīng)膠體金法檢測(cè)的陽(yáng)性率7.50%（6/80），觀察組與對(duì)照組膠體金法檢測(cè)陽(yáng)性率差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=76.080，P＜0.05）；觀察組與對(duì)照組的蛋白芯片法檢測(cè)（LAM、16 KDa與38 KDa）陽(yáng)性率差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LAM-χ2=52.271，16 KDa-χ2=40.628，38 KDa-χ2=52.271）。觀察組膠體金法與蛋白芯片法16 KDa 檢測(cè)對(duì)比，χ2=19.080，P＜0.05）；觀察組患者膠體金法檢測(cè)陽(yáng)性率高于蛋白芯片法（觀察組膠體金法與蛋白芯片法LAM、38 KDa檢測(cè)相比，χ2均=4.224 9，P＜0.05），見表1。

3 討論

結(jié)核病是當(dāng)前全球感染性疾病致死的首要因素。臨床上結(jié)核病主要是指在顯微鏡下或經(jīng)培養(yǎng)存在陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果，或存在影像學(xué)以及結(jié)核病癥狀表現(xiàn)的一類感染疾病。對(duì)于結(jié)核病而言，分枝桿菌的培養(yǎng)是作為診斷感染的臨床“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于分枝桿菌一般在固體培養(yǎng)基當(dāng)中的生長(zhǎng)周期相對(duì)較長(zhǎng)（培養(yǎng)時(shí)間＞6周），因此分枝桿菌的培養(yǎng)不適宜對(duì)結(jié)核病的早期診斷[7]。而當(dāng)前臨床特異性較高，檢驗(yàn)快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法為抗酸染色法檢測(cè)，但其診斷敏感性相對(duì)較低，進(jìn)行一次痰涂片檢測(cè)的診斷敏感性僅在20%～80%，對(duì)涂陰結(jié)果的結(jié)核病診斷，若無典型影像學(xué)證據(jù)結(jié)合診斷，則易導(dǎo)致發(fā)生漏診或誤診現(xiàn)象。相比之下，通過血清免疫學(xué)對(duì)結(jié)核抗體進(jìn)行檢測(cè)的診斷方法則可彌補(bǔ)進(jìn)行影像學(xué)檢測(cè)的不足，當(dāng)前臨床常用檢測(cè)方法主要包括蛋白芯片法與膠體金法技術(shù)[8-9]。膠體金法是通過斑點(diǎn)免疫膠體金滲濾技術(shù)對(duì)結(jié)核分支桿菌上的特異性膜蛋白抗原進(jìn)行分離純化處理，進(jìn)一步捕獲人血清樣品當(dāng)中的結(jié)核分枝桿菌抗體，經(jīng)SPA膠體金綴合物進(jìn)行標(biāo)記呈色，從而形成紅色斑點(diǎn)，該方法下可根據(jù)紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)情況判斷檢驗(yàn)的陰、陽(yáng)結(jié)果。而蛋白芯片法檢測(cè)過程則涉及試劑盒的芯片與試劑，其中，芯片主要以微孔濾膜作為載體，將結(jié)核菌具有特異性的細(xì)胞壁脂多糖抗原LAM與景觀基因工程DNA重組技術(shù)純化的結(jié)核菌16 KDa蛋白、38 KDa蛋白等特異性抗原一同固定于特制載體，再經(jīng)微孔濾膜進(jìn)行滲濾、濃縮與凝集，捕捉特異性抗體，抗原抗體復(fù)合物與經(jīng)膠體金標(biāo)記處理兔抗人IgG的作用在膜上呈現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)[10]。經(jīng)芯片識(shí)別系統(tǒng)分析，可分別測(cè)定出抗結(jié)核菌具有特異性的細(xì)胞壁上脂多糖LAM、16 KDa與38 KDa抗體，蛋白芯片法檢測(cè)以三種抗體之一呈現(xiàn)陽(yáng)性，判斷為該患者的抗結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)陽(yáng)性。其中，結(jié)核分枝桿菌LAM是作為結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁上一種重要成分，LAM的抗原性較強(qiáng)，能刺激結(jié)核菌感染者體內(nèi)產(chǎn)生抗體，其他的分枝桿菌因細(xì)胞壁表面LAM的含量較低，無法刺激機(jī)體產(chǎn)生大量抗體，因此對(duì)LAM抗體的檢測(cè)具有較高的特異性與敏感性。16 KDa蛋白的基因型是MPT63，MPT63基因僅出現(xiàn)于結(jié)核菌復(fù)合群，且16 KDa蛋白與常見鳥分枝桿菌相關(guān)蛋白不產(chǎn)生血清交叉反應(yīng)，檢測(cè)該指標(biāo)同樣能較好的反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌水平情況[11-13]。38 KDa蛋白是細(xì)胞所分泌的脂蛋白之一，38 KDa蛋白與細(xì)胞膜或菌體表面上的脂肪結(jié)構(gòu)連接，在各類分枝桿菌中，只有結(jié)核菌與牛分枝桿菌兩類被發(fā)現(xiàn)分泌38 KDa蛋白，且人結(jié)核菌反應(yīng)強(qiáng)度相比于牛分枝桿菌的38 KDa蛋白分泌水平高10倍，臨床通過蛋白芯片法檢測(cè)38 KDa蛋白能較好的反映結(jié)核分枝桿菌感染。研究通過納入臨床確診活動(dòng)性肺結(jié)核病患者與非結(jié)核病受檢者分別應(yīng)用膠體金法與蛋白芯片法對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行結(jié)核抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，觀察組患者經(jīng)膠體金法檢測(cè)的陽(yáng)性率77.94%，對(duì)照組受檢者經(jīng)膠體金法檢測(cè)的陽(yáng)性率7.50%；觀察組患者經(jīng)蛋白芯片法LAM、16 KDa與38 KDa反應(yīng)陽(yáng)性率為61.76%，對(duì)照組蛋白芯片法反應(yīng)陽(yáng)性率為6.25%；觀察組患者膠體金法檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于蛋白芯片法。研究提示，膠體金法在活動(dòng)性結(jié)核病和結(jié)核感染診斷的敏感性方面的優(yōu)勢(shì)更大，該方法用于對(duì)可疑結(jié)核病患者的檢測(cè)能更準(zhǔn)確的進(jìn)行診斷。

表1 蛋白芯片法與膠體金法兩種方法檢測(cè)結(jié)核抗體陽(yáng)性情況對(duì)比[例（%）]

綜上所述，應(yīng)用膠體金法對(duì)結(jié)核抗體進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)核病陽(yáng)性率與蛋白芯片法對(duì)比顯著更高，膠體金法檢測(cè)對(duì)早期活動(dòng)性結(jié)核患者的診斷具有一定的輔助應(yīng)用價(jià)值。