替加環(huán)素中有色雜質(zhì)測(cè)定

魏 娜，孟文娟，何 雷，王珍珍

(江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 連云港 222000)

替加環(huán)素是第一個(gè)被批準(zhǔn)的新型靜脈注射用甘氨酰四環(huán)素類抗生素，有廣譜抗微生物活性，用于治療由革蘭陰性或陽性病原體、厭氧性生物及耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)導(dǎo)致的clA1,DSSSI，替加環(huán)素向醫(yī)生們提供了一種新的、可在治療初期當(dāng)病因尚未明了時(shí)供選擇的廣抗生素，并且不需根據(jù)腎功能受損情況調(diào)整劑量，使用方便，每12 h服用一次即可。替加環(huán)素是由美國輝瑞(原惠氏)公司研究開發(fā)，于2012年初在中國上市，2013年初有國內(nèi)仿制藥上市。藥品在出廠到儲(chǔ)藏、運(yùn)輸、存放、銷售等環(huán)節(jié)，如處置不當(dāng)會(huì)影響藥品外觀顏色，特別是在貯藏期間受不同溫度、不同濕度、空氣質(zhì)量、光線強(qiáng)弱等因素的干擾，容易引起降解，可能產(chǎn)生有毒性的有色雜質(zhì)[1]。替加環(huán)素作為一種注射用抗生素藥品，其有色雜質(zhì)控制更為重要。

1 有色雜質(zhì)的檢測(cè)方法

溶液顏色檢查法廣泛應(yīng)用于化學(xué)藥品的質(zhì)量控制，目前，在2015版中國藥典通則0901溶液顏色檢查法中列出了幾種檢測(cè)方法：第一法(比色法)、第二法(紫外-可見分光光度法)、第三法(色差計(jì)法)。目視檢查法較為常用，但主觀誤差大，易受到外界照明條件及觀察者心理、生理及環(huán)境等因素的影響，對(duì)顏色不能進(jìn)行量化的測(cè)定，對(duì)與標(biāo)準(zhǔn)比色液色調(diào)不一致和限度邊緣的樣品基本無法判定，造成結(jié)果判定差異。分光光度法通過對(duì)標(biāo)準(zhǔn)比色液在可見光區(qū)吸收情況進(jìn)行考察，選擇各色調(diào)的最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定各色號(hào)的吸收度在一定程度上可以控制藥品溶液顏色，但藥品顏色往往不是單一波長(zhǎng)所能表現(xiàn)的，也就是說在單一波長(zhǎng)處的吸收度不能完全反映藥品顏色的全部特性。色差計(jì)是根據(jù)完整、成熟的色度學(xué)理論設(shè)計(jì)而成，該方法在很大程度上彌補(bǔ)了目視檢查法與分光光度法的不足，能夠客觀數(shù)字化的反映判斷結(jié)果，使藥品標(biāo)準(zhǔn)的判定更具科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性[2]。

2 雜質(zhì)來源分析

參考相關(guān)文獻(xiàn)，替加環(huán)素容易氧化降解，在室溫條件下，溶解于水中，敞口攪拌數(shù)小時(shí)顏色由黃色/橘色變至深綠色。原研專利中，對(duì)替加環(huán)素進(jìn)行了氧化破壞，使用制備色譜得到了有色雜質(zhì)(圖1)，并使用NMR和HRMS對(duì)有色雜質(zhì)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)，發(fā)現(xiàn)替加環(huán)素氧化降解時(shí)，B環(huán)打開形成羧酸和羥基、D環(huán)羥基氧化為醌而生成有色雜質(zhì)，該雜質(zhì)即為USP方法中的開環(huán)雜質(zhì)。

圖1 替加環(huán)素氧化得到有色雜質(zhì)

3 檢測(cè)方法開發(fā)

參考注射用替加環(huán)素相關(guān)文獻(xiàn)，確定采用色差計(jì)法對(duì)替加環(huán)素原料中可能降解產(chǎn)生的有色雜質(zhì)進(jìn)行控制：取替加環(huán)素0.10 g，精密稱定，加0.02 mol/L鹽酸水溶液10.6 mL使溶解，混勻，靜置15 min后加入1 cm比色皿中，立即采用色差計(jì)測(cè)定替加環(huán)素與純化水的L*、a*、b*相對(duì)值，并利用公式計(jì)算“計(jì)算顏色值”(CCV,calculated color value)=2.19×L*+2.59×a*-0.48×b*。

該有色雜質(zhì)無明顯的警示結(jié)構(gòu)，在替加環(huán)素USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，有關(guān)物質(zhì)中未知單雜的限度為不大于0.10%。在色差計(jì)顏色的方法研究中，不同濃度的有色雜質(zhì)含量與CCV值有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系，當(dāng)樣品中添加有色雜質(zhì)為0.10%時(shí)，計(jì)算顏色值為103，因此將計(jì)算顏色值即CCV值標(biāo)準(zhǔn)定為不小于100。

4 結(jié)果與討論

(1)儀器準(zhǔn)確度：考察USP的J、L、O號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明儀器準(zhǔn)確度很好。

(2)儀器專屬性：考察USP的J、L、F、O、Q號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明儀器的專屬性很好。

(3)儀器重復(fù)性：考察USP的 L號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明重復(fù)性好。

(4)溶劑選擇： 0.02 mol/L鹽酸乳酸鈉林格溶液、0.02 mol/L鹽酸氯化鈉溶液、0.02 mol/L鹽酸葡萄糖溶液、0.02 mol/L鹽酸溶液四種溶劑的CCV值顯示溶劑種類對(duì)結(jié)果無影響。當(dāng)稀釋液為0.02 mol/L鹽酸時(shí)，替加環(huán)素溶液的pH值和CCV值與制劑相似。

(5)溶液穩(wěn)定性：替加環(huán)素溶液在0～2 h內(nèi)，RSD為0.49%，溶液穩(wěn)定性很好。

(6)精密度：替加環(huán)素溶液10次測(cè)定的CCV值RSD為0.29%，精密度很好。

(7)線性：有色雜質(zhì)濃度范圍為0～38.12 μg/mL時(shí)，線性關(guān)系良好(n=10)，線性回歸方程為CCV = -2.3980×C + 216.0197，相關(guān)系數(shù) r=0.9974。

(8)準(zhǔn)確度：不同濃度有色雜質(zhì)加入量與CCV值有非常明顯的變化趨勢(shì)，即有色雜質(zhì)的濃度越大，對(duì)應(yīng)的CCV值越小。

(9)耐用性：復(fù)溶體積10.6 mL±0.2 mL與靜置時(shí)間15 min±2 min在樣品處理過程中耐用性良好。