藤茶中二氫楊梅素膠囊劑的制備工藝研究

楊 杰，陳仕學，姚元勇，張孟琴，邢明明，盧忠英

(銅仁學院 材料與化學工程學院，貴州 銅仁 554300)

藤茶系葡萄科蛇葡萄屬的一種藤本植物，又稱甜藤茶、茅巖霉茶[1]。近些年，通過許多專家學者對藤茶的化學成分研究，表明蛇葡萄植物內(nèi)含有大量的黃酮物質(zhì)，其中的二氫楊梅素是藤茶中主要的一種黃酮類化合物[2]，具有預防酒精肝、降低肝癌的發(fā)病率等作用[3]，臨床應用潛力較大。目前文獻報道中，對二氫楊梅素的含量測定、理化性質(zhì)、生物活性、藥理作用、提取純化方法、化學修飾等方面的研究較多[4]，但是對二氫楊梅素藥物劑型的研究較少，目前有對二氫楊梅素片劑、二氫楊梅素胃內(nèi)浮片的研究，沒有對二氫楊梅素膠囊劑的研究。二氫楊梅素膠囊劑具有藥物的生物利用度較高、提高藥物穩(wěn)定性等優(yōu)點，本文采用正交實驗對處方進行篩選，以累積濃度為指標，采用紫外分光光度法考察二氫楊梅素的累積濃度，制備二氫楊梅素膠囊劑，得到二氫楊梅素膠囊劑的最優(yōu)處方。

1 實驗試劑、儀器

本實驗所用的主要實驗試劑如表1。

表1 實驗試劑、規(guī)格及產(chǎn)地

表1(續(xù))

本實驗所用的主要實驗儀器如表2。

表2 實驗儀器、型號及生產(chǎn)商

2 實驗方法

2.1 二氫楊梅素的提取純化及標準曲線的制備

2.1.1 二氫楊梅素的提取純化

材料預處理：取30 g藤茶，干燥、粉碎后用90 mL石油醚浸泡3 h，抽濾之后用蒸餾水洗去藤茶中的石油醚，烘干之后提取。

提?。喝√俨璐址郏尤胍掖?95%)300 mL，水浴加熱1 h(60℃),抽濾、濾渣重復提取3次，濾液用旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮旋干得到藤茶粗品。加入300 mL蒸餾水并水浴加熱至80℃，冷卻、靜置過夜。抽濾、45℃恒溫烘干[5-6]。

純化：利用藤茶乙醇提取物(浸膏)中主要成分與次要成分在石油醚、正己烷、乙酸乙酯、乙醇及水分散系中的分配系數(shù)不同，制備出具有高純度的二氫楊梅素(>95%，乳白色粉末)，該方法制備的純化制劑，可聯(lián)合水重結晶1次，獲得具有光譜純級別的二氫楊梅素標準品(純度>98%，純白色晶體)，整體工藝簡單，制得的成品純度高。

2.1.2 標準曲線的制備

精密稱取二氫楊梅素10.00 mg，至10 mL容量瓶加甲醇稀釋至刻度、搖勻，得到1.00 mg/mL的對照品溶液[7]，分別吸取上述對照品溶液0.00、0.05、0.10、0.15、0.20 mL分別指10 mL容量瓶中，加3 mL的AlCl3(5%)，甲醇定容，314 nm處測吸光度，以二氫楊梅素濃度c為橫坐標，吸光度值A縱坐標制作標準曲線。

2.2 單因素實驗

2.2.1 膠囊囊材的選擇

選用海藻多糖膠囊殼、木薯淀粉膠囊殼、明膠膠囊殼三種分別作為囊材[8]，二氫楊梅素2.5 g、羧甲基纖維素鈉0.5 g、乳糖7 g、適量蒸餾水，采用研配法將物料混合均勻過80目篩備用，把膠囊體和膠囊冒分別倒在排列板上，震蕩搖晃，使膠囊體和膠囊冒按要求排列整齊，冒板放在一旁備用，拿下排列板，將藥粉倒在體板上，用括粉板將藥粉均勻的刮進膠囊體中，一直刮滿膠囊體，將中間板扣在冒板上，然后把它放在體板上，用力向下壓到底，清除不符合要求的膠囊[9]。以人工胃液為溶出介質(zhì)，用崩解時限測試儀測崩解時限。

2.2.2 膠囊填充劑的選擇

選用乳糖、糊精、淀粉三種分別作為填充劑[10]，二氫楊梅素2.5 g、羧甲基纖維素鈉0.4 g，適量蒸餾水，按2.2.1制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊。以人工胃液為溶出介質(zhì)[11]，檢測其累積濃度，累積濃度計算公式=(Ax/As×Cs×V×稀釋倍數(shù)/取樣量) ×標示量×100。

2.2.3 填充劑用量的選擇

選用糊精作為填充劑，二氫楊梅素2.5 g、羧甲基纖維素鈉0.4 g，適量蒸餾水，糊精的含量分別為7、7.5、8、8.5、9 g，按2.2.1制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊。以人工胃液為溶出介質(zhì)[12]，檢測不同含量糊精的累積濃度。

2.2.4 膠囊粘合劑的選擇

選用明膠、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素三種分別作為黏合劑[8]，二氫楊梅素2.5 g、糊精7 g過80目篩備用，按2.2.1制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊。檢測羧甲基纖維素鈉的累積濃度。

2.2.5 粘合劑用量的選擇

選用羧甲基纖維素鈉黏合劑[9]，二氫楊梅素2.5 g、糊精7 g、羧甲基纖維素鈉的含量分別為0.3、0.35、0.4、0.45、0.5 g。過80目篩備用，按2.2.1制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊，檢測不同含量羧甲基纖維素鈉的累積濃度[11]。

2.2.6 二氫楊梅素最佳用量的選擇

選用明膠膠囊殼、糊精7 g、羧甲基纖維素鈉0.4 g、二氫楊梅素的量分別為2、2.5、3、3.5、4 g過80目篩備用[12]，按2.2.1制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊，檢測二氫楊梅素的累積濃度。

2.2.7 正交實驗

以糊精用量(7、8、9 g)、羧甲基纖維素鈉用量(0.3、0.4、0.5 g)、二氫楊梅素用量(2、2.5、3 g)為考察因素， 采用正交表 L9(33)設計實驗，以累積濃度為考察指標，確定最佳處方。

表3 因素水平表

2.2.8 驗證試驗

以二氫楊梅素2.5 g，羧甲基纖維素鈉0.4 g，糊精8g，按2.2制備膠囊劑的制備方法制備膠囊，清除不符合要求的膠囊。按2.2.2檢測方法檢測累積濃度，重復檢測5次。

3 結果與分析

3.1 單因素實驗

3.1.1 標準曲線制作

按照2.1.1的方法制備二氫楊梅素標準曲線為A=0.2975x+0.0008，R2=0.9995。

圖1 二氫楊梅素標準曲線

3.1.2 膠囊囊材的選擇

根據(jù)2.2.1的操作，對膠囊囊材進行選擇，結果見表4。

表4 不同膠囊囊材

由表4可知，根據(jù)《中國藥典》2015版第四部崩解時限檢查法(膠囊劑)規(guī)定：除另有規(guī)定外，取供試品6粒，按片劑的裝置與方法進行檢查。硬膠囊應在30 min內(nèi)全部溶解[13]。因此，選用明膠膠囊殼作為最佳膠囊囊材。

3.1.3 膠囊填充劑的選擇

圖2 膠囊填充劑的選擇

根據(jù)2.2.2的操作，對膠囊填充劑進行選擇，結果見圖2。

由圖2可知，相同條件下糊精的累積濃度在60 min時的累積濃度遠大于淀粉和乳糖的累積濃度，且藥物的累積濃度越大，藥物釋放的程度就大，人體吸收藥物的量也大，治療效果越好[14]。因此，選擇糊精作為最佳填充劑。

3.1.4 膠囊填充劑用量的選擇

根據(jù)2.2.3的操作，對膠囊填充劑用量進行選擇，結果見圖3。

圖3 糊精的最佳用量選擇

由圖3可知，相同條件下糊精的用量為8 g時累積濃度遠大于其他用量的累積濃度，用量多了浪費原料，少了得不到預期治療效果，因為不同糊精的量與藥粉之間的藥理作用不同，治療效果不同。因此，糊精的最佳用量為8 g。

3.1.5 膠囊粘合劑的選擇

根據(jù)2.2.4的操作，對膠囊粘合劑進行選擇，結果見圖4。

圖4 膠囊粘合劑的選擇

由圖4可知，羧甲基纖維素鈉累積濃度大于其他明膠和羥丙基纖維素的累積濃度，藥物的累積濃度與粘合劑的類型有關，不同粘合劑與藥粉之間的作用不同，藥物的溶出程度不同，藥物的累積濃度不同，人體吸收藥物的量不同，以至于治療效果不同。因此，選擇羧甲基纖維素鈉為粘合劑。

3.1.6 膠囊粘合劑用量的選擇

根據(jù)2.2.5的操作，對膠囊粘合劑用量進行選擇，結果見圖5。

圖5 膠囊粘合劑用量的選擇

由圖5可知，羧甲基纖維素鈉的用量為0.4 g時，累積濃度遠大于其他用量的累積濃度，不同羧甲基纖維素鈉的量與藥粉之間的作用不同，用量多了浪費原料，少了得不到預期治療效果，因為不同二氫楊梅素的量與藥粉之間的藥理作用不同，治療效果不同。因此，羧甲基纖維素鈉的最佳用量為0.4 g。

3.1.7 二氫楊梅素的最佳用量選擇

根據(jù)2.2.6的操作，對膠囊粘合劑用量進行選擇，結果見圖6。

圖6 二氫楊梅素的最佳用量選擇

由圖6可知，當二氫楊梅素的用量在2.5 g是的累積濃度最大,二氫楊梅素的用量多了浪費原料，少了達不到預期治療效果，因為不同二氫楊梅素的量與藥粉之間的藥理作用不同，治療效果不同。因此，二氫楊梅素的最佳用量為2.5 g。

3.2 正交實驗

表4 正交實驗結果

表5 方差分析表

由表4和表5分析可知，極差(R)越大，對二氫楊梅素膠囊劑的累積濃度影響就越大越主要，二氫楊梅素用量A的極差為2.003，糊精用量的極差為0.812，羧甲基纖維素鈉的用量的極差為5.981。所以，三種因素對二氫楊梅素膠囊劑的積累濃度影響顯著性大小為C>A>B，即整個實驗過程中羧甲基纖維素

鈉的用量對二氫楊梅素膠囊劑的累積濃度影響最為顯著，二氫楊梅素用量次之，糊精用量幾乎沒有影。綜合上述分析，得到最佳方案為A2B1C3。即當二氫楊梅素用量為2.5 g，糊精用量為7 g，羧甲基纖維素鈉用量為0.5 g時為最佳方案。

3.3 驗證試驗

表6 驗證試驗

相同條件下的不同膠囊的累積濃度不同，原因可能有：①膠囊之間有重量差異；②正交實驗使用的膠囊與驗證實驗使用的膠囊儲存環(huán)境溫度不同；③試驗操作誤差。

4 結論

二氫楊梅素資源豐富，來源廣泛，具有很好的應用前景。本文對二氫楊梅素膠囊劑進行了制備。膠囊劑能提升藥物的生物利用度、可延緩藥物的釋放和定位釋藥、能掩蓋藥物不良嗅味或提高藥物穩(wěn)定性、可彌補其他固體劑型的不足等優(yōu)點[15]。實驗中以藤茶為原料，以丙酮提取純化得到二氫楊梅素(95%)，研配法制備二氫楊梅素膠囊劑，以人工胃液模擬胃的內(nèi)部環(huán)境對二氫楊梅素膠囊的處方進行研究，以累積濃度為指標，采用紫外分光光度法對二氫楊梅素膠囊劑的主藥用量、填充劑類型及其用量、粘合劑類型及其用量進行考察[5]，因為藥物在體內(nèi)的釋放濃度與粘合劑、填充劑的類型及用量有關，不同輔料與藥粉之間的作用不同，藥物釋放的程度不同[16]，人體吸收藥物的量不同，以至于治療效果不同，以崩解時限為標準對囊材進行選擇，因為不同囊材與藥物的藥理作用不同[17]，制備二氫楊梅素膠囊劑，得到糊精作為填充劑、羧甲基纖維素鈉作為粘合劑，選擇出來最佳的處方為:二氫楊梅素純化提取物2.5 g、糊精的量(填充劑)7 g、羧甲基纖維素鈉(粘合劑)0.5 g時為最佳處方，得到的最大累積濃度為21.950，提升了二氫楊梅素膠囊劑的溶出度，提高了二氫楊梅素的其生物利用度，提升了其治療效果[18]。