DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性與中國(guó)帕金森病抑郁的關(guān)系

馬凌燕，馬惠姿，馮濤,2,3

1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)中心運(yùn)動(dòng)障礙性疾病科，北京市100070；2.國(guó)家神經(jīng)系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，北京市100070；3.北京腦重大疾病研究院帕金森病研究所，北京市100070

帕金森病是一種常見的中老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，我國(guó)65歲以上人群患病率約1700/10萬(wàn)，并隨年齡增長(zhǎng)而升高，給家庭和社會(huì)都帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[1]。帕金森病主要臨床特征包括震顫、肌強(qiáng)直、動(dòng)作遲緩、姿勢(shì)平衡障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀和嗅覺減退、便秘、睡眠行為障礙、抑郁等非運(yùn)動(dòng)癥狀。與運(yùn)動(dòng)癥狀相比，帕金森病非運(yùn)動(dòng)癥狀也是影響患者生活質(zhì)量的主要原因[2]，其中以抑郁最為突出，比率高達(dá)34%[3]，嚴(yán)重影響患者日常生活。抑郁癥狀可出現(xiàn)在帕金森病各個(gè)階段，部分甚至先于運(yùn)動(dòng)癥狀出現(xiàn)，貫穿整個(gè)病程。帕金森病患者并發(fā)抑郁的發(fā)病率為2.7%～90%，平均40%[4]，隨疾病進(jìn)展而升高。

帕金森病抑郁的病理生理機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為腦內(nèi)多巴胺和非多巴胺系統(tǒng)均參與其中，后者包括5-羥色胺、膽堿和去甲腎上腺素能系統(tǒng)。與原發(fā)性抑郁不同，帕金森病抑郁更多與多巴胺和去甲腎上腺素系統(tǒng)功能紊亂相關(guān)，與5-羥色胺系統(tǒng)的相關(guān)性相對(duì)較小。此外，遺傳因素在帕金森病并發(fā)抑郁的發(fā)生中發(fā)揮重要作用[5-6]。

多巴胺能系統(tǒng)不僅參與調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)，也參與情緒和情感的調(diào)節(jié)。位于中腦邊緣系統(tǒng)的多巴胺D3受體(dopamine D3 receptor,DRD3)參與情緒和行為的調(diào)控，D3受體敲除小鼠可出現(xiàn)與運(yùn)動(dòng)功能無(wú)關(guān)的焦慮-抑郁樣癥狀[7]。臨床上，應(yīng)用D3受體激動(dòng)劑可改善帕金森病抑郁癥狀。

編碼D3受體的DRD3基因位于3q13.3，由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成。其中，第1外顯子第9密碼子中腺嘌呤(A)被鳥嘌呤(G)替代，可致D3受體N-末端的絲氨酸被甘氨酸替代，使該受體與多巴胺結(jié)合力增加，稱為Ser9Gly多態(tài)性(dbSNP庫(kù)編碼rs6280)。國(guó)內(nèi)外研究顯示，Ser9Gly多態(tài)性與多種精神行為障礙相關(guān)，包括雙相情感障礙[8]、精神分裂[9-13]等。

本研究探討DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性與中國(guó)帕金森病抑郁的相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 一般資料

納入2016年6月至2018年6月，就診于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)中心運(yùn)動(dòng)障礙性疾病科的散發(fā)帕金森病患者共312例，男∶女=1.31∶1(177∶135)，平均年齡64.7歲，平均起病年齡61.5歲。所有患者均符合2015年國(guó)際帕金森和運(yùn)動(dòng)障礙病學(xué)會(huì)帕金森病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[14]，統(tǒng)一帕金森病評(píng)定量表Ⅲ(Unified Parkinson"s Disease Rating ScaleⅢ,UPDRS-Ⅲ)評(píng)分13～48分。所有患者均為散發(fā)病例，無(wú)家族史，否認(rèn)一氧化碳中毒史及服用可導(dǎo)致帕金森綜合征藥物史。納入患者接受必要的輔助檢查，包括頭顱MRI、黑質(zhì)超聲、肛門括約肌肌電圖等，排除其他神經(jīng)變性疾病導(dǎo)致帕金森綜合征(如多系統(tǒng)萎縮、進(jìn)行性核上性眼肌麻痹等)和繼發(fā)帕金森綜合征；排除現(xiàn)正服用抗抑郁藥物患者。

采用漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)評(píng)分對(duì)患者進(jìn)行測(cè)評(píng)，根據(jù)評(píng)分將患者分為抑郁組(HAMD評(píng)分＞8分)和非抑郁組(HAMD評(píng)分≤8分)。其中抑郁組132例，非抑郁組180例?？紤]到運(yùn)動(dòng)癥狀波動(dòng)可能影響抑郁程度，HAMD評(píng)定在服用抗帕金森病藥物前完成。

選擇同期年齡和性別匹配的健康體檢者252例作為對(duì)照組。均否認(rèn)神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

三組一般資料見表1。

所有受試者均簽署知情同意書。本研究方案經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)檢測(cè)

受試者用EDTA抗凝管采集靜脈血2～3 ml，應(yīng)用全基因組DNA提取試劑盒(德國(guó)QIAGEN公司)提取基因組DNA。PCR-RFLP檢測(cè)DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性。

采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物。上游5"-GCT CTA TCT CCA ACT CTC ACA-3"，下游5"-AAG TCT ACT CAC CTC CAG GTA-3"。PCR反應(yīng)體積25 μl，包括基因 組 DNA 100 ng，引物各 1 μl(6.25 pmol/μl)，10 PCRbuffer 2.5 μl，Taq酶2.5 U(5 U/μl)。

PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性1 min，95℃30 s，55℃ 20 s，72℃ 30 s，共35個(gè)循環(huán)。72℃延伸7 min，4℃保存。采用ABI 3730xl測(cè)序儀測(cè)定基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson卡方檢驗(yàn)進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡評(píng)估。顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

Ser9Gly位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。抑郁組、非抑郁組和對(duì)照組間，基因型和等位基因分布頻率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見表2。

3 討論

本研究對(duì)中國(guó)帕金森病并發(fā)抑郁人群的DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性進(jìn)行分析，未發(fā)現(xiàn)DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性與中國(guó)帕金森病抑郁的相關(guān)性，DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性并非中國(guó)帕金森病抑郁的遺傳易感因素。

臨床中，帕金森病的情緒問(wèn)題易被忽視，漏診率高。43%帕金森病患者在運(yùn)動(dòng)癥狀發(fā)生之前就出現(xiàn)抑郁；而在臨床確診帕金森病時(shí)，約9.2%患者已經(jīng)伴發(fā)抑郁[15]。帕金森病抑郁癥狀與原發(fā)性抑郁有所不同，前者疲乏、注意力集中困難更明顯[16]。兩者發(fā)病機(jī)制也存在差異，原發(fā)性抑郁與5-羥色胺系統(tǒng)受損有關(guān)，而單胺，尤其是多巴胺和去甲腎上腺素的下調(diào)是帕金森病抑郁的病理生理基礎(chǔ)。

DRD3基因幾乎只表達(dá)于大腦邊緣系統(tǒng)，其中Ser9Gly在DRD3基因多態(tài)性研究中探討得最為廣泛。與Ser/Gly雜合子和Ser/Ser純合子相比，Gly/Gly純合子編碼的受體與多巴胺的親和力顯著增高[17]。目前研究認(rèn)為，Ser9Gly多態(tài)性與帕金森病及帕金森病震顫無(wú)明顯相關(guān)[18-19]，但可能與原發(fā)性震顫[20]、帕金森病受體激動(dòng)劑療效[19]、雙相情感障礙[8]和精神分裂[9-13]相關(guān)。

帕金森抑郁與多種因素有關(guān)，與病程、疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。我們既往對(duì)800例帕金森病患者進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)[21]，抑郁組UPDRS-Ⅲ總分和其中震顫、強(qiáng)直、少動(dòng)和步態(tài)姿勢(shì)異常評(píng)分均高于非抑郁組。本研究顯示，兩組年齡、起病年齡、UPDRS-Ⅲ評(píng)分無(wú)顯著性差異，但抑郁組起病年齡較早、運(yùn)動(dòng)評(píng)分較高，統(tǒng)計(jì)學(xué)未發(fā)現(xiàn)顯著性差異，可能與病例數(shù)較少有關(guān)。

本研究并未發(fā)現(xiàn)DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性與中國(guó)帕金森病患者抑郁存在相關(guān)性，但單一研究結(jié)論可靠性低，尚需不同人種、大規(guī)模研究證實(shí)。帕金森病抑郁與多種因素有關(guān)，受運(yùn)動(dòng)癥狀、年齡、性別、環(huán)境等因素影響，遺傳方面也可能由多個(gè)遺傳位點(diǎn)變異引起，單一基因位點(diǎn)變異可能不足以引起帕金森病抑郁癥狀。

表1 三組一般資料

表2 三組基因型和等位基因比較(n)