淺析藍(lán)每盛世組培快繁技術(shù)

孫淼淼

摘要：本文以盛世莖段作為外植體試驗(yàn)材料，研究了不同培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)率、增殖倍數(shù)的影響。通過研究藍(lán)莓盛世品種莖段組織培養(yǎng)再生體系，確定各培養(yǎng)階段的最佳培養(yǎng)條件，為藍(lán)莓盛世品種組培快繁提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓;盛世;外植體藍(lán)莓，又稱越橘，因其果實(shí)中富含花青苷、鞣化酸等抗氧化物質(zhì)，具有緩解眼疲勞、預(yù)防心血管疾病、提高人體免疫力等功效，頗受全球消費(fèi)者青睞，被列為人類五大健康水果之一，堪稱21世紀(jì)“世界水果之王”。藍(lán)莓盛世品種是2000年由美國佛羅里達(dá)大學(xué)選育出的，樹體生長健壯，豐產(chǎn)性強(qiáng)，平均單果重2.37克，果實(shí)天藍(lán)色，果蒂痕小且干，質(zhì)地極硬，風(fēng)味甜且高抗莖干潰瘍病，具有廣闊的市場前景。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

該試驗(yàn)以藍(lán)莓盛世半木質(zhì)化莖段為外植體，采自遼寧省農(nóng)科院大連分院試驗(yàn)基地。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

無菌株系的建立：晴天上午取溫室內(nèi)生長健壯、腋芽飽滿的一年生枝條，去掉葉片，剪成1.0～1.5厘米長的單芽莖段，用飽和洗衣粉澄清液浸l0分鐘后，再用自來水沖洗30分鐘，在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸30秒，無菌水洗1次，再用0.1%升汞滅菌6～10分鐘后，用無菌水沖洗3次，再放入帶3層濾紙的培養(yǎng)皿中，待莖段上的水被濾紙吸附后，將單芽莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選：不定芽誘導(dǎo)以WPM為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的玉米素ZT（0.3，0.5，0.8，1.0，1.5）毫克/升，添加一定濃度的赤霉素GA30.5毫克/升與生長素IAA0.3毫克/升添加蔗糖30克/升，瓊脂4.6克/升，將培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.4每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1500～3000勒克斯，培養(yǎng)溫度25°C。誘導(dǎo)試驗(yàn)每個(gè)處理只接種了10個(gè)單芽，3次重復(fù)，20天調(diào)查其污染率與誘導(dǎo)率。

增殖培養(yǎng)：增殖培養(yǎng)以WPM為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的玉米素ZT（0.3，0.5，0.8，1.0，1.5）毫克/升，添加一定濃度生長素IAA0.3毫克/升，糖30克，瓊脂4.6克調(diào)pH值至5.4，待誘導(dǎo)出來的不定芽長高至2～3厘米時(shí)，接種到設(shè)定的培養(yǎng)基上，每處理接種3瓶，每瓶5個(gè)1.0～1.5厘米單芽莖段，3次重復(fù)，60天調(diào)查增殖倍數(shù)及生長勢。

煉苗：選生長健壯的試管苗進(jìn)行移栽，將試管苗在大棚內(nèi)逐漸打開瓶口，經(jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)瓶身，使之適應(yīng)外界條件，一般需3～5天。

應(yīng)用DPS軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同ZT濃度對(duì)盛世外植體誘導(dǎo)率的影響

由表1可以看出，盛世的污染率都不高，這與在溫室內(nèi)取外植體有一定的關(guān)系，枝條上的雜菌相對(duì)露地上要少很多。誘導(dǎo)率隨著ZT濃度的增加而升高，當(dāng)ZT濃度增加到1.0毫克/升時(shí)，誘導(dǎo)率達(dá)86.67%，當(dāng)ZT濃度增加到1.5毫克/升時(shí)的誘導(dǎo)率下降為83.33%。由此可以看出隨著ZT濃度的增加外植體誘導(dǎo)率逐漸升高，當(dāng)ZT濃度達(dá)到一定高度時(shí)，誘導(dǎo)率達(dá)到最高，再增加ZT濃度，誘導(dǎo)率反而下降。

2.2 不同ZT濃度盛世的增殖倍數(shù)的影響

由表2可見，盛世增殖培養(yǎng)ZT濃度在0.3毫克/升時(shí)，試管苗生長較慢，隨著ZT濃度增加，試管苗株高、生長表現(xiàn)均有所提高，當(dāng)ZT濃度增加到0.8毫克/升時(shí)，試管苗株高4.47厘米，試管苗生長健壯形態(tài)正常，增殖倍數(shù)達(dá)6.4倍，有效苗比例高，生長表現(xiàn)均好于其他處理，隨著ZT濃度的增加基部大量萌發(fā)叢生芽，增殖倍數(shù)變大，苗變細(xì)變?nèi)?，玻璃化苗增加將來可用于移栽的有效苗減少，不利于優(yōu)質(zhì)種苗的生產(chǎn)。

隨著ZT濃度增加，當(dāng)ZT濃度達(dá)到0.8毫克/升時(shí)，盛世試管苗增殖率最高，達(dá)6.4倍，較其他處理差異顯著。

2.3 移栽

移栽前用煙熏劑（異丙威、腐霉利、百菌清等）熏棚。做寬1.0～1.2米的苗床，長按棚寬而定，苗床土要進(jìn)行消毒，移栽基質(zhì)為水苔，水苔浸泡1～2天后，鋪在消毒好的苗床上，厚度5厘米左右，澆透水后再用多菌靈對(duì)水苔進(jìn)行殺菌。取出培養(yǎng)瓶內(nèi)的植株，剪成2～3厘米長枝段，用1000倍液的海藻素浸泡5分鐘，扦插在經(jīng)過消毒處理好的水苔上。枝1.5～2.0厘米，栽完澆水，做成小拱棚，上覆無紡布，大棚上外遮陽。溫度控制在25°C左右，相對(duì)濕度80%以上，一周后逐漸打開小拱棚，20天后植株開始生根，頂尖長出新葉。

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，藍(lán)莓盛世品種的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+ZT1.0毫克/升+GA30.5毫克/升+IAA0.3毫克/升+糖30克+瓊脂4.6克，誘導(dǎo)率高達(dá)86.67%;最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+ZT0.8毫克/升+IBA0.1毫克/升+糖30克+瓊脂4.6克，增殖倍數(shù)為6.4倍。藍(lán)莓盛世誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)過程中，通過提高玉米素ZT的濃度，可有效地提高誘導(dǎo)率和繁殖倍數(shù)。外植體誘導(dǎo)試驗(yàn)中過高的ZT濃度會(huì)抑制腋芽的萌發(fā)，而在增殖試驗(yàn)中過高的ZT濃度會(huì)使試管苗的叢生芽數(shù)量增加過大，苗變?nèi)?，玻璃化傾向增加，質(zhì)量急劇下降。