許氏平鲉發(fā)育早期的氨基酸與脂肪酸組成及變化

韓慧宗 王騰騰 張明亮 王 斐 劉 陽, 孫 娜, 姜海濱

(1. 山東省海洋資源與環(huán)境研究院, 山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點實驗室, 煙臺 264006;2. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院, 上海 201306)

許氏平鲉(Sebastes schlegelii), 俗稱“黑鲪”, 是分布在西北太平洋近岸的冷溫性巖礁棲息魚類[1],亦是我國黃、渤海海區(qū)常見魚種。其繁殖方式為卵胎生, 一般情況下雄魚2—3齡、雌魚3—4齡達(dá)到性成熟, 常在每年的11月左右交尾, 交尾完成后精子儲存在雌魚體內(nèi)至翌年4月份左右, 直至卵子成熟進(jìn)行受精。胚胎在雌魚體內(nèi)發(fā)育, 一般在5月左右產(chǎn)出自由活動的仔魚[2]。因其肉嫩味美、營養(yǎng)豐富, 有“黑石斑”之稱, 又具繁殖能力強(qiáng)、適溫范圍廣、洄游范圍小、自然越冬等特點, 已成為我國北方沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖、海洋牧場、增殖放流和休閑垂釣的重要經(jīng)濟(jì)魚類之一。

魚類胚胎及早期仔魚發(fā)育階段所需營養(yǎng)主要來源于儲存于卵黃的內(nèi)源性物質(zhì), 其主要組分(蛋白質(zhì)和氨基酸、脂肪和脂肪酸、碳水化合物等)及比例是魚類胚胎發(fā)育和仔魚早期發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ),并對隨后的混合營養(yǎng)期和外源性營養(yǎng)期仔、稚魚發(fā)育及成活率起到重要作用[3]。研究表明, 內(nèi)源性營養(yǎng)組分消耗順序有助于確定開口仔魚攝食的營養(yǎng)需求量, 而營養(yǎng)需求量直接影響仔魚發(fā)育的代謝能力[4]。對于仔魚卵黃耗盡后進(jìn)入外源性營養(yǎng)階段, 仔、稚魚發(fā)育過程中對氨基酸與脂肪酸的需求也不盡相同[5]。

目前, 國內(nèi)外有關(guān)許氏平鲉早期發(fā)育階段研究主要集中在體內(nèi)胚胎發(fā)育周期[1]、胚胎離體培養(yǎng)[6]、仔稚魚攝食特性[7]及仔稚幼生長發(fā)育與成活率變化[8]等。但有關(guān)許氏平鲉早期發(fā)育過程中營養(yǎng)需求和代謝特性尚未見報道。本研究采用生化方法, 檢測了許氏平鲉仔魚開口前和仔魚開口后階段氨基酸和脂肪酸組成和含量變化, 并著重比較了仔魚開口前胚胎期和仔魚內(nèi)源性營養(yǎng)2個階段主要脂肪酸的實際利用程度。以期明確許氏平鲉發(fā)育早期發(fā)育營養(yǎng)階段的氨基酸和脂肪酸營養(yǎng)需求情況, 為許氏平鲉規(guī)?；绶N繁育成活率的提高提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用材料于2016年4—7月取自國家級黑鲪原種場-煙臺泰華海洋科技有限公司。選用2015年人工室內(nèi)交尾成功的許氏平鲉雌性親魚, 將9尾雌性親魚分3組放養(yǎng)在25 m3水泥池中待產(chǎn)與取樣,共獲取受精卵(Fertilized egg, FE)、胚胎期(Embryo stage, ES)、初產(chǎn)仔魚(Primiparous larvae,PL1)、前仔魚期(Pre-larva, PL2)、后仔魚期(Postlarva, PL3)和稚魚期(Juvenile, J)等6個典型時期樣品。定期用管口直徑2 mm的玻璃吸管插入許氏平鲉雌魚的生殖孔, 取樣利用徠卡EZ4HD立體顯微鏡觀察確定體內(nèi)胚胎發(fā)育時期, 然后解剖雌魚獲得受精卵和胚胎期樣品(出膜前3—5h), 均各取10 g, 發(fā)育分期參照Yamada等[1]。初產(chǎn)仔魚選取剛從雌魚體內(nèi)產(chǎn)出后2—6h內(nèi)的仔魚, 前仔魚期取3日齡仔魚,后仔魚期取12日齡仔魚, 稚魚期取30日齡稚魚, 發(fā)育具體分期參照劉立明等[8]。初產(chǎn)仔魚至稚魚期樣品分別取20 g, PL2、PL3和J取樣前需饑餓12h。每份樣品設(shè)置3個平行, 取樣后用蒸餾水沖洗、瀝干后立即置于液氮內(nèi)速凍,保存于實驗室-80℃冰箱中。將實驗樣品經(jīng)24h真空冷凍干燥至恒重, 粉碎研磨均勻后待測。

許氏平鲉雌性親魚培育條件為: 水溫11—14℃,鹽度29—32, 溶解氧＞6 mg/L, pH 7.9—8.2, 光照500—1000 lx; 仔魚產(chǎn)出后培育條件為: 水溫14—18℃,鹽度29—32, 溶解氧＞6 mg/L, pH 7.9—8.2, 光照500—1000 lx, 3個培養(yǎng)池的培育條件保持一致,仔魚產(chǎn)出后第1至第20天每日投喂輪蟲, 同時添加小球藻, 第8至第40天投喂鹵蟲幼體, 第25至第60天投喂配合餌料, 日常培育管理參照等劉立明等[8]。

1.2 實驗方法

氨基酸測定稱取研磨的樣品約30 mg左右, 置于水解管中, 加入6 mol/L鹽酸(110±1)℃條件下封管水解22—24h冷卻后, 水解液轉(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中, 定容后過濾, 吸取濾液1 mL, 置于真空干燥器中干燥, 殘留物用2 mL去離子水溶解蒸干, 反復(fù)1—2次, 最后加入pH 2.2緩沖液溶解, 利用日本島津L-8900氨基酸自動分析儀測定。具體測定參照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18654. 11-2008。

游離氨基酸測定采用DABS-Cl柱前衍生-高效液相色譜法進(jìn)行游離氨基酸分析, 具體操作步驟如下: 稱取10.0—20.0 mg蛋白當(dāng)量的樣品于25 mL比色管中, 加水定容后超聲提取, 吸取3.0 mL定容液并加3.0 mL 60 g/L磺基水楊酸, 離心15min, 吸取2.0 mL上清液滴加1.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性, 加水定容至5.0 mL, 依次加入0.1 mol/L碳酸氫鈉溶液30 μL、Sigma DABS-Cl衍生溶液60 μL,于EOFO-944621漩渦混合器中充分混勻, 70℃水浴中待衍生, 利用0.45 μm濾膜過濾, 供高效液相色譜分析。利用Waters E2695高效液相色譜儀配紫外檢測器進(jìn)行檢測。色譜條件: 液相色譜柱為MGC18柱(250 mm×4.6 mm), 流動相采用12 mol/L檸檬酸溶液和30%A+70%乙腈(含4%N, N-二甲基甲酰胺), 流速為1.4 mL/min, 柱溫為35℃, 波長436 nm。

脂肪酸測定測定脂肪酸的樣品采用氯仿甲醇法脂肪酸分析中的油脂提取[9], 采用氣相色譜法[10,11]分析脂肪酸。操作步驟如下: 稱量0.1 g樣品于50 mL消化管中, 依次加入2 mL色譜純正己烷、3 mL甲酰氯, 70℃水浴甲酯化2h, 再加入5 mL 6%K2CO3、2 mL正己烷, 充分振蕩離心, 取上清液待氣相色譜分析。利用日本島津GC-2010高效氣相色譜儀火焰離子化檢測器(FID)檢測。色譜條件: 毛細(xì)管色譜柱為Supelco SP-2560規(guī)格為100 m×0.25 mm×0.20 μm, 進(jìn)樣口與檢測器溫度為260℃, 載氣為高純N2, 柱流速1.8 mL/min, 柱前壓357.4 kPa, 柱溫升溫程序為起始溫度140℃并恒溫5min, 以4℃/min升高至240℃并恒溫10min, 分流進(jìn)樣l.0 μL, 分流比90∶1。通過Supelco 37種脂肪酸甲酯混標(biāo)對照識別脂肪酸, 采用色譜峰峰面積歸一法統(tǒng)計脂肪酸相對百分含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果

2.1 氨基酸組成及變化

總氨基酸組成許氏平鲉發(fā)育早期6個階段樣品所含的9種必需氨基酸和8種非必需氨基酸含量變化列于表1。從總必需氨基酸含量來看, PL1含量最低(214.38 mg/g), PL3含量最高(283.87 mg/g)?？偙匦璋被岷孔兓闆r分為3個階段, 從FE發(fā)育至PL1顯著下降, 至PL3顯著上升, 至J又顯著下降(P＜0.05)。必需氨基酸中亮氨酸和賴氨酸含量在每個發(fā)育階段含量均最高。除蛋氨酸、賴氨酸和精氨酸以外, 其余6種必需氨基酸的含量變化趨勢與總必需氨基酸變化趨勢完全一致。

表1 許氏平鲉發(fā)育早期總氨基酸含量的變化(mg/g 干重)Tab. 1 Changes in total content of amino acid for Sebastes schlegelii in early developmental stages (mg/g dry weight)

從非必需氨基酸含量來看, ES含量最低(247.06 mg/g), PL3含量最高(331.89 mg/g)。非必需氨基酸含量從FE到ES顯著下降(P＜0.05), ES至PL1變化不顯著(P＜0.05), 至PL3顯著上升, 至J又顯著下降(P＜0.05)。除了谷氨酸和甘氨酸外, 其余氨基酸含量變化趨勢與總非必需氨基酸含量變化趨勢一致。所有發(fā)育階段非必需氨基酸中谷氨酸的含量均最高(75.57—104.40 mg/g), 其次是丙氨酸, 兩者之和均占每個發(fā)育階段非必需氨基酸總和的45%以上。谷氨酸也是所有氨基酸中含量最高的,半胱氨酸是所有氨基酸含量中最低的。必需氨基酸與總氨基酸含量在每個發(fā)育時期的比值范圍在0.44—0.50, 非必需氨基酸的含量在每個發(fā)育階段均高于必需氨基酸。

游離氨基酸組成由表2可以看出, 游離氨基酸含量在各發(fā)育階段的變化急劇程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于總氨基酸含量, 游離氨基酸含量FE含量最低, 僅為12.77 mg/g, 至PL1顯著上升, 隨后呈現(xiàn)下降后上升再下降的變化趨勢, 且變化顯著(P＜0.05)。必需游離氨基酸、非必需游離氨基酸與游離氨基酸三者變化趨勢一致, 均表現(xiàn)FE含量最低, PL1含量最高。在必需游離氨基酸中, 除異亮氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和組氨酸外, 其他游離氨基酸從ES到PL1含量顯著上升(P＜0.05), 并在PL1時期含量達(dá)到最高值,PL1發(fā)育到J呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化趨勢(P＜0.05); 在非必需游離氨基酸中, 除甘氨酸和脯氨酸外, 其他各非必需游離氨基酸的變化趨勢與必需游離氨基酸相一致。每個發(fā)育階段必需游離氨基酸的含量均顯著大于非必需游離氨基酸的含量(P＜0.05)。游離氨基酸與總氨基酸的比值為2.37%—19.66%, 各時期比值差異均達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。

2.2 脂肪酸組成與變化

發(fā)育早期脂肪酸的組成特點表3列出了許氏平鲉發(fā)育早期6個階段脂肪酸的百分比組成。在干樣品中共檢出碳鏈長度在C14—C24的29種脂肪酸, 包括9種飽和脂肪酸(SFA)、9種單不飽和脂肪酸(MUFA)和11種多不飽和脂肪酸為(PUFA)。就單一脂肪酸百分含量變化而言, 仔魚開口前階段(FE-PL1) C22:6n-3含量為最高(20.57%—29.17%), 從FE至PL1呈現(xiàn)顯著上升的趨勢(P＜0.05), 而仔魚開口后階段(PL1-J) C16:0含量最高(15.55%—23.98%),從PL1至PL3呈現(xiàn)顯著上升, 而后呈現(xiàn)顯著降低趨勢(P＜0.05)。僅C16:0、C22:6n-3和C18:1n-9c三種脂肪酸就占到各個階段總脂肪酸的40.18%—64.92%。

表2 許氏平鲉發(fā)育早期游離氨基酸含量的變化(mg/g 干重)Tab. 2 Change in total content of free amino acid content for S. schlegelii in early developmental stages (mg/g dry weight)

許氏平鲉早期發(fā)育階段脂肪酸百分含量最高均為PUFA, 占總脂肪酸百分含量的42.50%—52.00%,幾乎占到了總脂肪酸的一半。PUFA中共有4種n-3系列和5種n-6系列脂肪酸, n-3系列脂肪酸百分含量最高的是C22:6n-3和C20:5n-3, C18:2n-6c和C20:4n-6是n-6系列脂肪酸百分含量最高的, PUFA表現(xiàn)為從FE至PL1顯著上升, PL1至PL2又顯著下降, 而后再顯著升高(P＜0.05); SFA中百分含量排在前兩位的為C16:0和C18:0, 上述2種脂肪酸占SFA的總量的79.20%—89.16%。ES中的C22:0和PL1中的C21:0均未檢測到百分比含量。SFA在PL1和PL2中含量最高(36.72%和35.05%), SFA在FE-ES和PL3-J階段表現(xiàn)為顯著下降, PL1-PL2表現(xiàn)為顯著升高(P＜0.05), 其他階段數(shù)值無顯著變化, C16:0、C18:0與SFA百分含量變化趨勢并不一致。仔魚開口前階段SFA和MUFA百分含量在各個階段相差不大, 而仔魚開口后階段MUFA百分含量均最低(18.50%—23.30%)。MUFA中C18:1n-9c百分含量最高, 均占到MUFA的50%以上。MUFA百分含量ES階段變化不顯著(P＞0.05), 從ES至PL3顯著下降, PL3至J顯著上升(P＜0.05)。除FE至ES階段, C18:1n-9c百分含量變化趨勢與ΣMUFA一致。由上可見, SFA、MUFA與PUFA在各個階段百分含量變化趨勢均不一致。

發(fā)育早期主要脂肪酸的實際含量由表4可知, FE中PUFA、SFA和MUFA實際含量在整個早期發(fā)育時期均最高, 分別達(dá)到50.85、49.88和75.22 mg/g, 發(fā)育到PL1均下降到最低值(25.65、12.38和10.43 mg/g), 在6個發(fā)育階段PUFA實際含量均高于SFA和MUFA。就單個脂肪酸而言, 從FE至PL1始終以C22:6n-3(DHA)含量最高, PL2至J主要是以C16:0含量最高。這些主要脂肪酸實際含量在仔魚開口前階段均具有相同的變化規(guī)律, 即在開口前呈顯著下降趨勢(P＜0.05); 而隨著初產(chǎn)仔魚開始攝食后, 除C20:1、C20:5n-3(EPA)和C22:6n-3(DHA)外, 其他脂肪酸均顯著回升(P＜0.05); 此后隨魚體生長發(fā)育整體呈現(xiàn)回落趨勢(P＜0.05)。就ARA、EPA和DHA三種至關(guān)重要脂肪酸而言, 含量最高峰值均出現(xiàn)在FE, 含量最低值分別出現(xiàn)在PL1、PL2、PL3。

表4 許氏平鲉發(fā)育早期階段主要脂肪酸實際含量Tab. 4 The actual content of main fatty acids for S. schlegelii in early developmental stages (mg/g)

仔魚開口前階段的脂肪酸實際利用許氏平鲉仔魚開口前階段分為體內(nèi)胚胎階段(FE-ES)和仔魚內(nèi)源性營養(yǎng)階段(ES-PL1), 其主要脂肪酸的實際利用見圖1。(1) FE-ES階段: 就單一脂肪酸實際利用量最高為C16:0(10.94 mg/g), 其次為C16:1n-7、C20:5n-3(EPA); 從利用率來看, 最高為C18:3n-3(64.11%), C22:6n-3(DHA)的利用率最低, 僅為魚卵DHA的9.71%。就SFA、MUFA、PUFA、n-3 PUFA及n-6 PUFA來看, SFA被利用量和利用率均最高, 分別為22.27 mg/g和43.80%, n-6PUFA的利用量最低為3.58 mg/g, n-3PUFA的利用率最低為22.90%。(2) ES-PL1階段: 單個脂肪酸中實際利用量最高的為C22:6n-3(DHA)(18.23 mg/g), 其次為C18:1n-9c、C16:0; 從利用率來看, C16:1n-7(81.84%)為最高, 其次為C18:0、C20:4n-6(ARA)、C18:1n-9c。就SFA、MUFA、PUFA及n-3 PUFA和n-6 PUFA而言, n-3 PUFA利用量最高, 達(dá)到23.09 mg/g, MUFA利用率最高, 達(dá)到68.85%, n-3 PUFA利用率最低為51.35%。

圖1 許氏平鲉胚胎期(A)與仔魚內(nèi)源性營養(yǎng)階段(B)主要脂肪酸的實際利用程度Fig. 1 Utilization degree of the main fatty acids of S. schlegelii in embryos and endogenous vegetative stage

仔魚開口后階段三種必需脂肪酸的實際利用順序由圖2可知, PL1—PL3階段的EPA/ARA、DHA/ARA比值顯著降低, 說明此階段EPA和DHA相對于ARA被選擇性利用, 而DHA/EPA比值也顯著降低(P＜0.05), 說明DHA相比于EPA被選擇性利用, 所以PL1-PL3階段脂肪酸選擇性利用順序為DHA、EPA和ARA。同理, PL3-J階段的脂肪酸利用順序為ARA、EPA和DHA。在PUFA中PL1-PL3階段的n-3/n-6比值顯著降低(P＜0.05), 說明n-3 PUFA被選擇性利用, 而n-6 PUFA相對保留, 利用順序為n-3 PUFA、n-6 PUFA; 同理, PL3-J階段n-6 PUFA被選擇性利用, 而n-3 PUFA相對得到保留, 利用順序為n-6 PUFA、n-3 PUFA。

圖2 許氏平鲉仔魚開口后階段三種必需脂肪酸含量的相對比值Fig. 2 Changes of the ratio among three essential fatty acids in larvae and juvenile of S. schlegelii

3 討論

3.1 許氏平鲉發(fā)育早期階段氨基酸及游離氨基酸組成及變化規(guī)律

氨基酸在魚類的正常生命代謝中其中重要的作用。本研究系統(tǒng)地測定了許氏平鲉受精卵、胚胎期、初產(chǎn)仔魚、前仔魚期、后仔魚期、稚魚6個時期的總氨基酸和游離氨基酸的含量變化情況。許氏平鲉體內(nèi)發(fā)育階段結(jié)束后總氨基酸、必需氨基酸及非必需氨基酸含量分別下降了12.85%、19.85%和5.92%, 這在大西洋鮭(Salmo salar)[12]、突吻麥鱈鱸(Maccullochella macquariensis)[13]、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)[14]等海水魚中有類似的報道。在許氏平鲉所有發(fā)育早期階段的必需氨基酸中, 亮氨酸(Leu)和賴氨酸(Lys)含量均保持最高, 這可能是兩者在生物體代謝中可分解為乙酰輔酶A和乙酰乙酸, 而它們均是溝通脂類和糖類代謝的中間產(chǎn)物, 然后進(jìn)入三羧酸循環(huán)釋放能量, 在胚胎組織、器官的形成以及新陳代新中具有重要作用[15]。非必需氨基酸中的谷氨酸(Glu)含量最高原因可能在糖-脂-蛋白質(zhì)的代謝與轉(zhuǎn)換有重要作用,谷氨酸在酶的催化下, 生成α-酮戊二酸, 進(jìn)入三羧酸循環(huán), 然后在谷草轉(zhuǎn)氨酶的作用形成草酰乙酸,通過糖異逆生作用形成葡萄糖, 儲存能量促進(jìn)胚胎發(fā)育[16]。許氏平鲉母體內(nèi)胚胎期和仔魚氨基酸來源于卵黃囊中營養(yǎng)物質(zhì)的水解, 初產(chǎn)仔魚氨基酸總量的顯著降低[17,18]。張靜等[19]研究發(fā)現(xiàn)饑餓實驗的初產(chǎn)仔魚仍攜帶殘存的卵黃囊, 仍靠內(nèi)源性營養(yǎng)物質(zhì)生長發(fā)育, 0日齡的初次攝食率僅為25%。隨著隨仔魚前期開口攝食輪蟲與仔魚后期攝食鹵蟲的補(bǔ)充, 因而體內(nèi)總氨基酸、必需氨基酸和非必需氨基酸迅速增加。隨著仔魚后期生長速度的加快,能量代謝和組織器官的發(fā)育均需要大量蛋白質(zhì)的供應(yīng), 當(dāng)出現(xiàn)供應(yīng)不足的情況下導(dǎo)致了仔魚后期至稚魚期總氨基酸含量的降低。

在許氏平鲉卵黃囊分散的小油球隨著胚胎發(fā)育融合為1個或數(shù)個大油球, 為沉性卵[6]。在許氏平鲉的受精卵中游離氨基酸含量在整個發(fā)育早期階段含量最低, 僅占到總氨基酸含量的2.37%, 與海水魚類沉性卵的游離氨基酸含量測定結(jié)果相似, 為總氨基酸含量的2%—3%[20], 其含量最低原因可能是受精卵發(fā)育階段游離氨基酸被大量消耗, 使其降到最低, 也說明游離氨基酸是受精卵的主要能源物質(zhì)。在一般情況下, 海水魚受精卵至仔魚開口前游離氨基酸的總庫量是顯著持續(xù)下降的, 但許氏平鲉游離氨基酸總量及與總氨基酸比值呈現(xiàn)上升的趨勢, 與同為卵胎生魚類褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)[21]研究結(jié)果一致, 但與條斑星鰈(Hippoglossus hippoglossus)[22]和彎口笛鯛(Lutjanus campechanus)[23]的研究結(jié)果截然相反。研究發(fā)現(xiàn)游離氨基酸庫中的游離氨基酸主要是卵黃蛋白的水解產(chǎn)物, 而魚類對游離氨基酸庫與卵黃蛋白的利用順序有一定規(guī)律性, 胚胎發(fā)育先利用游離氨基酸, 后利用卵黃蛋白水解的游離氨基酸[24], 這也可能是許氏平鲉體內(nèi)胚胎發(fā)育游離氨基酸總量持續(xù)上升的原因。當(dāng)許氏平鲉從母體產(chǎn)出后卵黃囊徹底消耗殆盡進(jìn)入外源性營養(yǎng)階段, 游離氨基酸含量迅速降低,而外源性氨基酸主要來源是蛋白質(zhì)、多肽和游離氨基酸, 研究表明游離氨基酸比蛋白質(zhì)和肽類的吸收效率更高, 海水仔稚魚攝食生物性餌料(輪蟲、鹵蟲幼體等)后, 游離氨基酸能迅速釋放被仔稚魚吸收利用[25], 所以及時補(bǔ)充足夠且豐富的開口餌料對提高苗種成活率具有重要作用。許氏平鲉仔魚開口前階段必需氨基酸利用率遠(yuǎn)高于非必需氨基酸, Wilson[26]研究表明任何一種必需氨基酸的缺乏或不足都會導(dǎo)致魚類生長緩慢或飼料轉(zhuǎn)化率降低,在本研究中半胱氨酸、組氨酸、異亮氨酸和丙氨酸等氨基酸減少率較快, 必需氨基酸的利用程度遠(yuǎn)高于非必需氨基酸。已有的研究表明, 在開口餌料中添加必需氨基酸能促進(jìn)仔、稚魚等成活率和生長率, 如虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[27]、真鯛(Pagrus major)[28]。

3.2 許氏平鲉發(fā)育早期脂肪酸組成變化及仔魚開口前階段脂肪酸利用程度分析

脂肪酸是魚類早期發(fā)育階段是重要的代謝能源物質(zhì), 許氏平鲉開口攝食前主要在雌魚母體卵巢內(nèi)完成, 但營養(yǎng)物質(zhì)不依賴母體供應(yīng), 主要依賴于卵黃維持正常生理活動[6]。在本研究中許氏平鲉仔魚開后前階段3大類脂肪酸實際含量中, PUFA的含量均高于SFA和MUFA, 這與大部分海水魚類如黑線鱈(Melanogrammus aeglefinus)[29]的研究結(jié)果一致。在許氏平鲉受精卵主要脂肪酸實際含量排在前4位分別為C22:6n-3(DHA)、C18:ln-9c、C16:0和C20:5n-3(EPA), 此結(jié)果與很多海水魚類受精卵中主要脂肪酸組成相似[21], 說明這些脂肪酸對許氏平鲉早期發(fā)育尤為重要。

海水魚在仔魚開口前階段對脂肪酸的利用順序具有取舍性[30]。Gunasekera等[31]在研究金頭鯛(Maccullocha macquarensis)的早期發(fā)育中研究發(fā)現(xiàn), 脂肪酸利用順序為SFA、MUFA、n-6 PUFA、n-3 PUFA, 單不飽和脂肪酸SFA和飽和脂肪酸MUFA作為重要能量來源被優(yōu)先利用, 而n-3 PUFA被適當(dāng)保存下來, 在本研究中許氏平鲉胚胎期對脂肪酸的利用符合此規(guī)律。就胚胎期單個脂肪酸利用率最高的為C18:3n-3和C18:0而言, 此情況與條石鯛(Oplegnathus fasciatus)[32]研究相似。而許氏平鲉胚胎期對n-3PUFA的實際利用率最低, 尤其是C22:6n-3(DHA)被優(yōu)先保留, 這點與施永海等[33]對菊黃東方鲀(Takifugu flavidus)研究結(jié)果一致。仔魚內(nèi)源營養(yǎng)階段脂肪酸利用順序為MUFA、n-6 PUFA、SFA、n-3 PUFA, n-3 PUFA的實際利用率仍最低且得到保留。也印證了脂肪酸在胚胎發(fā)育及內(nèi)源營養(yǎng)階段按照n-9系列、n-6系列、n-3系列的順序被先后利用[34], n-3 PUFA被適當(dāng)?shù)乇４嫦聛?。許氏平鲉仔魚內(nèi)源營養(yǎng)階段單個脂肪酸利用率最高的為C16:1n-7和C18:0, 黃旭雄等[35]研究發(fā)現(xiàn)日本鬼鲉主要的MUFA中胚胎后期和卵黃囊仔魚選擇性消耗C16:1,此情況與本研究相似, 但日本鬼鲉主要的SFA中選擇性消耗C16:0, C18:0相對得到保留, 此結(jié)果與本研究此不同。在仔魚內(nèi)源營養(yǎng)階段ARA與DHA的利用率顯著高于EPA, 另外仔魚對C22n:6n-3(DHA)實際利用量最高達(dá)到18.23 mg/g, 說明DHA對許氏平鲉開口前的仔魚發(fā)育的重要性。

3.3 許氏平鲉仔魚開口后仔、稚魚脂肪酸特點與苗種成活率高低探討

研究證實海水魚類仔、稚魚的必需脂肪酸包括DHA、EPA和ARA三種高度不飽和脂肪酸[25], 研究發(fā)現(xiàn), 在合成必需脂肪酸的能力上海水魚類比淡水要低的多[36], 由于在許氏平鲉仔魚內(nèi)源性營養(yǎng)階段無外源營養(yǎng), 又不能將C18:2n-6和C18:3n-3等短鏈脂肪酸在脂肪酸去飽和酶的脫氫作用下和脂肪酸延長酶的延長作用下生長DHA和EPA[37]。當(dāng)許氏平鲉開口攝食輪蟲后, 前仔魚期以攝食輪蟲為主, 后仔魚期以攝食鹵蟲幼體為主, n-3 PUFA被選擇性大量利用, 需從外界補(bǔ)充大量的n-3 PUFA。生物餌料中n-3 PUFA含量的高低直接影響著海水魚類仔、稚魚的生長和存活[38]。研究發(fā)現(xiàn)許氏平鲉第一、二個危險期處在初產(chǎn)仔魚階段(0—3d)和仔魚尾鰭條發(fā)育及背臀鰭擔(dān)形成期[8]。初產(chǎn)仔魚至后仔魚期n-3 PUFA被選擇性消耗, 尤其是DHA和EPA相對于ARA被選擇性消耗, 而過低的DHA可能會導(dǎo)致海水魚類應(yīng)激能力降低, 可能是時期成活率低下的原因之一。對輪蟲和鹵蟲幼體進(jìn)行富含DHA和EPA的營養(yǎng)強(qiáng)化, 可能會降低死亡率。研究發(fā)現(xiàn)許氏平鲉第三、四個“危險期”均處于稚魚期[8], 本研究中仔魚后期到稚魚期n-6 PUFA被選擇性消耗, 尤其是ARA相對于DHA和EPA被選擇性消耗大, 海水魚類仔、稚魚魚體及神經(jīng)組織中的ARA含量相對于DHA和EPA較少, 所以往往忽視其重要性, 研究發(fā)現(xiàn)ARA在海水硬骨魚類生長與存活、變態(tài)過程、體色形成及免疫力保護(hù)等方面發(fā)揮重要作用[39,40]。大黃魚研究發(fā)現(xiàn)在稚魚顆粒飼料中添加適宜的ARA能顯著提高稚魚抵抗外界脅迫的能力[25]。所以在后仔魚期至稚魚期盡快完成顆粒配合餌料的馴化, 應(yīng)在顆粒飼料中及時補(bǔ)充富含ARA的營養(yǎng)物質(zhì), 從而減少稚魚期因營養(yǎng)不足引起死亡高峰的發(fā)生。