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    丙型肝炎抗體陽性患者HCV RNA與肝功能指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的意義

    2019-05-27 06:26:46朱少美劉集鴻周瀟
    分子診斷與治療雜志 2019年3期
    關(guān)鍵詞:丙型肝炎肝功能抗體

    朱少美 劉集鴻 周瀟

    丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)引起的血液性傳播疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球約有1.8 億人感染HCV,感染率高達(dá)3%,HCV 的感染分布不均衡,主要集中在發(fā)展中國(guó)家,我國(guó)屬于高感染區(qū),感染率約為3.2%[1]。HCV 感染后,約55%~85%會(huì)進(jìn)展為慢性感染,其中10%~20%會(huì)轉(zhuǎn)變成肝硬化,有5%會(huì)發(fā)展為肝細(xì)胞癌[2],嚴(yán)重危害人類健康。由于HCV 感染起病隱匿,發(fā)展緩慢,大部分患者通常無典型癥狀,往往在肝功能受損后才進(jìn)行HCV 的檢測(cè)。HCV 的診斷主要依據(jù)丙型肝炎抗體、HCV RNA 等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[3],因此早期、精確的診斷對(duì)HCV 的防治以及減緩患者肝臟損傷具有非常重要的意義。同時(shí),進(jìn)行主要肝功能指標(biāo)的監(jiān)測(cè)還可以反映患者的疾病進(jìn)展,調(diào)整治療方案。本研究通過檢測(cè)丙型肝炎抗體陽性患者的HCV RNA 水平與主要肝功能指標(biāo)水平,探討HCV RNA 水平與肝功能損傷的關(guān)系,為HCV 的診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 對(duì)象與方法

    1.1 研究對(duì)象

    選取2014年1月至2017年12月來本院就診的丙型肝炎抗體檢測(cè)陽性患者,共235 例,其中男性133 例,女性102 例,年齡20~89 歲,平均年齡49 歲。

    1.2 血液標(biāo)本采集

    患者空腹采血,同時(shí)采集無抗凝血、EDTA 抗凝血、肝素抗凝血各3 mL,2 000 r/min 離心10 min,取血清或血漿分別用于丙型肝炎抗體、HCV RNA、主要肝功能指標(biāo)的檢測(cè)。

    1.3 丙型肝炎抗體檢測(cè)

    根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法原理,采用北京萬泰生物有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒,操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行,檢測(cè)儀器為美國(guó)Biotek 酶標(biāo)儀ELX-800。

    1.4 HCV RNA 檢測(cè)

    根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)方法原理,采用上??迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法),操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行,檢測(cè)儀器為伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司的實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀CFX Conenect,可檢測(cè)范圍是500~108IU/mL。根據(jù)HCV RNA 檢測(cè)結(jié)果<500 IU/mL、500~107IU/mL 和>107IU/mL 分別劃分為陰性組、低中病毒水平組、高病毒水平組[4]。

    1.5 主要肝功能指標(biāo)檢測(cè)

    包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷 草 轉(zhuǎn) 氨 酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨?;D(zhuǎn)移酶(γ-glutamyl transferase,GGT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、總蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、總膽紅素(total bilirubin,TBil)、直接膽紅素(direct bilirubin,DBil)8 項(xiàng)主要肝功能指標(biāo)。ALT、AST、GGT 和ALP 的檢測(cè)采用速率法,TP 采用雙縮脲法,ALB 采用溴甲酚紫法,TBil 和DBil 采用重氮法[5]。儀器與試劑為羅氏電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)Cobas 6000 及配套的原裝試劑,所有的操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用IBM SPSS Statistics 21 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。方差齊時(shí),多組間的比較采用One-Way ANOVA 分析,2 組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢測(cè)。方差不齊時(shí),多組間的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal-wallisH(K)分析,2 組間的比較采用Mann-Whitney U 分析。多個(gè)率之間比較用卡方檢驗(yàn)。HCV RNA 與生化指標(biāo)間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。當(dāng)P<0.05 時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 丙型肝炎抗體陽性患者HCV RNA 水平分布情況

    在235 例丙型肝炎抗體陽性的患者中,HCV RNA 陰性組、低中病毒水平組和高病毒水平組分別有68 例、111 例和56 例,HCV RNA 陽性率合計(jì)71.06%(167/235),其分布情況見表1。

    表1 HCV 病毒載量分布情況Table 1 Distribution of HCV virus load

    2.2 不同HCV 病毒水平組的年齡和性別分布

    不同HCV 病毒水平組之間的年齡和性別分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),同時(shí)不同性別間HCV RNA 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具體情況見表2。

    2.3 不同HCV 病毒水平組主要肝功能指標(biāo)情況

    丙型肝炎抗體陽性患者8 項(xiàng)肝功能指標(biāo)的異常率約7.23%~48.51%,其中3 組間的ALT、AST、GGT 指標(biāo)的異常率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且ALT 和AST 異常率隨HCV 病毒水平增高而逐漸升高,GGT 異常率在HCV 陽性組明顯高于陰性組,具體見表3。3 組間的ALT、AST、GGT、ALB水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);其中,每2 組間ALT 水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,隨著病毒水平增高逐漸升高;低中病毒水平組和高病毒水平組AST 水平高于陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但兩病毒組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩病毒組的GGT 水平高于陰性組,低中病毒組與陰性組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而低中病毒組的ALB 水平低于陰性組和高病毒水平組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);其余肝功能指標(biāo)3 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)具體見表4。HCV RNA水平與ALT、AST、GGT 水平呈正相關(guān)(P<0.05)具體見表5。

    表2 不同HCV 病毒水平組的年齡和性別分布Table 2 Age and gender distribution in different HCV virus load level groups

    表3 不同HCV 病毒水平組的肝功能異常率[n(%)]Table 3 Abnormal rate of liver function in different HCV virus load level groups[n(%)]

    3 討論

    由于HCV 感染缺乏預(yù)防性疫苗,加強(qiáng)早期診斷和治療是目前控制HCV 感染策略中最為有效的手段[6]。HCV 抗體檢測(cè)是HCV 感染最重要的篩查方式,HCV RNA 檢測(cè)是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[7-8],它們有著各自的優(yōu)缺點(diǎn):HCV 抗體檢測(cè)雖然簡(jiǎn)單方便,但它不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染;HCV RNA 檢測(cè)的是病毒RNA 含量,可以直接反映體內(nèi)HCV 的復(fù)制情況,因此探討HCV 抗體陽性和HCV RNA 陽性的一致性具有重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中,HCV 抗體陽性患者中HCV RNA 陽性率為71.06%,高于文獻(xiàn)報(bào)道的67.0%[4]和47.40%[9],可能的原因一是檢測(cè)的試劑廠家不同,包被的HCV抗原以及核酸檢測(cè)下限不一樣;二是雖然研究選取的都為醫(yī)院就診患者,但存在分布差異,本研究中患者大部分為門診肝病??苹颊?,這可能是主要的原因。本研究中大約29% HCV 抗體陽性患者核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性,一部分患者可能是既往感染,目前已經(jīng)自發(fā)清除病毒,一部分患者可能是處于感染間隙期或者病毒復(fù)制水平過低,導(dǎo)致HCV RNA 低于檢測(cè)下限而無法檢出[10],建議HCV抗體陽性但HCV RNA 陰性的患者應(yīng)于3 個(gè)月后復(fù)查,防止漏檢[11]。本研究發(fā)現(xiàn)不同HCV 病毒水平組之間的年齡和性別分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),不同性別間HCV RNA 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與邵林楠等人[12]的研究相同。

    表4 不同病毒水平組的肝功能指標(biāo)(x±s)Table 4 Liver function indexes in different HCV virus load level groups(x±s)

    表5 HCV RNA 水平與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性Table 5 Correlation between HCV RNA level and liver function index

    HCV 主要會(huì)引起患者肝臟發(fā)生慢性炎癥壞死及纖維化,進(jìn)一步可能進(jìn)展為肝癌[13]。肝功能生化指標(biāo)檢測(cè)是其疾病進(jìn)程監(jiān)測(cè)以及治療方案調(diào)整的良好指標(biāo)。在本研究中,3 組間的ALT、AST、GGT 指標(biāo)的異常率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且ALT 和AST 異常率隨病毒水平增高而逐漸升高,有病毒感染組的GGT 異常率明顯高于陰性組,錢明[14]、張瑾[15]、邵芳等人[16]也發(fā)現(xiàn)ALT 的異常率隨HCV RNA 水平的升高而增大。HCV RNA 水平與ALT、AST、GGT 水平呈正相關(guān)(P<0.05),ALT、AST 水平在有病毒水平組明顯高于陰性組,且隨病毒水平增高而逐漸升高,與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17-19]。本研究中部分HCV 感染患者的ALT、AST、GGT 水平正常,可能是處于HCV 感染早期或者病毒損傷較輕,HCV RNA 攜帶時(shí)間的長(zhǎng)短也是肝功能指標(biāo)變化的原因之一。本研究發(fā)現(xiàn)低中水平病毒組的GGT 水平明顯高于陰性組,但高病毒水平組則與陰性組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.066),可能是高病毒水平組例數(shù)較少或者部分患者進(jìn)行了藥物治療。低中病毒水平組的ALB 水平低于陰性組和高病毒水平組,與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20-21],也有研究者[22]發(fā)現(xiàn)ALB 水平隨HCV RNA水平升高而升高。部分HCV RNA 高水平病毒患者的ALB 正?;蜉p微降低,可能是病毒損傷肝臟是一個(gè)持續(xù)的過程,由于肝細(xì)胞代償能力強(qiáng),在損傷輕微時(shí)不影響肝臟合成功能。在本研究中ALP、TG、TBil 和DBil 水平變化不是很明顯,孟憲春等[23]研究表明隨HCV RNA 水平的升高,TBIL、DBIL 水平升高,ALP 水平有所升高但不及其它肝功能指標(biāo),可能與患者病毒呈攜帶狀態(tài)有關(guān),肝細(xì)胞代償能力強(qiáng),代謝功能并未受影響,但仍有待進(jìn)一步隨訪觀察和動(dòng)態(tài)分析。綜合這8 項(xiàng)肝功能指標(biāo),ALT、AST、GGT 在反應(yīng)病毒復(fù)制水平上具有較好的提示價(jià)值,表明HCV 感染、復(fù)制過程中以直接損傷肝細(xì)胞為主,導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)損傷,而對(duì)肝細(xì)胞蛋白合成功能、排泄功能影響較小。

    對(duì)抗HCV 抗體初篩陽性患者進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)可以準(zhǔn)確有效判定地HCV 的感染,但由于在窗口期或因靈敏度限制而導(dǎo)致漏檢,無法直接反應(yīng)病毒對(duì)機(jī)體的損傷程度。而肝功能指標(biāo)的檢測(cè)可以反應(yīng)肝功能的損傷程度,對(duì)臨床治療有一定的指導(dǎo)意義,并且對(duì)于低病毒載量的患者的發(fā)現(xiàn)有一定提示作用,但是無法區(qū)別病因。HCV RNA 檢測(cè)和肝功能檢測(cè)各有優(yōu)缺,不能相互替代,因此,在HCV抗體初篩陽性患者中,將兩者聯(lián)合應(yīng)用,對(duì)HCV 的早期診斷及療效檢測(cè)具有重要的臨床價(jià)值[24-26]。

    綜上所述,對(duì)丙型肝炎抗體檢測(cè)陽性的患者聯(lián)合HCV RNA 檢測(cè)和主要肝功能指標(biāo)檢測(cè),尤其是ALT、AST、GGT 項(xiàng)目,將有助于準(zhǔn)確診斷其感染情況、監(jiān)測(cè)病毒活動(dòng)和評(píng)估肝臟損害程度,對(duì)丙型肝炎的診斷和治療具有十分重要的臨床意義。

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