日糧酪氨酸水平對9～12周齡泰和烏骨雞生產(chǎn)性能及組織黑色素含量的影響

趙艷平 黎觀紅 瞿明仁 李建喜

泰和烏骨雞（Chinese Taihe Chicken）原產(chǎn)于江西省泰和縣，具有烏皮、烏肉、烏骨等十大特征，是我國特有的珍貴家禽[1]，它集藥、補、食三大功能于一體,對人體具有特殊的滋補功能,可調節(jié)生理機能,提高機體的免疫力。烏骨雞與普通雞最明顯的差異就是黑色素。研究表明烏骨雞中的黑色素具有保護功效,可以避免紫外線引起的急慢性改變,具有清除自由基抗氧化等功能,從而可以預防癌癥、抗衰老、提高肌體的免疫力[2-3]?！侗静菥V目》中記載：泰和烏骨雞的入藥效果與烏雞皮、骨、肉中的黑色素的深淺有關，其顏色愈黑者，入藥愈佳[4]。目前，對泰和烏骨雞藥理作用的解釋主要歸因于泰和烏骨雞機體的黑色素，認為烏骨雞的經(jīng)濟與藥用價值主要決定于烏骨雞的“烏色”性狀。因此，提高泰和烏骨雞體內(nèi)黑色素含量，是提高泰和烏骨雞藥用滋補價值的重要措施。國內(nèi)外對烏骨雞黑色素的分布、沉積規(guī)律、烏度特征以及黑色素的物理化學性質、基因調控等方面進行了大量研究[5-9]。然而，到目前為止很少見有如何采用營養(yǎng)調控措施來提高泰和烏骨雞黑色素含量及藥用價值的研究報道。

動物體內(nèi)黑色素是由酪氨酸經(jīng)酪氨酸酶的作用，經(jīng)過一系列復雜的生物轉化過程而形成的。酪氨酸是黑色素合成的前體物質[10]，由此推斷，日糧酪氨酸水平可能對泰和烏骨雞組織黑色素的合成具有重要影響。為此，本試驗采用6種酪氨酸水平的日糧飼喂泰和烏骨雞，觀察日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞9～12周齡生產(chǎn)性能及血清和組織中游離酪氨酸含量的影響和組織中黑色素含量的影響，從而為利用營養(yǎng)調控技術提高泰和烏骨雞藥用滋補價值提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設計

采用單因子試驗設計方法。選用健康、體重均勻的56日齡泰和烏骨雞270只，隨機分成6個處理組，每個處理組設3個重復，每個重復15只雞，飼養(yǎng)至12周齡。各組間初始體重無顯著差異（P＞0.05）。在試驗期，6個處理組分別飼喂酪氨酸水平為0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%的日糧。

1.2 試驗日糧

基礎日糧配方及營養(yǎng)水平見表1，基礎日糧酪氨酸水平為0.45%（實測值）。在基礎日糧中按照試驗設計方法分別添加不同水平的晶體酪氨酸，使試驗日糧酪氨酸分別達到相應水平。所有日糧除酪氨酸外，其余養(yǎng)分水平均相同。酪氨酸購于北京嘉康源有限公司，純度為98.5%以上。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗于2008年12月～2009年1月在江西農(nóng)業(yè)大學動物科技學院飼養(yǎng)實驗室進行。各處理組泰和烏骨雞的飼養(yǎng)條件完全相同。試驗雞采取隨機分層立體飼養(yǎng)，自由飲水，自由采食，室溫保持在22～24℃，濕度保持在55%～65%。定期清理打掃雞舍衛(wèi)生并消毒，每天沖洗飲水器。按照正常免疫程序進行免疫。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標

于12周齡末晨喂前逐只空腹稱重，記錄各重復的飼料消耗量，計算日增重、日采食量和料重比。

1.4.2 血清及組織中游離酪氨酸含量的測定

第12周齡末從每處理組中選1只共18只健康狀況正常，接近平均體重的烏骨雞，于清晨空腹稱重后，立即宰殺放血，收集約5 ml血液于EP管中，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心3 min，取得血清并分裝，-20℃保存?zhèn)溆谩４蜷_腹腔，分別取心臟、肝臟、肌肉（胸部）、皮膚（胸部），置于-20℃冰箱中保存。

樣品前處理：將樣品從冰箱中取出，置室溫下解凍后取組織0.5 g加入1 ml生理鹽水在冰浴中勻漿2 min，用1 ml生理鹽水清洗勻漿器3次，再用0.5 ml生理鹽水清洗勻漿器1次，合并勻漿液和清洗液，然后置于低溫高速離心機中4℃離心15min（12000r/min）將上清液作為組織待測液，裝入5 ml的EP管中，置于-20℃冰箱中冷藏待測。

測定方法參照鄒明珠等[11]的方法并稍加改進：按表2操作程序進行檢測,用722可見分光光度計測定吸光度，波長480 nm，比色杯光徑1 cm，空白管調零，讀取0 min時的吸光度，按下列公式計算：

樣品中游離酪氨酸的含量（mol/l）=[（A+0.017）/3.1]×10-3。

表2 血清及組織游離酪氨酸含量測定步驟

1.4.3 組織中黑色素含量的測定

參照Ozeki等[12]（1995）的方法并稍加改進。準確稱取組織10 mg溶解在1 ml的Soluene-350：水 =9：1(V/V)試劑中，沸水浴45 min，冷卻，用722可見分光光度計在500 nm測定吸光度。

1.5 統(tǒng)計分析

所有結果以平均數(shù)±標準差表示。采用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析和Duncan's多重比較。

2 結果與分析

2.1 日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞生產(chǎn)性能的影響（見表3）

由表3可知，日糧酪氨酸水平顯著影響了泰和烏骨雞平均日增重、料重比（P＜0.05），開始平均日增重隨著日糧酪氨酸水平的提高而提高，料重比則下降，到添加水平為1.05%時的平均日增重最大，料重比最低，之后繼續(xù)提高日糧酪氨酸水平，則平均日增重降低，料重比增大。此外，酪氨酸水平極顯著影響（P＜0.01）平均日采食量。

2.2 日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞血清及組織中游離酪氨酸含量的影響（見表4）

表3 不同日糧酪氨酸水平對9～12周齡泰和烏骨雞生產(chǎn)性能的影響

表4 不同日糧酪氨酸水平對12周齡泰和烏骨雞血清及組織中游離酪氨酸含量的影響（mol/l）

由表4可知，日糧酪氨酸水平顯著影響血清及組織中游離酪氨酸含量（P＜0.05），隨著日糧中酪氨酸添加水平的提高血清及組織中游離酪氨酸的含量先增加后降低。心臟、肌肉、皮膚組織中游離酪氨酸的含量在1.25%水平時達到最高，且與0.45%水平組差異極顯著（P＜0.01）；而血清和肝臟組織中游離酪氨酸的含量在0.85%水平時達到最高。

2.3 日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞不同組織中黑色素含量的影響（見表5）

日糧酪氨酸水平極顯著影響組織中黑色素的含量（P＜0.01），隨著日糧酪氨酸添加水平的提高組織中黑色素含量先增加后降低。肝臟、肌肉、皮膚中黑色素的含量在1.05%水平時達到最高且與0.45%水平組差異極顯著（P＜0.01）；而心臟組織中黑色素的含量在1.25%水平達到最高。

表5 不同日糧酪氨酸水平對12周齡泰和烏骨雞不同組織中黑色素含量的影響

3 討論

瞿明仁[13]和Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)，泰和烏骨雞對酪氨酸需要量與外來肉雞及其它地方品種雞相比存在很大差異。泰和烏骨雞與生長速度相近的生長期白殼蛋雞相比，其苯丙氨酸+酪氨酸的需要量比生長期白殼蛋雞高18.49%～26.5%，這應與泰和烏骨雞獨特的遺傳特性有關。泰和烏骨雞與其它品種家雞相比，最顯著的區(qū)別是其體內(nèi)含有大量的黑色素。烏骨雞黑色素是由酪氨酸經(jīng)一系列生化反應過程而形成的[10]，因此，泰和烏骨雞要產(chǎn)生大量的黑色素，日糧中必須有足夠的酪氨酸供組織黑色素的合成。在本試驗條件下，日糧的酪氨酸水平（0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%）顯著影響9～12周齡泰和烏骨雞所有生產(chǎn)性能指標（P＜0.05），并且極顯著影響血清及組織中游離酪氨酸的含量和組織中黑色素的含量（P＜0.01）。這進一步說明，為最大程度地促進泰和烏骨雞組織黑色素的合成和取得最大生長速度，日糧需提供較高水平的酪氨酸，以1.05%水平為宜，而且，泰和烏骨雞取得最大生長速度和最大黑色素沉積時，對酪氨酸的需求量是相同的。這與Solminski等[15]的細胞培養(yǎng)實驗結果一致。令人感興趣的是，Avraham等[16]研究發(fā)現(xiàn)，給運動小鼠注射非必需酪氨酸能夠通過抑制5-羥色胺生成而抑制運動性食欲減退，提高小鼠采食量、認知力和運動耐受力。同樣地，通過改變?nèi)占Z酪氨酸濃度可調節(jié)動物（哺乳動物和鳥類動物包括雞、鴨、火雞等）體重[17]，當動物體重降低時，提高日糧酪氨酸水平可提高動物采食量和日增重；而當動物超重時，降低日糧酪氨酸水平可降低日增重。本試驗亦發(fā)現(xiàn)，在一定濃度范圍內(nèi)，泰和烏骨雞日增重和日采食量有隨日糧酪氨酸水平的提高而有增加的趨勢，且變化趨勢與組織黑色素含量變化一致。由此可知，通過提高日糧酪氨酸水平不僅可以提高泰和烏骨雞生長性能，還可促進泰和烏骨雞組織黑色素的合成。綜合各指標，日糧酪氨酸水平在1.05%時，泰和烏骨雞可同時取得最大生長性能和組織黑色素沉積。并且Morris研究小組[18-20]發(fā)現(xiàn)，飼喂苯丙氨酸+酪氨酸缺乏的日糧會導致黑發(fā)貓的毛發(fā)由黑色變成紅褐色，向日糧中添加充足的酪氨酸或苯丙氨酸+酪氨酸可防止這一變化；同時發(fā)現(xiàn)，毛發(fā)中黑色素含量與日糧酪氨酸水平（日糧苯丙氨酸含量固定為10 g/kg）成正相關關系，維持毛發(fā)最佳黑色素沉積時苯丙氨酸+酪氨酸需要量高于維持最大生長需要量的兩倍。

4 小結

日糧酪氨酸水平可顯著影響泰和烏骨雞組織中黑色素的合成和生產(chǎn)性能的提高，在本試驗的條件下，以日糧中1.05%的酪氨酸為適宜水平，泰和烏骨雞組織中黑色素的合成量最大，生產(chǎn)性能最高。

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