乳腺癌患者術(shù)中分子診斷的應(yīng)用意義分析與研究

趙 諍 張美華

（廣元市中心醫(yī)院檢驗科，四川 廣元 628000）

目前，前哨淋巴結(jié)（SLN）活檢術(shù)是腋淋巴結(jié)陰性早期乳腺癌的標(biāo)準術(shù)式。快速、準確的進行SLN診斷，通過一次手術(shù)完成腋淋巴結(jié)清掃術(shù)，可有效避免二次手術(shù)。術(shù)后連續(xù)切片是診斷SLN的金標(biāo)準，而術(shù)中診斷方法的優(yōu)劣尚無定論，既往主要采用細胞印片、冷凍切片和快速免疫組織化學(xué)方法進行SLN的術(shù)中病理診斷，但假陰性率較高。近年來，分子診斷技術(shù)因較高的靈敏度和特異度而備受關(guān)注。本研究中66例乳腺癌患者均采用GeneSearchTM核糖核酸（RNA）樣本制備試劑盒進行SLN檢測，現(xiàn)就術(shù)中分子診斷情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：我院乳腺病中心2013年1月至2015年8月收治乳腺癌患者共66例（SLN活檢標(biāo)本122枚，1.85枚/例），年齡28～76歲，平均年齡（49.2±6.6）歲；其中浸潤性導(dǎo)管癌49例，導(dǎo)管原位癌11例，浸潤性小葉癌4例，透明細胞癌1例，黏液癌1例。按照倫理委員會批準的研究方案和赫爾辛基宣言，計劃接受SLNB的患者均簽署知情同意書；有同側(cè)腋窩手術(shù)史的患者不予納入。

1.2 方法。SLN處理：均垂直于長軸進行切割，厚度為2.0 mm；奇數(shù)組織塊行冰凍及石蠟組織學(xué)檢測，偶數(shù)組織塊行BLN檢測。冰凍及石蠟組織學(xué)檢測：SLN組織塊各取切片3張，切片厚度為6 μm。剩余組織進行HE染色，表明、200 μm、500μ m 3個水平切片，厚度為4 μm。以美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）的相關(guān)標(biāo)準作為診斷標(biāo)準[1]，轉(zhuǎn)移灶≥2 mm為宏轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶0.2～2 mm為微轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶≤0.2 mm為孤立性腫瘤細胞（ITC）。宏轉(zhuǎn)移和（或）微轉(zhuǎn)移為SLN陽性，ITC及無腫瘤細胞轉(zhuǎn)移為SLN陰性。GeneSearch檢測：采用GeneSearchTM RNA樣本制備試劑盒在SLN的送檢組織勻漿液中提取RNA，在SmartCycler系統(tǒng)上，基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）原理，利用GeneSearchTM 乳腺淋巴結(jié)試劑盒進行RNA標(biāo)本檢測。細胞角蛋白19（CK-19）、乳腺球蛋白（MG）、膽色素原脫氨酶（內(nèi)部對照物）納入實時RT-PCR，并對陽性和陰性外對照物進行檢測。循環(huán)閾值（Ct）[2]：“MG≤31和（或）CK-19≤30”為SLN陽性。

2 結(jié) 果

122枚SLN中，宏轉(zhuǎn)移16枚，微轉(zhuǎn)移2枚，無腫瘤轉(zhuǎn)移104枚，無ITC。GeneSearch檢測陽性18枚，陰性104枚；以組織學(xué)檢測結(jié)果為標(biāo)準，GeneSearch檢測的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值為88.9%（16/18）、96.2%（100/104）、80.0%（16/20）、98.0%（100/102），與組織學(xué)檢測的總符合率為95.1%（116/122）。見表1。

表1 GeneSearch檢測與組織學(xué)檢測結(jié)果（枚）

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要基于TNM分期選擇乳腺癌治療方案，因此淋巴結(jié)狀況的準確評估尤為關(guān)鍵。SLN活檢可以反映腋窩淋巴結(jié)情況，同時還能避免腋窩淋巴結(jié)清掃的不良結(jié)果，術(shù)中SLN評估亦能避免患者進行二次手術(shù)。AJCC標(biāo)準中，微轉(zhuǎn)移和宏轉(zhuǎn)移均為SLN陽性，需行腋窩淋巴結(jié)清掃，ITC一般作為陰性處理。2005年美國臨床腫瘤學(xué)會（ASCO）推薦采用細胞學(xué)和冰凍組織學(xué)進行術(shù)中SLN評估，雖然診斷特異度高，但細胞學(xué)的靈敏度低，冰凍組織學(xué)有漏診及毀損標(biāo)本等缺點[3]。如今，采用RT-PCR方法檢測乳腺癌標(biāo)志物的表達，用于SLN術(shù)中診斷取得一定成果。其中美國Veridex公司的GenesearchTM RNA樣本制備試劑盒已獲臨床批準，利用GeneSearch可對SLN中的乳腺球蛋白mRNA和CK-19表達進行準確檢測。有研究顯示[4]，該方法在是否存在＞0.2 mm轉(zhuǎn)移灶的判定中，敏感度均高于術(shù)中冷凍切片和細胞印片。采用Genesearch法進行標(biāo)本檢測，可有效彌補取材不足可能導(dǎo)致的假陰性結(jié)果，就Genesearch法本身而言，亦能避免轉(zhuǎn)移腫瘤量少可能出現(xiàn)的假陰性結(jié)果。此外，在中國大部分醫(yī)院，SLN術(shù)后病理診斷與普通腋淋巴結(jié)無異，已證實該方法存在取樣誤差，易導(dǎo)致部分微轉(zhuǎn)移灶出現(xiàn)漏診。國際多個指南均推薦對SLN組織塊進行連續(xù)切片或逐層切片，但此種方法耗時耗力，可行性差。術(shù)中分子診斷則可以對100%的淋巴結(jié)組織進行評價，可以克服傳統(tǒng)方法存在的誤差情況。本研究中，GeneSearch檢測的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、與組織學(xué)檢測的總符合率分別為88.9%、96.2%、80.0%、98.0%、95.1%，說明 GeneSearch檢測能夠保證SLN術(shù)中診斷結(jié)果的準確性。需要注意的是，本研究Genesearch檢測中，有假陰性2例、假陽性4例，究其原因可能與轉(zhuǎn)移癌灶分布不均、組織污染、技術(shù)操作等因素相關(guān)。

綜上所述，GeneSearch法具有操作簡便、檢測快速、準確性高、可重復(fù)性好等特點，用于SLN術(shù)中診斷具有良好的臨床價值，值得推廣及運用。