脂溢性角化病病變組織NF-κB P65表達(dá)的變化及與炎癥的相關(guān)性

王 成，杜 鎮(zhèn)，馮世軍，王翠芹，王艷心，李保強(qiáng)△

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德 067000；2.滄州市中心醫(yī)院）

脂溢性角化?。╯eborrheic keratosis，SK）又稱老年疣、老年斑、基底細(xì)胞乳頭瘤，是因角質(zhì)形成細(xì)胞成熟遲緩所致，具體發(fā)病機(jī)制至今不明，是一種多見于老年人的良性腫瘤，但也存在惡變的可能。NF-κB為核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，有研究表明，NF-κB可通過持續(xù)活化促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、減少其凋亡，NF-κB還可通過上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子促進(jìn)血管新生，以及通過誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)提高腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移能力，因此，NF-κB與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等多個(gè)環(huán)節(jié)有關(guān)[1]。NF-κB P65作為NF-κB家族的一員，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也發(fā)揮著重要作用，目前在多種腫瘤的研究中逐漸增多。炎癥誘發(fā)腫瘤是當(dāng)今醫(yī)學(xué)前沿的重要問題，炎癥與NF-κB P65在腫瘤的研究中越來越受到重視。為此，本研究觀察了NF-κB P65及炎癥在脂溢性角化病中的變化情況，探討了二者在脂溢性角化病發(fā)生發(fā)展中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2012年-2014年本院皮膚科就診的77例脂溢性角化病患者手術(shù)切除的病變組織，其中頭面部17例、軀干42例、四肢18例，男性47例、女性30例，患者平均年齡（54.83±14.00）歲，均經(jīng)病理檢查確診。以距離病變邊緣0.5cm手術(shù)切除的組織作為病變周圍組織，共77例。另選取正常皮膚組織10例，男性4例、女性6例，平均年齡（48.00±12.61）歲，為手術(shù)切除的色素痣周圍正常皮膚。所取組織均在中性甲醛中固定后常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度5μm，用于免疫組織化學(xué)染色和HE染色。HE鏡下觀察發(fā)現(xiàn)77例脂溢性角化病病變組織中62例真皮內(nèi)合并單一核細(xì)胞浸潤（炎癥），病變周圍組織中有13例合并炎癥。

1.2 主要試劑與設(shè)備 兔抗人NF-κB P65（M270），購自美國Bioworlde公司；即用型快捷型免疫組織化學(xué)Max VisionTM試劑盒、DAB顯色試劑盒，購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。S325石蠟切片機(jī)，英國Shandon Finesse公司；Wd750ASL23微波爐，廣東格蘭仕集團(tuán)公司；BX40F4顯微鏡，日本Olympus公司。

免疫組化染色結(jié)果根據(jù)Fromowitz[2]的綜合計(jì)分法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，在高倍鏡下（10×40）觀察：①陽性染色強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色3分；②陽性細(xì)胞百分比：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。兩項(xiàng)結(jié)果相加為最終結(jié)果：＜2分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+）、4～5分為中度陽性（++）、6～7分為強(qiáng)陽性（+++），以（+）及以上統(tǒng)計(jì)為陽性結(jié)果。

1.3 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判斷 采用Max VisionTM免疫組織化學(xué)染色法檢測脂溢性角化病病變組織、病變周圍組織及正常皮膚NF-κB P65的表達(dá)情況。切片常規(guī)脫蠟、水化、烘片，自來水沖洗，3% H2O2室溫孵育，微波爐抗原熱修復(fù)，血清封閉，一抗4℃過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性結(jié)果的組織切片作為陽性對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用四格表法卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

77例脂溢性角化病病變組織NF-κB P65的陽性表達(dá)率為88.31%，明顯高于病變周圍組織（陽性率為14.29%）及正常皮膚組織（陽性率為0），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。77例脂溢性角化病患者病變組織中伴有炎癥的百分率（80.52%）明顯高于病變周圍組織（16.88%）及正常皮膚組織（0），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的表達(dá)與炎癥呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.769，P＜0.05）。見圖1-4及附表：

附表 脂溢性角化病病變組織、病變周圍組織及正常皮膚組織NF-κB P65的陽性表達(dá)情況及伴炎癥情況

圖1 脂溢性角化病病變組織NF-κB P65的陽性表達(dá)

圖2 脂溢性角化病病變周圍組織NF-κB P65的陽性表達(dá)（×400）

圖3 正常組織NF-κB P65的陰性表達(dá)（×400）

3 討論

脂溢性角化病好發(fā)于40歲以上的人群，白種人更常見，美國人的發(fā)病率高達(dá)20%[3-4]，但具體發(fā)病機(jī)制不明。據(jù)報(bào)道[5]，脂溢性角化病與遺傳、免疫缺陷、病毒感染、紫外線照射等有關(guān)。脂溢性角化病雖然是皮膚腫瘤中常見的良性腫瘤，但近年來也有惡變的報(bào)道[6-7]。

NF-κB是一種核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可與相關(guān)基因啟動(dòng)子或增強(qiáng)子特異性結(jié)合，轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)靶基因，進(jìn)而控制細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程。NF-κB轉(zhuǎn)錄因子家族包括Rel（c-Re1）、RelA(p65)、RelB、NF-κB1(p50/p105)和NF-κB2(p52/p100)五個(gè)成員[8]，可以同源或異源二聚體的非活性形式存在于幾乎所有細(xì)胞的胞質(zhì)中，其活性最強(qiáng)的形式通常是P50/P65兩個(gè)亞基組成的異源二聚體[9]。在某些情況下，如紫外線刺激，P65亞基可直接誘導(dǎo)PKCδ的表達(dá)激活JNK通路，在表皮細(xì)胞中JNK可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，而細(xì)胞增殖又對(duì)NF-κB具有激活作用，活化的NF-κB通過上調(diào)多種凋亡抑制蛋白如c-IAP1、c-IAP2等的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞免受凋亡[10]。還有研究表明，NF-κB還可通過抑制細(xì)胞自噬發(fā)揮抗凋亡作用[11]。目前，NF-κB P65在腫瘤中的研究逐漸受到重視，一些腫瘤，如卵巢癌、皮膚鱗狀細(xì)胞癌、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤、子宮內(nèi)膜樣癌、結(jié)腸癌組織中NF-κB P65的表達(dá)異常增高[9、12-15]。因此，檢測NF-κB P65在脂溢性角化病中的表達(dá)情況，有助于為該病的發(fā)生、發(fā)展提供參考。

圖4 脂溢性角化病真皮淺層單一核細(xì)胞浸潤（炎癥，×100）

本研究結(jié)果顯示，脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的陽性率為88.31%，明顯高于病變周圍組織及正常組織。脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65高表達(dá)提示，NF-κB P65可能在脂溢性角化病的發(fā)生、發(fā)展過程發(fā)揮重要作用。腫瘤的發(fā)生有多種機(jī)制參與，研究者們一直在探討炎癥與腫瘤之間的關(guān)系。KARIN等[16]的研究提示腫瘤的發(fā)生與炎癥有關(guān)，許多炎癥因子如TNF、IL-6等可激活NF-κB通路，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。為此，本研究亦同時(shí)觀察了脂溢性角化病病變組織并發(fā)炎癥的情況，結(jié)果顯示脂溢性角化病病變組織伴炎癥的百分率（80.52%）明顯高于病變周圍組織和正常皮膚組織，且在脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的陽性表達(dá)與炎癥呈正相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，雖然脂溢性角化病的具體發(fā)病機(jī)制仍不明確，但在該病的發(fā)病過程中NF-κB P65和炎癥可能具有協(xié)同作用，二者相互促進(jìn)，共同參與了脂溢性角化病的發(fā)病過程。