助陽(yáng)開郁顆粒的急性毒性研究

董晨虹，李欽青，柴金苗，曹曉龍，段秀俊

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

助陽(yáng)開郁顆粒由黑順片、炙甘草、炒黃柏、桂枝、砂仁、牡蠣、蛤粉、茯苓八味藥組成，是山西省名中醫(yī)趙杰醫(yī)生多年來(lái)的臨床驗(yàn)方，具有助陽(yáng)開郁、疏肝健脾等功效，主要用于治療抑郁癥，臨床療效甚佳。為更好地服務(wù)患者，欲將其開發(fā)為顆粒劑。因處方中含有黑順片，項(xiàng)目組對(duì)助陽(yáng)開郁顆粒的急性毒性進(jìn)行了研究，為其臨床應(yīng)用提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥物與動(dòng)物 助陽(yáng)開郁顆粒（批號(hào)20180721，實(shí)驗(yàn)室自制），娃哈哈純凈水。SPF級(jí)昆明種小鼠，1~8 w 齡，雌雄各半，體質(zhì)量為（18～22）g，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（京）2014-0013。

1.1.2 儀器與設(shè)備 LT10028B電子天平（常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司）、ZNHW型電熱套（上海越眾儀器設(shè)備有限公司）、Model型真空干燥箱（上海貴測(cè)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、TD5A-WS湘立離心機(jī)（湖南湘立儀器有限公司）、DHG9053型烘箱（上海承標(biāo)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、一次性使用無(wú)菌注射器（圣貝諾上海醫(yī)療用品有限公司）、灌胃針（創(chuàng)博環(huán)球北京生物科技有限公司）。

1.2 方 法

1.2.1 助陽(yáng)開郁顆粒混懸液的制備 取助陽(yáng)開郁顆粒，研磨成細(xì)粉，加蒸餾水配制成最大藥物濃度1.5 g/mL的混懸液（相當(dāng)于生藥含量7.11 g/mL）。

1.2.2 半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定［1］取SPF級(jí)小鼠40只，雌雄各半，適應(yīng)性分開飼養(yǎng)7 d后，禁食不禁水12 h。實(shí)驗(yàn)前稱重，標(biāo)記，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組和4個(gè)給藥組，每組8只。對(duì)照組以40 mL/kg生理鹽水灌胃，給藥組分別以10 mL/kg、20 mL/kg、30 mL/kg、40 mL/kg的助陽(yáng)開郁顆?；鞈乙哼M(jìn)行灌胃，給藥5 h后自由進(jìn)食進(jìn)水，連續(xù)觀察1 w。1 w之內(nèi)，小鼠全部存活，解剖之后未見各個(gè)臟器有明顯病變。受給藥體積和藥液濃度的限制，未能測(cè)出本品的半數(shù)致死量。故目前認(rèn)為40 mL/kg的給藥劑量即為該制劑的最大耐受量。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)制劑安全性，進(jìn)行了最大耐受量實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 最大耐受量驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)［2-3］取SPF級(jí)昆明小鼠40只，雌雄各半，適應(yīng)性分開飼養(yǎng)7 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組和給藥組，每組20只，禁食不禁水12 h。對(duì)照組以40 mL/kg生理鹽水灌胃，給藥組以40 mL/kg助陽(yáng)開郁顆粒混懸液灌胃（相當(dāng)于臨床成人用量的153.15倍），給藥5 h后自由進(jìn)食進(jìn)水，連續(xù)觀察14 d，記錄小鼠有無(wú)死亡情況，外觀、排泄等有無(wú)異常［4］，并定期記錄體質(zhì)量，結(jié)果見表1。14 d后進(jìn)行解剖，觀察各組臟器有無(wú)病變，取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進(jìn)行稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)小鼠一般狀況的影響

小鼠灌胃助陽(yáng)開郁顆粒后觀察，給藥后動(dòng)物行為、外觀等均未見異常；未觀察到動(dòng)物出現(xiàn)抽搐、麻痹等肌肉活動(dòng)異常，對(duì)外界反應(yīng)正常；無(wú)流涎、流淚等現(xiàn)象；糞便顏色正常，無(wú)稀便、便秘、膿血便等；膚色正常，無(wú)眼球突出、眼瞼下垂、呼吸興奮或抑制等中毒癥狀；無(wú)動(dòng)物死亡情況［5-6］。

2.2 小鼠體質(zhì)量的變化

分別于給藥后第1、7、14天測(cè)動(dòng)物體質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠體質(zhì)量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 助陽(yáng)開郁顆粒急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響 （g，x±s）

2.3 對(duì)小鼠臟器的影響

對(duì)小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進(jìn)行稱重，計(jì)算臟器指數(shù)［7］，給藥組小鼠與對(duì)照組比較，臟器指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表2。

表2 助陽(yáng)開郁顆粒急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響 （mg/g，x±s）

3 討 論

半數(shù)致死量是藥物急性毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)［8］，LD50越大，藥物的毒性越低。實(shí)驗(yàn)按照最大灌胃體積40 mL/kg給予助陽(yáng)開郁顆粒最稠混懸液，相當(dāng)給予生藥量為284.4 g/kg，黑順片為22 g/kg，該生藥劑量為臨床成人用量的153.15倍，小鼠全部存活，且未見明顯毒性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該制劑臨床用藥是安全的，為其進(jìn)一步開發(fā)和推廣應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

未經(jīng)炮制的藥材附子中雙酯型生物堿含量普遍很高，單酯型及非酯型生物堿含量低，而炮制品則反之。在炮制過(guò)程中劇毒性的雙酯型生物堿會(huì)變成單酯型及非酯型生物堿，從而降低了附子的毒性。助陽(yáng)開郁顆粒中用到附子的炮制品黑順片，為有毒中藥，周子渝等［9］報(bào)道黑順片的LD50為44.8 g/kg，在進(jìn)行該制劑的急性毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，用到最大給藥劑量，相當(dāng)于黑順片為22 g/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)未達(dá)到文獻(xiàn)報(bào)道的半數(shù)致死劑量。再加上中藥復(fù)方配伍的增效減毒作用，使該制劑的用藥安全系數(shù)更大。李冰潔等［10］報(bào)道附子與甘草配伍具有一定的減毒作用，助陽(yáng)開郁顆粒處方中同時(shí)含有附子與甘草，這也可能是制劑不呈現(xiàn)毒性的原因之一。