油瓜的化學成分研究

李 會，王 薔，易春蝶，樊保敏，曾廣智，尹俊林

(1.云南民族大學 云南民族大學-香港浸會大學傳統(tǒng)天然藥物研發(fā)聯(lián)合實驗室,云南 昆明 650500; 2.云南民族大學 民族藥資源化學國家民委-教育部重點實驗室，云南 昆明 650500)

油瓜(Hodgsoniamacrocarpa)，別名油渣果、豬果、有棱油瓜、渣果、麻井(傣語)等，為葫蘆科油渣果屬多年生木質(zhì)藤本植物.該屬植物僅含1種及1變種，即H.macrocarpa及其變種腺點油瓜(H.macrocarpaVar.Capniocarpa)，主要分布于我國的云南、兩廣及西藏.H.macrocarpa的種子富含油脂，可食用，因其食用味道似油渣，故又稱油渣果[1].目前該屬植物化學成分研究較少，僅有H.capniocarpa種子中油脂成分的分析報道.油瓜種仁含油量高達70%，遠高于大豆、油菜、小桐子等生物柴油原料植物的含油量，主要包括脂肪酸和甘油脂[1-3]，其脂肪酸由14～18個碳鏈組成，組分與由15個碳鏈組成的柴油十分相近，可利用其特點，發(fā)展對能源戰(zhàn)略和經(jīng)濟發(fā)展具有重要意義的生物柴油[4].油瓜在民間具有較好的食用及藥用基礎(chǔ)，烤熟后的種仁為多個少數(shù)民族所喜食；其根、莖、葉、果皮、仁均可入藥，主要用于結(jié)石、拉肚子、痔瘡、皮膚病、胃病、風濕、傷寒、血吸蟲等病癥的治療[5].其植株的各個藥用部位因加工方式的不同所治療疾病的類型也有所不同，根莖與草果一起煨水喝可以治療結(jié)石，具有消炎的作用；油瓜葉可用于治療腳腫痛、腎結(jié)石、腎炎等病癥；油瓜內(nèi)果皮(果肉)白色，味苦、易氧化，新鮮果肉切片曬干煮水喝可治療肚子疼，煎服可治療胃病[5].因此，有必要對其化學及活性成分開展研究.

對油瓜的化學成分開展了研究，從中分離得到5個化合物，其中化合物2和3具有一定的抗氧化作用，因此可以為油瓜在民間用藥上具有的抗炎癥，腎炎等疾病提供理論依據(jù)，具有一定研究價值.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

油瓜植物樣本，2016年1月底采集于云南西雙版納基諾山，植物樣品經(jīng)中科院昆明植物研究所裴盛基研究員鑒定，植物標本保存于云南民族大學-香港浸會大學傳統(tǒng)天然藥物研發(fā)聯(lián)合實驗室.

1.2 儀器與試劑

DRX-500 和DRX-400 型核磁共振儀(Bruker 公司，瑞士)；Kofler Sartorius-BS124S 型電子分析天平(Sartorius公司，德國)；IKA HB10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海圣科儀器設(shè)備有限公司，中國)；柱色譜硅膠(青島海洋化工廠，中國)；1260 Infinity 型HPLC(Agilent Technologies公司，美國)；6420 Triple Quad LC/MS(Agilent Technologies公司，美國)；SpectraMax i3X多功能微孔板檢測器(Molecular Devices公司，美國)；Sephadex LH-20(Pharmacia 公司，美國)；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)(東京化成工業(yè)株式社會，日本)；其他化學試劑均為國產(chǎn)分析純.

1.3 實驗方法與步驟

干燥油瓜根、莖、葉共12 kg，樣品粉碎后經(jīng)甲醇加熱回流提取3 次，每次2 h，減壓濃縮后得浸膏.干燥后浸膏(600 g)總提物經(jīng)常壓硅膠柱色譜(100～200目)分離，使用V(氯仿)∶V(甲醇)=(95∶5、9∶1、8∶2、7∶3、1∶1)梯度洗脫，得到12個部分(Fr. 1～12).其中Fr. 3 經(jīng)過硅膠和SephadexLH-20 柱色譜，得到化合物1(12 mg)，化合物2(14 mg).Fr. 5 經(jīng)過硅膠和SephadexLH-20 柱色譜，得到化合物3(12 mg).Fr. 8經(jīng)過硅膠用50%水洗脫，并采用反相MCI柱色譜后再用V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(H2O)=(6∶2∶0.1→6.5∶3.5∶0.1)梯度洗脫，得到化合物4(30 mg)和化合物5(100 mg).

1.4 抗氧化實驗

采用自由基清除反應——DPPH實驗評價化合物的抗氧化活性.將化合物溶解于二甲基亞砜(DMSO)中備用，將稀釋好的樣品加入96孔板中，每孔5 μL，之后加入用甲醇稀釋的0.025 g/L的DPPH溶液，每孔195 μL，混勻后室溫反應20 min后用微孔板檢測器于515 nm波長下檢測吸收值.同時設(shè)置DMSO組為陰性對照，根據(jù)以下公式計算化合物清除自由基DPPH的百分有效率，再根據(jù)量效關(guān)系圖計算EC50(半數(shù)有效濃度)值.

其中NC為溶媒對照組；Sample為測試樣品組.

2 結(jié)構(gòu)鑒定

從油瓜中分離得到了5個化合物，其化學結(jié)構(gòu)(圖1)和光譜數(shù)據(jù)如下所示.其中化合物1、2、3為首次從該植物中分離得到.通過DPPH自由基清除反應對化合物1、2、3的抗氧化能力進行了測試，結(jié)果顯示化合物2和3具有一定的自由基清除能力，其對DPPH自由基清除的EC50值分別為0.54±0.10和1.45±0.33 mg/mL.

化合物1黃色片狀結(jié)晶.ESI-MS (m/z): 277 [M+Na]+(C15H10O4).1H NMR (500 MHz, CDCl3),δ:7.82(1H, dd,J= 10.5 Hz, 1.05 Hz, H-5), 7.61 (1H, br s, H-6), 7.60 (1H, s, H-4), 7.29 (1H, dd,J= 8.4 Hz, 1.05 Hz, H-7), 7.05 (1H, br s, H-2).13C NMR(125 MHz, CDCl3)δ: 192.5 (C-9), 182.0 (C-10), 162.7 (C-8), 162.4 (C-1)，149.3 (C-3), 136.9 (C-6), 133.6 (C-l0a), 133.2 (C-4a), 124.5 (C-2), 124.3 (C-7), 121.3 (C-4), 119.9 (C-5), 115.8 (C-8a), 113.7 (C-9a), 22.8 (C-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻[6]對照基本一致，故鑒定化合物為大黃酚(chrysophanol).

化合物2橙黃色針狀結(jié)晶.ESI-MS (m/z): 283 [M+Na]+(C16H12O5).1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ:12.31 (1 H,s, OH-1), 12.12 (1 H, s,OH-11), 7.61 (1 H, d,J= 1.2 Hz, H-4), 7.35 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-5), 7.07 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-7), 3.90 (3H, s, CH3-9), 2.44 (3H, s, CH3-3).13C NMR(125 MHz, CDCl3),δ:190.8 (C-9), 182.0 (C-10), 166.5 (C-6), 165.2 (C-8), 162.5 (C-1), 148.5 (C-3), 135.2 (C-l0a), 133.2 (C-4a), 124.5 (C-2), 121.3 (C-4), 113.7 (C-9a), 110.2 (C-8a), 108.2 (C-S), 106.8 (C-7), 56.1 (C-OCH3), 22.2 (C-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻[7]對照基本一致，故鑒定化合物為大黃素甲醚(physcion).

化合物3針狀晶體.13C NMR(125 MHz, D2O),δ: 26.2 (C-1), 56.5 (C-2), 105.8 (C-3), (C-4), 128.9 (C-5), 139.7 (C-6), 146.7 (C-7).以上數(shù)據(jù)文獻[8]對照基本一致，故鑒定化合物為(2,6-Dimethoxy-4-methylphenol).

化合物4白色結(jié)晶.13C NMR(125 MHz, D2O),δ: 103.6 (C-1), 92.1 (C-2), 81.3 (C-3), 76.2 (C-4), 73.9 (C-5), 72.5 (C-6), 72.3 (C-7), 71.0 (C-8), 69.1 (C-9), 62.3 (C-10), 61.2 (C-11), 60.0 (C-12).以上數(shù)據(jù)文獻[9]對照基本一致，故鑒定化合物為蔗糖(sucrose).

化合物5白色針晶，Molish反應呈陽性，1H NMR (500 MHz, D2O),δ: 5.43 (1H, d,J= 3.6,1-H), 3.45～3.76 (m, H-2～6).13C NMR(125 MHz, D2O,δ:93.9 (C-1), 74.7 (C-30), 73.7 (C-5), 72.8 (C-2), 71.8 (C-4), 62.6 (C-6).以上數(shù)據(jù)與文獻[10]對照基本一致故鑒定化合物為葡萄糖(glucose).