• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC-DAD-Q-TOF-MS在線篩選鑒定牛蒡中的抗氧化成分

    2019-05-21 11:59:24鄭振佳張瑞凌張敏敏邱志常喬旭光
    食品科學(xué) 2019年8期
    關(guān)鍵詞:奎寧牛蒡甲酯

    鄭振佳,張瑞凌,張敏敏,邱志常,張 斌,喬旭光,*

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗室,山東 泰安 271018;2.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院),山東省分析測試中心,山東省中藥質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室,山東 濟(jì)南 250014)

    牛蒡(Arctium lappa L.)為菊科兩年生草本植物,《本草綱目》記載其“久服輕身耐老”[1],現(xiàn)代研究證明牛蒡具有抗衰老、降血脂、抗腫瘤、降血糖等活性[2-4],對高血壓、糖尿病、動脈硬化等疾病具有治療作用[5-7]。牛蒡提取物具有很好的抗氧化作用,可以有效清除自由基、提高超氧化物歧化酶活性、抑制脂質(zhì)體和蛋白質(zhì)的氧化損傷并與VE形成協(xié)同作用增強(qiáng)抗氧化性[8-13]。牛蒡中具有抗氧化活性的化合物主要為咖啡??鼘幩犷惡忘S酮類化合物,其中咖啡??鼘幩犷惢衔锏膱蟮肋h(yuǎn)多于黃酮,是牛蒡中主要的次級代謝產(chǎn)物[14-17]??Х弱?鼘幩犷惢衔飳儆诳Х人岬难苌?,主要存在牛蒡乙酯相中,該化合物具有明顯的抗氧化作用[18-19],對氧化應(yīng)激引起的缺血性損傷、肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化和胰島素抵抗等癥狀具有明顯改善作用[20-23],是牛蒡中最重要的一類活性成分。先前的研究通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對牛蒡中該成分進(jìn)行分析[24-25],分析過程僅依據(jù)分子質(zhì)量進(jìn)行推斷,并未經(jīng)對照品進(jìn)行驗證,因此鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性有待于進(jìn)一步考證。

    基于1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)模型建立的高效液相色譜-二極管陣列檢測器-質(zhì)譜法已成為天然產(chǎn)物研究中抗氧化活性成分篩選的重要方法之一[26-29],樣品中的抗氧化活性成分與DPPH-甲醇溶液反應(yīng)后進(jìn)入紫外檢測器,由于自由基的清除導(dǎo)致在517 nm波長處在線檢測形成負(fù)峰。通過DPPH模型中出現(xiàn)的負(fù)吸收峰結(jié)合化合物的紫外吸收和精準(zhǔn)分子質(zhì)量,可以快速、定向和準(zhǔn)確鑒定樣品中的抗氧化成分。

    本研究以牛蒡提取物的乙酸乙酯相為研究對象,基于DPPH篩選模型建立高效液相色譜-二極管陣列檢測器-串聯(lián)三重四極桿飛行時間質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-DAD-Q-TOF-MS)在線篩選鑒別自由基清除劑的方法對牛蒡中天然抗氧化活性成分進(jìn)行快速篩選和鑒定,為食品及中藥等復(fù)雜體系中抗氧化活性成分的篩選提供技術(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    牛蒡購于江蘇沛縣軼偉食品有限公司,經(jīng)山東省分析測試中心王曉研究員鑒定為菊科植物牛蒡(Arctium lappa L.)的根,品種為柳川理想。

    DPPH 美國Sigma公司;乙腈(色譜純) 瑞士Oceanpak公司;純凈水 娃哈哈集團(tuán)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    1260 HPLC儀(配置DAD)、G6520A Q-TOF-MS(配置電子電離源) 美國安捷倫公司。

    1.3 方法

    1.3.1 供試品溶液及DPPH-甲醇溶液制備

    牛蒡干燥粉碎后過80 目篩,稱取2.0 g牛蒡樣品,100 mL 50%乙醇溶液回流提取30 min,抽濾后低壓濃縮至無明顯醇味后用純水定容至10 mL,依次用3 倍體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,各萃取相蒸干,分別用50%乙腈溶液定容至2 mL,過0.45 μm有機(jī)濾膜,備用。

    準(zhǔn)確稱取DPPH標(biāo)準(zhǔn)品,配制成濃度為6×10-5mol/L甲醇溶液,置于4 ℃冰箱中避光保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。1.3.2 抗氧化成分在線篩選與鑒別

    圖 1 抗氧化成分在線篩選與鑒別流程圖Fig. 1 Flow chart of on-line screening for and identification of antioxidant compounds

    實(shí)驗流程見圖1。待測樣品經(jīng)HPLC-1分離通過經(jīng)分流閥分成2 部分,一部分進(jìn)入混合器,與HPLC-2泵入的DPPH-甲醇溶液混合反應(yīng)后進(jìn)入DAD,在517 nm波長處形成的負(fù)峰即為抗氧化成分;另一部分進(jìn)入DAD和MS儀,實(shí)現(xiàn)各成分的紫外吸收檢測以及各成分的在線質(zhì)譜分析。負(fù)峰色譜圖結(jié)合精準(zhǔn)的分子質(zhì)量信息與紫外吸收特征,實(shí)現(xiàn)牛蒡中抗氧化成分的在線快速篩選。

    1.3.3 儀器工作條件

    HPLC-1工作條件:色譜柱:Phenomenex Gemini-NX C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);乙腈(A)-0.1%甲酸溶液,梯度洗脫程序:0~7 min(15% A),7~8 min(15%~20% A),8~29 min(20% A),29~30 min(20%~25% A),30~50 min(25%~30% A);流速1 mL/min;檢測波長280 nm;進(jìn)樣量10 μL;柱溫25 ℃。樣品經(jīng)HPLC-1色譜柱后分流至DAD-Q-TOF-MS流速為0.3 mL/min,另一路液體流速為0.7 mL/min。

    HPLC-2工作條件:反應(yīng)器為PEEK盤管(10 m×0.254 mm);流動相為DPPH-甲醇溶液,流速0.5 mL/min,檢測波長517 nm。

    HPLC-1的正峰色譜圖和HPLC-2的負(fù)峰色譜圖由Agilent液相色譜化學(xué)工作站同時獲得。

    質(zhì)譜工作條件:分別采用電噴霧正、負(fù)離子模式;全掃描范圍m/z 100~1 000;毛細(xì)管電壓4.5 kV;霧化氣壓力35 psi;干燥氣流速10.0 L/min;干燥氣溫度325 ℃;裂解電壓100 V;錐孔電壓60 V。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 牛蒡抗氧化成分提取結(jié)果

    本實(shí)驗分別考察50%乙醇溶液超聲提取和回流提取2 種方式對牛蒡化學(xué)成分的提取效果,結(jié)果表明回流提取30 min的效果優(yōu)于200 W超聲提取1.5 h,故采用回流方式進(jìn)行提取。提取濃縮后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,通過HPLC對牛蒡的不同萃取部位分析比對,結(jié)果見圖2。石油醚相(圖2A)、乙酸乙酯相(圖2B)和正丁醇相(圖2C)差異較大,說明采用不同極性的溶劑進(jìn)行萃取富集的前處理過程初步實(shí)現(xiàn)牛蒡化學(xué)成分的分段富集與凈化。從圖2可以看出,乙酸乙酯相的HPLC圖與回流提取總樣最為接近,所以將乙酸乙酯相作為后續(xù)的分析對象。

    圖 2 牛蒡不同相液相色譜圖Fig. 2 Chromatograms of different solvent extracts of burdock

    2.2 HPLC條件優(yōu)化結(jié)果

    分別考察乙腈-0.1%甲酸溶液和甲醇-0.1%甲酸溶液2 種流動相對目標(biāo)物的分離效果,結(jié)果表明,在實(shí)現(xiàn)較好分離的目標(biāo)下,乙腈-0.1%甲酸溶液體系洗脫時間為50 min,甲醇-0.1%甲酸溶液體系洗脫時間為70 min,且前者的分離效果優(yōu)于后者。在同一HPLC條件和色譜柱規(guī)格(250 mm×4.6 mm,5 μm)下,分別考察Phenomenex Gemini-NX C18、YMC-Pack ODS-A、Waters Symmetry C18和Spax Amethyst C18-H四種不同色譜柱對于目標(biāo)物的分離效果。經(jīng)實(shí)驗比較,Phenomenex Gemini-NX C18色譜柱的分離效果最佳,因此選取該色譜柱作為分析色譜柱,樣品HPLC分析結(jié)果見圖3。

    圖 3 牛蒡提取物HPLC圖Fig. 3 HPLC of burdock extract

    2.3 抗氧化活性成分在線篩選結(jié)果

    圖 4 牛蒡提取物在線清除自由基HPLC圖Fig. 4 HPLC chromatograms of burdock extract and on-line screening for free radical scavengers

    DPPH濃度是影響篩選靈敏度的一個重要因素,信噪比隨著濃度的增加而相應(yīng)增加,同時基線噪音和基線波動也隨之增大。研究分別考察2×10-4、1×10-5mol/L和6×10-5mol/L三個濃度下的篩選效果,結(jié)果表明DPPH-甲醇溶液濃度為6×10-5mol/L時的篩選效果最佳,因此選取該濃度作為篩選濃度,自由基清除劑篩選結(jié)果見圖4。

    2.4 紫外吸收情況考察結(jié)果

    利用DAD對樣品中峰面積相對含量在0.5%以上且具有抗氧化活性的化合物進(jìn)行全波長掃描,結(jié)果見表1。從全波長掃描結(jié)果來看,該樣品中具有抗氧化活性化合物的紫外吸收情況具有高度相似性,主要成分的紫外吸收最大波長在216、240 nm和320 nm附近,初步判斷為結(jié)構(gòu)類似物,且樣品中大多數(shù)化合物在300 nm波長處有特征肩峰,判定為咖啡酰奎寧酸類系列化合物。

    表 1 牛蒡提取物的HPLC-DAD-Q-TOF-MS測量結(jié)果Table 1 Analytical data from HPLC-DAD-Q-TOF-MS for burdock extract

    2.5 MS條件優(yōu)化結(jié)果

    分別考察正離子和負(fù)離子模式下待測樣品的總離子流圖,由圖5可以看出,待測組分在負(fù)離子模式下響應(yīng)值優(yōu)于正離子模式,雜質(zhì)的干擾程度低于正離子模式,因此選取負(fù)離子模式為質(zhì)譜檢測條件。

    圖 5 正(A)、負(fù)(B)離子模式下總離子流圖Fig. 5 Total ion current chromatograms of burdock extract in the positive (A) and negative ion (B) modes

    2.6 抗氧化成分的Q-TOF-MS鑒別

    在優(yōu)化HPLC條件下,采用Q-TOF-MS技術(shù)對目標(biāo)化合物進(jìn)行鑒別。根據(jù)獲得化合物的精確分子質(zhì)量信息與DAD獲得的紫外吸收信息,對相對含量0.5%以上的咖啡酸及其衍生物進(jìn)行鑒別,結(jié)果見表1。參考文獻(xiàn)[30-32]并與山東省分析測試中心國家天然產(chǎn)物參比實(shí)驗室自有的綠原酸、咖啡酸、1,5-O-二咖啡酰奎寧酸、綠原酸甲酯、3,4-O-二咖啡??鼘幩?、3,5-O-二咖啡??鼘幩?、1,3-O-二咖啡??鼘幩?、4,5-O-二咖啡??鼘幩帷?,5-O-二咖啡酰-3-O-琥珀??鼘幩峁? 種對照品進(jìn)行比對,對照品的色譜峰分別對應(yīng)圖3中的峰1、2、3、4、6、7、8、11和峰12共9 個化合物。峰5、9和峰10分子質(zhì)量相同,根據(jù)極性大小和二咖啡酰奎寧酸的出峰順序推斷峰5為1,5-O-二咖啡酰-3-O-蘋果??鼘幩幔?為3,4-O-二咖啡酰-3-O-蘋果??鼘幩幔?0為3,5-O-二咖啡酰-3-O-蘋果??鼘幩帷7?3分子質(zhì)量與峰5、峰9和峰10相差14,相差的基團(tuán)為—CH2—,根據(jù)參考文獻(xiàn)[33]和已發(fā)現(xiàn)化合物的信息推斷峰13為1,5-O-二咖啡酰-3-O-蘋果酸甲酯奎寧酸。峰15為二咖啡??鼘幩峒柞ィY選范圍為1,3-O-二咖啡??鼘幩峒柞?、3,4-O-二咖啡??鼘幩峒柞?、3,5-O-二咖啡??鼘幩峒柞ズ?,5-O-二咖啡??鼘幩峒柞ブ械囊环N,考慮到成鍵的順序和甲酯基團(tuán)引起的極性差異,推斷該化合物為3,4-O-二咖啡??鼘幩峒柞?。峰14和峰16相對分子質(zhì)量相差14,相差的基團(tuán)為—CH2—,從已發(fā)現(xiàn)琥珀酸在類似結(jié)構(gòu)中的取代情況推斷峰14為1,5-O-二咖啡酰-4-O-琥珀??鼘幩?,峰16為1,5-O-二咖啡酰-4-O-琥珀酰甲酯奎寧酸。峰17為三咖啡酰-奎寧酸乙酯,峰18、19分別為三咖啡酰-蘋果??鼘幩岷腿Х弱?琥珀??鼘幩岬耐之悩?gòu)體,由于三咖啡酰-奎寧酸化合物目前發(fā)現(xiàn)有1,3,5-O-三咖啡??鼘幩?、1,4,5-O-三咖啡??鼘幩岷?,4,5-O-三咖啡??鼘幩? 種,結(jié)構(gòu)中可結(jié)合蘋果酸和琥珀酸的羥基較多,難以確定具體結(jié)合位點(diǎn),因此峰17~19只能歸屬到三咖啡??鼘幩犷惢衔镅苌锏姆懂?。

    3 結(jié) 論

    本研究建立在線篩選鑒定抗氧化活性成分方法,實(shí)現(xiàn)牛蒡乙酸乙酯相中抗氧化活性成分的在線篩選與鑒定,結(jié)果顯示牛蒡中重要的抗氧化成分主要為咖啡??鼘幩犷惢衔?。本方法快速、準(zhǔn)確,與紫外分光光度計法和傳統(tǒng)天然產(chǎn)物中復(fù)雜成分的分離與鑒別模式相比,具有更高的篩選效率;與前期的MS鑒定方法比較,新增活性篩查以及采用部分對照品進(jìn)行確證,從而保證結(jié)果更加準(zhǔn)確。由于咖啡酰奎寧酸類化合物結(jié)構(gòu)類似且存在多種同分異構(gòu)體,在無對照品的前提下,即使通過多級質(zhì)譜也難以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)鑒定。對于未明確具體名稱的咖啡酰奎寧酸類化合物,需在后期研究中通過多種色譜技術(shù)制備獲得高純度單體,結(jié)合核磁共振二維譜實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)確證。

    猜你喜歡
    奎寧牛蒡甲酯
    牛蒡花開
    離子交換樹脂催化合成苯甲酸甲酯
    云南化工(2020年11期)2021-01-14 00:50:52
    基于LC-MS/MS的咖啡??鼘幩岙悩?gòu)體鑒別方法研究
    光學(xué)純(R)-3-奎寧醇制備技術(shù)研究進(jìn)展
    帶孕尋侶:放縱的愛情喲,你別跑!
    牛蒡子中牛蒡苷測定方法的優(yōu)化
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:49
    K/γ-Al2O3催化丙酸甲酯合成甲基丙烯酸甲酯
    卡前列甲酯栓聯(lián)合鈣劑預(yù)防及治療產(chǎn)后出血的效果觀察
    超導(dǎo)可視聯(lián)合卡前列甲酯用于早早孕無痛人流術(shù)的效果觀察
    買牛蒡,挑一元硬幣粗的
    中老年健康(2014年6期)2014-05-30 22:10:35
    免费观看在线日韩| 性少妇av在线| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 人妻人人澡人人爽人人| 午夜日韩欧美国产| 99久久综合免费| 午夜老司机福利剧场| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费看av在线观看网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美国免费a级毛片| 伊人久久国产一区二区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品国产a三级三级三级| 国产免费又黄又爽又色| 熟女av电影| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产黄色免费在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产男人的电影天堂91| 性少妇av在线| 久久久欧美国产精品| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 看免费av毛片| a级毛片在线看网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| av一本久久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产片内射在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品第一国产精品| 性色avwww在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美精品亚洲一区二区| 九九爱精品视频在线观看| 青春草视频在线免费观看| 91精品三级在线观看| 欧美激情高清一区二区三区 | 另类精品久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 久久青草综合色| 春色校园在线视频观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲三级黄色毛片| 欧美日本中文国产一区发布| 国产免费福利视频在线观看| 制服诱惑二区| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲色图综合在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产一区二区 视频在线| 美女福利国产在线| 国产片特级美女逼逼视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲精品久久午夜乱码| 最近最新中文字幕免费大全7| 午夜日本视频在线| 国产精品国产三级专区第一集| 男女啪啪激烈高潮av片| 成人毛片a级毛片在线播放| 熟女电影av网| 人成视频在线观看免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕制服av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久精品夜色国产| 国产成人欧美| 高清在线视频一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美av亚洲av综合av国产av | 久久97久久精品| 国产av国产精品国产| 欧美中文综合在线视频| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜福利网站1000一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 制服丝袜香蕉在线| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 丰满迷人的少妇在线观看| 伦理电影免费视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 97在线人人人人妻| 老熟女久久久| 午夜福利乱码中文字幕| 高清视频免费观看一区二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一本色道久久久久久精品综合| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久ye,这里只有精品| 亚洲色图综合在线观看| 一本大道久久a久久精品| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品一国产av| 波野结衣二区三区在线| 免费黄频网站在线观看国产| 午夜激情av网站| 亚洲欧美清纯卡通| www.精华液| 欧美日韩精品成人综合77777| 日本av免费视频播放| 亚洲人成电影观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品 国内视频| 最新的欧美精品一区二区| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日本vs欧美在线观看视频| 99香蕉大伊视频| 日日撸夜夜添| 高清av免费在线| 国产成人精品无人区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 午夜福利网站1000一区二区三区| av线在线观看网站| 亚洲精品第二区| av国产精品久久久久影院| 国精品久久久久久国模美| 视频区图区小说| a级毛片在线看网站| 永久免费av网站大全| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 90打野战视频偷拍视频| 在线天堂中文资源库| 伦理电影大哥的女人| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲男人天堂网一区| 岛国毛片在线播放| 久久久久久久久久久免费av| 欧美+日韩+精品| 日本91视频免费播放| 男女无遮挡免费网站观看| 国产不卡av网站在线观看| 久久久国产精品麻豆| 1024视频免费在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品免费大片| 色播在线永久视频| 国产日韩欧美视频二区| 免费黄网站久久成人精品| 少妇的逼水好多| 国产一区二区激情短视频 | 精品国产国语对白av| 99久久综合免费| 中文字幕av电影在线播放| www日本在线高清视频| 蜜桃国产av成人99| 老熟女久久久| 超碰97精品在线观看| 韩国精品一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产成人欧美| 久久久欧美国产精品| 午夜福利在线免费观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 人人妻人人澡人人看| 久久午夜综合久久蜜桃| 丝袜美足系列| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 国产不卡av网站在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品久久精品一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品免费大片| 国产麻豆69| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜av观看不卡| 欧美另类一区| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品国产综合久久久| 国产精品三级大全| 午夜福利视频精品| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产成人精品在线电影| 99久久中文字幕三级久久日本| 又黄又粗又硬又大视频| 99热全是精品| 91精品国产国语对白视频| 七月丁香在线播放| 日韩伦理黄色片| 日本午夜av视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 又大又黄又爽视频免费| 国产亚洲欧美精品永久| 各种免费的搞黄视频| av免费在线看不卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 日日爽夜夜爽网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 国产乱人偷精品视频| 天天影视国产精品| 永久网站在线| 性少妇av在线| 91精品国产国语对白视频| 亚洲一区中文字幕在线| 青青草视频在线视频观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产一级毛片在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久99一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 综合色丁香网| av国产久精品久网站免费入址| 久久这里只有精品19| 欧美日韩一级在线毛片| 精品久久蜜臀av无| av国产精品久久久久影院| 国产老妇伦熟女老妇高清| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲第一av免费看| 亚洲av电影在线进入| 欧美日韩一级在线毛片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲伊人色综图| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产成人免费观看mmmm| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久久人人人人人| 99国产精品免费福利视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日韩三级伦理在线观看| 午夜91福利影院| av线在线观看网站| 亚洲久久久国产精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久99精品国语久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 高清不卡的av网站| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99re6热这里在线精品视频| 国产男女超爽视频在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 一区在线观看完整版| 一级毛片 在线播放| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久精品精品| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品久久久久久久久免| 午夜福利乱码中文字幕| 国产av精品麻豆| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 2018国产大陆天天弄谢| 国产综合精华液| 亚洲av免费高清在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲经典国产精华液单| 午夜av观看不卡| 国产精品免费大片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产日韩欧美视频二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 丝袜人妻中文字幕| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲精品一区蜜桃| 精品国产露脸久久av麻豆| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 黄色毛片三级朝国网站| 又黄又粗又硬又大视频| 男人舔女人的私密视频| 免费大片黄手机在线观看| 69精品国产乱码久久久| 我的亚洲天堂| 久久精品久久久久久久性| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美激情高清一区二区三区 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 搡老乐熟女国产| 国产日韩欧美视频二区| 国产又色又爽无遮挡免| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一区二区三区乱码不卡18| 男女国产视频网站| xxx大片免费视频| www日本在线高清视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久青草综合色| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久鲁丝午夜福利片| 哪个播放器可以免费观看大片| 综合色丁香网| 婷婷成人精品国产| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 最新的欧美精品一区二区| 黄片播放在线免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 老司机亚洲免费影院| 中文字幕制服av| 国产色婷婷99| 久久女婷五月综合色啪小说| 大话2 男鬼变身卡| 中文天堂在线官网| 一级片免费观看大全| 日本av免费视频播放| 久久精品亚洲av国产电影网| 欧美少妇被猛烈插入视频| xxxhd国产人妻xxx| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美+日韩+精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久影院123| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产成人精品婷婷| 99热全是精品| 亚洲,欧美,日韩| 最新中文字幕久久久久| 午夜福利视频精品| tube8黄色片| 久久久亚洲精品成人影院| 丰满迷人的少妇在线观看| 婷婷成人精品国产| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲内射少妇av| 激情视频va一区二区三区| 国产在线免费精品| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产在视频线精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 天堂中文最新版在线下载| 高清av免费在线| 国产精品熟女久久久久浪| 午夜福利乱码中文字幕| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产精品成人久久小说| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久久国产精品麻豆| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲色图综合在线观看| 久久久精品区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品成人在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久99精品国语久久久| 国产激情久久老熟女| 99热全是精品| 99国产精品免费福利视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 91在线精品国自产拍蜜月| 999精品在线视频| 欧美+日韩+精品| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久久精品区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 日韩三级伦理在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 日本黄色日本黄色录像| 国产一区二区在线观看av| 一本大道久久a久久精品| 日日啪夜夜爽| 国产成人精品久久二区二区91 | 国产高清不卡午夜福利| 精品一区二区免费观看| 色播在线永久视频| 十八禁高潮呻吟视频| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲综合色惰| 亚洲综合精品二区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 蜜桃在线观看..| 五月伊人婷婷丁香| 免费观看性生交大片5| 欧美成人午夜精品| av有码第一页| av网站在线播放免费| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲内射少妇av| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 制服人妻中文乱码| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲欧美精品自产自拍| 天美传媒精品一区二区| 久久久久久人人人人人| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲av男天堂| 97精品久久久久久久久久精品| 国产精品久久久av美女十八| 国产爽快片一区二区三区| 久久久欧美国产精品| 日本av免费视频播放| 人人澡人人妻人| 成人二区视频| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美bdsm另类| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品国产av在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | av在线老鸭窝| 国产高清不卡午夜福利| 男人舔女人的私密视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧洲日产国产| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| h视频一区二区三区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 飞空精品影院首页| 宅男免费午夜| 国产 一区精品| 我的亚洲天堂| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 少妇熟女欧美另类| 亚洲成色77777| 国产精品 欧美亚洲| 成年av动漫网址| 国产福利在线免费观看视频| 久久综合国产亚洲精品| 日本欧美视频一区| 精品国产露脸久久av麻豆| 看免费av毛片| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久久久久伊人网av| 国产乱来视频区| 成人毛片a级毛片在线播放| 人妻人人澡人人爽人人| 久久久久精品人妻al黑| 高清av免费在线| 高清在线视频一区二区三区| 香蕉国产在线看| 老司机影院成人| 国产av精品麻豆| 国精品久久久久久国模美| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人精品福利久久| 高清av免费在线| 久久久久久人妻| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品国产av成人精品| 岛国毛片在线播放| 亚洲内射少妇av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 婷婷色综合大香蕉| a级毛片黄视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美精品av麻豆av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| av免费观看日本| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 一级,二级,三级黄色视频| 91精品国产国语对白视频| 欧美人与善性xxx| 一边亲一边摸免费视频| www.自偷自拍.com| 欧美bdsm另类| 超碰97精品在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 超碰成人久久| 女人久久www免费人成看片| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 女人精品久久久久毛片| 老熟女久久久| 最新中文字幕久久久久| 飞空精品影院首页| 国产精品无大码| 九色亚洲精品在线播放| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 永久免费av网站大全| 精品国产一区二区久久| 亚洲国产欧美网| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线 av 中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 三级国产精品片| 亚洲熟女精品中文字幕| 九九爱精品视频在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 在线观看人妻少妇| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av | 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲精品在线美女| 丝袜人妻中文字幕| 国产成人欧美| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲第一av免费看| 国产高清国产精品国产三级| 欧美激情 高清一区二区三区| 天堂8中文在线网| 大香蕉久久网| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲少妇的诱惑av| 日本vs欧美在线观看视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产一区二区激情短视频 | 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区三区av在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 午夜激情av网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 九色亚洲精品在线播放| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产成人一精品久久久| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产精品免费视频内射| 成人毛片a级毛片在线播放| videossex国产| 日本黄色日本黄色录像| 中国国产av一级| 国产不卡av网站在线观看| 久久久久视频综合| 久久久a久久爽久久v久久| av片东京热男人的天堂| 成年av动漫网址| 美女主播在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品 国内视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 99久久综合免费| 90打野战视频偷拍视频| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品.久久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 一级片'在线观看视频| 青春草视频在线免费观看| 中文字幕色久视频| 乱人伦中国视频| 欧美日韩一级在线毛片| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品成人在线| 欧美日韩亚洲高清精品| av免费观看日本| 黄色 视频免费看| 哪个播放器可以免费观看大片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产片特级美女逼逼视频| 制服丝袜香蕉在线| 免费日韩欧美在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩中字成人| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久国产一区二区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 免费观看性生交大片5| 久久久国产精品麻豆| 在线观看国产h片| tube8黄色片| 亚洲av.av天堂| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产亚洲欧美精品永久| 秋霞伦理黄片| 欧美中文综合在线视频| 亚洲少妇的诱惑av|