癲癇病人血清腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達及臨床意義

癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，我國癲癇病人已超過900萬，同時每年新增加癲癇病人約40萬例，現(xiàn)階段癲癇的患病率位居神經(jīng)科第二位，成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的一大頑疾[1]。癲癇臨床癥狀多種多樣，可分為部分性發(fā)作、全面性發(fā)作和不能分類的發(fā)作，主要表現(xiàn)為發(fā)作性運動、感覺、自主神經(jīng)及認知等障礙[2]。癲癇的發(fā)病機制目前尚不清楚，中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制失衡可能是引發(fā)癲癇的關(guān)鍵，主要以大腦神經(jīng)元突發(fā)性異常同步放電為表現(xiàn)，這一放電過程常伴隨病人的認知功能損害，但目前對于癲癇所致的認知功能障礙機制并不明確。

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是一種具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的蛋白質(zhì)[3]。BDNF及其受體廣泛分布于全身多系統(tǒng)，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、骨和軟骨組織等，主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的海馬和皮質(zhì)。BDNF在人體大腦內(nèi)部合成特殊蛋白質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)擴散開來，并有效地促進神經(jīng)元的發(fā)育和成長，能夠快速修復處于損傷或臨界死亡的病態(tài)神經(jīng)元，使其再生繼而重新分化，也能夠為周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元進行正常生理功能提供支持。本研究通過對癲癇病人進行血清BDNF水平檢測，探討其在癲癇病人伴隨認知功能障礙診斷中的臨床應用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 抽取2016年1月—2017年1月我院神經(jīng)內(nèi)科門診50例癲癇病人作為研究對象。入組標準：癲癇診斷明確[2]；頭部影像檢測無異常結(jié)構(gòu)；神經(jīng)系統(tǒng)無陽性體征；入院時意識清晰病人，并自愿參與本次調(diào)查研究。排除嚴重器質(zhì)性疾病病人。另選取同期于我院門診體檢的30名體檢者作為正常對照組。研究組：男30例，女20例，年齡20～70(45±4)歲；入院時每月發(fā)病4次以上，其中全面性發(fā)作(全面性發(fā)作組)病人29例，部分性發(fā)作(部分性發(fā)作組)病人21例；受教育程度：?？萍耙陨?8例，高中12例。正常對照組：男18名，女12名；年齡22～72(47±4)歲；無神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾??；受教育程度：?？埔陨?9例，高中11例。兩組性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究得到我院醫(yī)學倫理委員會的批準。

1.2 診斷方法

1.2.1 血清BDNF水平檢測 抽取研究對象肘前靜脈血4 mL放入干燥真空管中，將血樣放在4 ℃環(huán)境中1 h，然后取出血樣進行高速離心11 min，取出血清放入-70 ℃環(huán)境中冷凍，在檢測前防止重復冷凍。采用ELLSA法(BDNF酶聯(lián)免疫分析試劑盒)測定血清BDNF的質(zhì)量濃度，應用抗人BDNF抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人BDNF會與包被抗體結(jié)合，游離

的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標記的抗人BDNF抗體?？谷薆DNF抗體與結(jié)合在包被抗體上的人BDNF結(jié)合，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450 nm波長處測OD值， BDNF濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中BDNF的濃度。

1.2.2 認知功能 采用簡易智力狀態(tài)檢查量表(Mini-mental State Examination，MMSE)[4]進行評估。認知功能障礙的診斷主要根據(jù)病史及出現(xiàn)精神癥狀持續(xù)時間的臨床表現(xiàn)。美國精神病學會1987版和中國神經(jīng)精神病診斷標準均有相同描述：注意、記憶、定向、知覺、精神運動性行為和睡眠障礙等短暫的器質(zhì)性腦綜合征其特點是晝輕夜重。根據(jù)病情程度判定，輕度：輕度記憶損害，對指令反應功能障礙，輕度認知異常，中度：較嚴重的記憶缺失，健忘綜合征；重度：出現(xiàn)嚴重的記憶損害、癡呆、喪失判斷和語言概括能力及人格的改變。

1.3 評定指標及標準 對比研究組和正常對照組及全面性發(fā)作組和部分性發(fā)作組血清BDNF水平、MMSE分值。評分標準：MMSE總分為30分，17分以下為文盲程度，17～<20分為小學文化程度，20～24分為中學及以上文化程度，分界線以下為認知功能缺損。

2 結(jié) 果

2.1 研究組和正常對照組血清BDNF水平及MMSE分值比較 與正常對照組相比，研究組血清BDNF水平及MMSE分值均顯著較低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1兩組血清BDNF水平及MMSE分值比較(±s)

2.2 不同臨床表現(xiàn)亞組間血清BDNF水平及MMSE分值比較 單因素方差分析顯示，各組間血清BDNF水平及MMSE分值差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。組間兩兩比較結(jié)果表明，正常對照組血清BDNF水平及MMSE均顯著高于其他兩組(P<0.05)，而部分性發(fā)作組各指標高于全面性發(fā)作組(P<0.05)。詳見表2。

表2不同組別血清BDNF水平及MMSE分值比較(±s)

與正常對照組比較，1)P<0.05；與部分發(fā)作性組比較，2)P<0.05

2.3 癲癇病人血清BDNF水平與MMSE分值的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，癲癇病人血清BDNF水平與MMSE分值存在顯著正相關(guān)(r=0.872，P<0.001)。

3 討 論

癲癇主要是神經(jīng)元異常放電導致神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂的疾病，發(fā)病機制并不十分明確，對癲癇病人盡早診斷及治療可促進病情恢復。經(jīng)過有效治療多數(shù)病人病情可以得到控制，其中超過50%的病人經(jīng)治療后可回歸正常生活[5]。目前，受臨床早期診斷困擾，尤其是對于癲癇伴隨認知功能障礙的早期臨床診斷較缺乏，往往在病人出現(xiàn)明確的精神行為異常時已錯過了最佳的治療時機，最終導致病人出現(xiàn)嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，且生活質(zhì)量低下。

BDNF是20世紀80年代由德國神經(jīng)生物學家從豬腦中分離出來的小分子蛋白質(zhì)，由于豬、小鼠和人類具有同樣的BDNF氨基酸編碼序列，還和神經(jīng)生長因子(NGF)序列極其類似，所以也被納入神經(jīng)生長因子家族成員中[6]。以往的醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，BDNF是調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的關(guān)鍵物質(zhì)，可利用靶源性、自分泌、旁分泌方式與神經(jīng)元細胞膜表面受體酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)結(jié)合來激發(fā)神經(jīng)元的發(fā)育、成熟及功能性，并在整個過程進行調(diào)控[7]。因此，對于BDNF-TrkB的探討和分析開始成為神經(jīng)科學的重要研究方向。

BDNF主要產(chǎn)生于大腦中，并為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元提供營養(yǎng)支持，其在海馬體和皮質(zhì)儲存量較高。BDNF在神經(jīng)元的整個分化過程起到了積極的推動作用，而且還能使衰敗的神經(jīng)元逐漸恢復起來，能夠保護神經(jīng)元免受迫害和凋亡，也能促使受傷的神經(jīng)元重生繼而分化；BDNF可以促進神經(jīng)生長，尤其是海馬的神經(jīng)生長，可維護、促進多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)神經(jīng)元的快速成長[8]。通過對小鼠的研究可見，患有癲癇小鼠的腦組織中 BDNF含量升高，并且 BDNF可穿過破損的腦組織，流入到中樞和外周血中進行表達[9]。本研究結(jié)果顯示，研究組血清BDNF水平和MMSE評分均顯著低于正常對照組，且血清BDNF水平和MMSE分值存在較強的正相關(guān)性。這提示，當血清BDNF的水平開始降低時，MMSE的分值也會隨之減少，同時病人的認知功能損傷程度越高，這意味著由癲癇導致認知功能損害過程中，BDNF的表達變化極其明顯。其中原因可能為：BDNF是一種具有認知功能的神經(jīng)營養(yǎng)因子，在成年期中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的多個腦功能區(qū)進行調(diào)節(jié)和重塑，通過使受損傷后神經(jīng)元再生可提升記憶功能和認知功能[10]。

本研究結(jié)果顯示，全面性發(fā)作癲癇病人血清BDNF水平和MMSE分值均比部分性發(fā)作癲癇病人低，提示部分性發(fā)作的癲癇病人比全面性發(fā)作癲癇病人的神經(jīng)元損傷更重，認知水平更低。不同發(fā)作類型間癲癇病人認知功能的程度也存在差異，而全面性發(fā)作病人的認知功能障礙程度更嚴重。檢測BDNF的水平變化在癲癇病理生理機制中發(fā)揮著關(guān)鍵的效用，而且其恢復可能與抗癲癇治療有關(guān)，當前已有大量的醫(yī)學臨床研究證明了這一論斷[11]。BDNF能通過多種途徑調(diào)控神經(jīng)細胞的發(fā)生、生存、生長、分化和凋亡，并直接參與神經(jīng)突觸的可塑性和重構(gòu)，這可能是BDNF參與癲癇發(fā)病和治療的重要機制[12]。

癲癇病人血清BDNF水平降低可導致認知功能損害，但具體的病理機制還需要開展更深入的醫(yī)學研究進行證實。然而在癲癇早期控制BDNF水平變化防止其降低，可能會在很大程度上降低癲癇病人認知功能障礙的損害程度。

綜上所述，血清BDNF水平變化與癲癇病人認知功能障礙程度有關(guān)，可在一定程度上作為癲癇病人認知功能障礙程度的評判標準。