改良抗酸染色在早期結核診斷中的研究

徐加譽，樊春卉，廖子龍

（深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518081）

當前，早期結核疾病的診斷是目前臨床高度關注的熱點，隨著結核耐藥菌株出現(xiàn)、免疫抑制劑應用、艾滋病的蔓延，結核病的發(fā)病率有了顯著增高跡象，早期結核疾病臨床癥狀不典型，極易被誤診或者漏診，往往會導致患者錯過最佳的治療時間。故及早對結核疾病患者病情做出準確診斷，對于改善其預后意義重大[1,2]。在上述研究背景下，本文選定2016年11月-2018年11月本院檢驗科收集的150例結核標本進行研究，目的是為早期結核患者提供一種有效、科學的檢測方法。

1 資料與方法

1.1 基線資料 選取2016年11月-2018年11月本院檢驗科收集的150例結核標本，女性68例，男性82例，年齡在20歲-92歲，平均年齡為（56.62±5.14）歲；體質量在42 kg-88 kg，平均體質量為（65.25±5.14）kg；痰、支氣管灌洗液、胸腹水例數(shù)之比分別是28例、15例、48例、20例、39例。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 熒光定量PCR儀（型號：BIORAD；生產(chǎn)企業(yè)：濟南來寶醫(yī)療器械有限公司）、細胞涂片離心機（型號：CytoFuge2；產(chǎn)地：美國，StatSpin）、37oC水浴恒溫箱（型號：TF-HX-30C；生產(chǎn)企業(yè)：上海田楓實業(yè)有限公司）。

1.2.2 檢測方法

1.2.2.1 PCR檢測 采用熒光定量PCR儀，取3份單管單人份PCR反應管，直接加入2 μL陽性質控品、陰性質控品、處理后樣品，離心數(shù)秒，置入熒光定量PCR儀中擴增，擴增要求：2 min預變性（93oC）、45 s預變性（93oC）、120 s預變性（55oC），10個循環(huán)后，置于33oC的溫度中保溫，將反應管逐個置入熒光檢測儀中，45 s預變性（93oC）-120 s預變性（55oC），30個循環(huán)后，置于33oC的溫度中進行保溫處理。操作嚴格遵循相關標準進行。

1.2.2.2 傳統(tǒng)抗酸染色方法與改良抗酸染色方法：取鵬一LCT細胞制片（生產(chǎn)企業(yè)：深圳鵬一醫(yī)療有限公司），將苯酚堿性品紅液（貝索試劑技有限公司）滴入，置于微波中，低火8 min，以20%的硫酸水溶液分化，時間在1 min-5 min，Mayer蘇木素復染。操作嚴格遵循相關標準進行。

1.3 觀察指標與評價標準

1.3.1 PCR檢測陽性判定標準 有效實驗前提之下，PCR檢測AxPI-N陽性，如果PI-A＞AxPI-N，則說明實驗屬于灰度區(qū)，實驗應該重復1次，如果PCR檢測結果為AxPI-N，則說明為陽性，否則即為陰性[3,4]。

1.3.2 抗酸染色陽性標準 以Z-N（萋尼氏染色法）鏡檢評價結果，不間斷地觀察視野300個，未見抗酸抗菌則說明抗酸桿菌陰性?？顾釛U菌菌數(shù)：300個視野或抗酸桿菌/1條-8條抗酸桿菌陽性（4+）、（3+）、（2+）、1（+），則說明為抗酸桿菌陽性[5,6]。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 25.0軟件展開數(shù)據(jù)處理，計量資料以t檢驗；計數(shù)資料以卡方檢驗，P＜0.05為有明顯差異。

2 結果

2.1 傳統(tǒng)抗酸染色與改良抗酸染色結果對比 改良抗酸染色陽性率（41.33%）顯著高于傳統(tǒng)抗酸染色（36.36%）（P＜0.05），見表1。

2.2 PCR檢測法與傳統(tǒng)抗酸染色結果對比 PCR檢測法檢測陽性率（32.00%）與傳統(tǒng)抗酸染色檢測陽性率（36.36%）相比無明顯（P＞0.05），見表2。

2.3 PCR檢測法與改良抗酸染色結果對比 改良抗酸染色陽性率（41.33%）與PCR檢測法（32.00%）無差異（P＞0.05），見表3。

3 討論

近年來，在我國環(huán)境不斷惡化的背景下，結核病的發(fā)生率有了顯著增高跡象[7]。據(jù)不完全統(tǒng)計分析：我國結核病的發(fā)病率僅次于俄羅斯以及印度，且存在嚴重的耐藥性，對患者身體健康以及生命安全構成了巨大威脅[8,9]。在結核疾病的診斷中，細菌學檢測對生物級別安全的要求較高，檢測時間普遍較長，且在檢測結核抗體以及抗原方面效果較差[10]。PCR檢測特異性相對較高，可檢測到結核桿菌的存在，但敏感性較差，在結核桿菌檢測中基因的變異性相對較大，所需要的檢測時間較長，具有一定的局限性，故當前臨床對于結核桿菌檢測主要以抗酸染色檢測為主[11]。當前，在我國醫(yī)療技術不斷提升的背景下，結核病的死亡率明顯降低，但由于部分患者臨床癥狀缺乏特異性，確診時疾病基本發(fā)展到了晚期，往往錯過了最佳的治療時間，明顯增加了診療難度。在微創(chuàng)或者無創(chuàng)下胸腹水、穿刺組織液、尿、痰等液基細胞為結核病的診斷提供了理想的標本，具有分枝桿菌富集效果、經(jīng)濟快速制片、操作簡單等優(yōu)點，現(xiàn)已得到臨床高度認可與贊同[12,13]。

本研究結果顯示：改良抗酸染色陽性率顯著高于傳統(tǒng)抗酸染色（P＜0.05）；PCR檢測與傳統(tǒng)抗酸染色相比無差異（P＞0.05）；PCR檢測與改良抗酸染色相比無差異（P＞0.05）。說明改良抗酸染色在結核病診斷中具有較高的準確性、可靠性，可作為早期結核病患者理想的診斷方法。分析原因如下：改良抗酸染色具有操作簡單、經(jīng)濟適用、陽性率高等一系列優(yōu)點，改良抗酸染色方法改良主要體現(xiàn)在以下幾點：①前處理痰液標本，液化痰液標本，將包裹在痰液中的抗酸桿菌釋放出來，進行取材。②以玻璃離心法在玻片0.8 cm的位置將有形成分聚集起來，一次性完成集菌、沉降等操作，將標本中有形成分最大限度濃集[14]。③抗酸染色之前，采用聚已二醇辛基苯基醚（Triton-X100）破膜處理標本，將非離子型表面活性劑作為破膜劑，將細胞膜上的部分脂質溶解，提高細胞膜通透性，確保胞內菌體容易著色，替代染色中的加熱作用，簡化操作步驟[15]。④改良抗酸染色法一般在30 min內即可檢測完1個標本，具有經(jīng)濟實用、耗材花費低等優(yōu)點，對于農(nóng)村醫(yī)療資源可更好的利用。我國是一個經(jīng)濟發(fā)展中國家，將近50%的結核病人為農(nóng)村居民，醫(yī)療條件以及衛(wèi)生條件較差，因此對于大部分基層醫(yī)院等衛(wèi)生條件較差的醫(yī)療機構，改良抗酸染色檢測法是一種低成本、高陽性率、快速、簡單的檢測方法，值得大力推廣，給更多早期結核病患者帶來福音。

綜上所述，早期結核病診斷中采納改良抗酸染色檢測，顯著提高了陽性檢測率，可為臨床醫(yī)師制定治療方案提供了更加嚴謹、科學的參考依據(jù)，值得臨床信賴，并大力推廣。

表1 傳統(tǒng)抗酸染色與改良抗酸染色對比［n（%）］

表2 PCR檢測法與傳統(tǒng)抗酸染色對比［n（%）］

表3 PCR檢測法與改良抗酸染色對比［n（%）］