819份不同痰標(biāo)本來源分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果分析

陳世浩，袁奕武，王勇萍，林炳耀，梁曉晴

（佛山市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528000）

結(jié)核病迄今仍是全球重要的公共衛(wèi)生問題，盡管結(jié)核病治療已有許多進(jìn)展，但結(jié)核病患者對抗結(jié)核藥物耐藥問題已日漸突出，成為結(jié)核病控制面臨的最嚴(yán)峻問題。我國是全球22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核病患者例數(shù)居全球第二位，也是27個耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一[1]。在結(jié)核病控制工作中，通過實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)檢查診斷傳染性肺結(jié)核是全面監(jiān)督化療策略（DOTS）的要素之一，痰結(jié)核桿菌檢查對于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價(jià)防治效果具有重要意義[2]。分枝桿菌培養(yǎng)法靈敏度高于涂片法，可鑒定死菌與活菌，此外，分枝桿菌的分離培養(yǎng)也為菌種鑒定和藥物敏感性測定提供菌株，被譽(yù)為結(jié)核病診斷的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”[3]。由于佛山市各區(qū)結(jié)防機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室沒有開展痰分枝桿菌培養(yǎng)，從2013年1月開始對各區(qū)涂陽痰標(biāo)本集中收到佛山市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行痰分枝桿菌培養(yǎng)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2013年8月-2014年12月實(shí)驗(yàn)室共接收各區(qū)實(shí)驗(yàn)室耐多藥可疑患肺結(jié)核涂陽的痰標(biāo)本和本單位的門診及住院確診肺結(jié)核病人涂陽的痰標(biāo)本共819份，進(jìn)行分離培養(yǎng)。把819份涂陽痰標(biāo)本根據(jù)不同標(biāo)本來源時(shí)間分成兩組：A組12 h內(nèi)培養(yǎng)完成（住院肺結(jié)核病人，包括初治和復(fù)治），B組24 h-168 h培養(yǎng)完成（各區(qū)實(shí)驗(yàn)室耐多藥可凝患肺結(jié)核痰標(biāo)本和本單位門診肺結(jié)核病人，包括耐多藥可凝患肺結(jié)核、初治和復(fù)治）。

1.2 材料 染色液：萋尼抗酸染色液的配制按常規(guī)，培養(yǎng)基：L-J的配制按常規(guī)[2-4]。

1.3 方法 （1）痰標(biāo)本直接涂片鏡檢采用《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》規(guī)定的萋尼染色法，具體參考文獻(xiàn)[2]。（2）分枝桿菌分離培養(yǎng)檢查方法采用《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊》規(guī)定的分枝桿菌的分離培養(yǎng)簡單法，具體參考文獻(xiàn)[4]。（3）質(zhì)量控制：實(shí)驗(yàn)室通過廣東省結(jié)核病耐藥性監(jiān)測辦公室檢查驗(yàn)收，定期接受省參比實(shí)驗(yàn)室督導(dǎo)并參加國家參比實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控考核并通過，質(zhì)控菌株為MTB標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv（27294），來源于廣東省結(jié)核病控制中心結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有資料采用雙錄入方法錄入Access數(shù)據(jù)庫，Access設(shè)置自動核對提示，數(shù)據(jù)核對錄入無誤后采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 痰涂片鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果 臨床診斷的肺結(jié)核患者和耐多藥可疑肺結(jié)核患者的涂陽痰標(biāo)本819份，涂片結(jié)果分別：1條-8條占，1+占，2+占，3+占，4+占?？?19份痰涂片陽性標(biāo)本分離培養(yǎng)結(jié)果：分離培養(yǎng)陽性709份，占86.57%（709/819），培養(yǎng)陰性77份，占9.47%（77/819），培養(yǎng)污染33份，占4.03%（33/819）；A組460份痰涂片陽性標(biāo)本分離培養(yǎng)結(jié)果：分離培養(yǎng)陽性419份，占91.09%（419/460），培養(yǎng)陰性31份，占6.74%（31/460），培養(yǎng)污染10份，占2.17%（10/460），B組359痰涂片陽性標(biāo)本分離培養(yǎng)結(jié)果：分離培養(yǎng)陽性290份，占80.78%（290/359），培養(yǎng)陰性46份，占12.81%（46/359），培養(yǎng)污染23份，占6.41%（23/359）。見表1。

1.2 涂陽培陰與涂片結(jié)果分布 總涂陽培陰77份痰標(biāo)本中：1條-8條23份占29.87%（23/77），1+42份占54.54%（42/77），2+10份占12.98%（10/77），3+1份占1.29%（1/77），4+1份占1.29%（1/77），A組涂陽培陰31份痰標(biāo)本中：1條-8條10份32.25%（10/31），1+17份占 54.83%（17/31），2+4份占12.90%（4/31），3+0份占0%（0/31），4+0份占0%（0/31），B組涂陽培陰46份痰標(biāo)本中：1條-8條13份占28.26%（13/46），1+25份占54.34%（25/46），2+6份占13.04%（6/46），3+1份占2.17%（1/46），4+1份占2.17%（1/46）。見表2。

3 討論

對臨床診斷的肺結(jié)核患者和耐多藥可疑肺結(jié)核患者涂陽標(biāo)本819份培養(yǎng)結(jié)果分析顯示，A組涂陽培陰率6.74%（31/460），明顯低于對于未治療的患者，符合一般涂陽培陰率不超過10%的有關(guān)報(bào)道[5]。B組涂陽培陰率12.81%（46/358），高于對于未治療的患者，符合一般涂陽培陰率不超過10%的有關(guān)報(bào)道[4]。A組污染率2.17%（10/460），明顯低于使用4%氫氧化鈉簡單法的污染率不超過5%的有關(guān)報(bào)道[6,7]。分析目前B組比A組患者痰標(biāo)本出現(xiàn)涂陽培陰率和污染率高原因：（1）B組標(biāo)本不能及時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，可能在保存過程結(jié)核分枝桿菌會發(fā)生自溶或死掉。（2）當(dāng)痰標(biāo)本不能及時(shí)處理時(shí)其他細(xì)菌就很容易生長，特別是真菌生長更快，如果痰中有真菌使用4%氫氧化鈉前處理是很難殺滅。

從表2看出總的涂陽培陰標(biāo)本涂片痰菌量97.4%（75/77）在2+以下，高于文獻(xiàn)涂陽培陰標(biāo)本涂陽痰菌量87.9%在2+以上[8]，A組涂陽培陰標(biāo)本涂片痰菌量分布1+＞8條＞2+，B組涂陽培陰標(biāo)本涂片痰菌量分布1+＞8條＞2+＞3+、4+，這些涂片結(jié)果看出：（1）涂陽培陰與痰菌量有一定的相關(guān)性；（2）有可能是由于結(jié)核藥物的作用使化療后患者痰標(biāo)本中的野生株活力低，表現(xiàn)為涂片陽性培養(yǎng)陰性和陽性生長時(shí)間延長；（3）結(jié)核分枝自然變異的影響[9]。

表1 涂陽培養(yǎng)結(jié)果分布

表2 涂陽培陰與涂片結(jié)果分布

綜合以上數(shù)據(jù)分析表明，應(yīng)在保證痰標(biāo)本質(zhì)量和培養(yǎng)基品質(zhì)的前提下，做到以下幾點(diǎn)：（1）嚴(yán)格規(guī)范無菌操作流程，嚴(yán)格掌握前處理液的濃度、與痰標(biāo)本的比例和接種量，降低污染率，提高培養(yǎng)陽性率；（2）對菌量少的痰標(biāo)本可以進(jìn)行離心法進(jìn)行培養(yǎng)，提高養(yǎng)陽性率；（3）對抗酸桿菌涂片陽性使用抗結(jié)核藥物治療的標(biāo)本，在進(jìn)行分枝桿菌分離培養(yǎng)檢查時(shí)，可適當(dāng)延長培養(yǎng)結(jié)果時(shí)間，有助于提高涂陽培率。