• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS前處理結(jié)合HPLC-Q-TOF/MS非靶向快速篩查涼茶中的非法添加物

    2019-05-14 07:58:54曾廣豐謝建軍王志元
    分析測(cè)試學(xué)報(bào) 2019年4期
    關(guān)鍵詞:添加物涼茶西藥

    曾廣豐,謝建軍*,王志元,陳 峰,李 菊

    (1.廣東檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,廣東 廣州 510623;2.廣東省動(dòng)植物與食品進(jìn)出口技術(shù)措施研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ,廣東 廣州 510623)

    涼茶是嶺南人民根據(jù)本地的水土和氣象等特性,在預(yù)防疾病與保健養(yǎng)生的過程中,用獨(dú)特的研制方法將天然中草藥熬制成一種具有清熱解毒、利津祛火、防治常病等功能的植物性飲料[1-2]。自2006年廣東涼茶成功列入首批國家級(jí)非物質(zhì)文化保護(hù)遺產(chǎn)以來,涼茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛,市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)激烈。一些不法商家受利益驅(qū)使,為增強(qiáng)療效,搶占市場(chǎng),在自制涼茶中非法添加解熱鎮(zhèn)痛和止咳西藥。消費(fèi)者飲用此類涼茶可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重肝腎毒性。

    目前涼茶中違禁化學(xué)藥物的檢測(cè)方法主要包括薄層色譜法[3-4]、高效液相色譜法[5-6]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7-8]等。上述涼茶中非法添加成分的分析方法是針對(duì)已知目標(biāo)成分的分析,需有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品。色譜類設(shè)備和基于四極桿型質(zhì)量分析器的質(zhì)譜由于靈敏度和分辨率低,只能用于數(shù)量不多的已知目標(biāo)物檢測(cè)[9-11]。如果需要對(duì)非靶向目標(biāo)物進(jìn)行定性檢測(cè),則需要借助分辨率更高的質(zhì)譜分析技術(shù)[12-14]。四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜(Q-TOF/MS)是一種可以快速區(qū)分和鑒定涼茶中非法添加物的有效方法,在一級(jí)質(zhì)譜中可確定目標(biāo)物分子量,再通過二級(jí)質(zhì)譜得到各化合物的不同碎片信息,結(jié)合HPLC 中的保留時(shí)間信息,并與文獻(xiàn)或標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照從而確定化合物的結(jié)構(gòu)[15-16]。本文以涼茶作為研究基質(zhì),結(jié)合QuEChERS前處理技術(shù),采用HPLC-Q-TOF/MS對(duì)涼茶中的非法添加物進(jìn)行無標(biāo)準(zhǔn)品非靶向快速定性篩查。該方法分析速度快、通量高,可為涼茶中非法添加物的快速篩查和質(zhì)量控制提供重要的方法依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 藥品及試劑

    對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸苯海拉明、雙氯芬酸鈉、馬來酸氯苯那敏(純度大于99.0%,德國Dr.Ehrestorfor,購自安譜公司);罌粟堿、那可丁、可待因、蒂巴因、可待因-D3(純度大于99.0%,CNW,購自安譜公司);乙腈、甲酸(HPLC級(jí),美國Thermo Fisher公司);氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、無水硫酸鎂、中性氧化鋁(Al-N)、氨丙基粉(NH2)、石墨化炭黑(GCB)、N-丙基乙二胺(PSA)、硅膠粉、堿性氧化鋁(Al-B)、硅膠鍵合十八烷基(C18)均購自安譜公司。實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q 超純水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    TripleTOFTM5600高分辨質(zhì)譜儀(美國AB SCIEX公司);島津LC-20AD液相色譜系統(tǒng)(日本島津公司);Milli-Q Advantage A10 超純水系統(tǒng)(法國Merck Millipore公司)。

    1.3 樣品收集與前處理

    涼茶樣品分別購于散裝涼茶零售店,包括口腔茶、咽喉茶、感冒茶、止咳茶、清熱降火茶等。

    準(zhǔn)確稱取5 g涼茶樣品于50 mL聚丙烯塑料離心管中,加入10 mL 0.5%乙酸乙腈,渦旋振蕩1 min后加入4.0 g MgSO4、0.5 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉和1.0 g NaCl,渦旋振蕩提取5 min,于10 000 r/min離心5 min,吸收上清液1 mL于裝有75 mg氨丙基粉的2 mL離心管中渦旋振蕩1 min,于12 000 r/min離心10 min,上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜,濾液供HPLC-Q-TOF/MS測(cè)定。

    1.4 儀器條件

    1.4.1 色譜條件色譜柱:Waters BEH C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流動(dòng)相:A為0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸,B為乙腈,梯度洗脫:0~10 min,5%~90%B;10~13 min,90%~100%B;13~16 min,100%B;16~17 min,100%~5%B;17~20 min,5%B;流速:0.5 mL/min;進(jìn)樣量5 μL;柱溫:40℃。

    1.4.2 質(zhì)譜條件離子源:ESI和APCI復(fù)合源;APCI源連接ABsciex公司自動(dòng)校正系統(tǒng)(CDS),每10個(gè)樣品自動(dòng)校正1次,校正液流速0.35 mL/min;一級(jí)TOF/MS掃描精確質(zhì)量范圍:100~1 000 Da;數(shù)據(jù)采集時(shí)間:100 ms;二級(jí)IDA-MS掃描精確質(zhì)量范圍:50~1 000 Da;高靈敏模式;數(shù)據(jù)采集時(shí)間:50 ms;信號(hào)閾值:100 cps; IDA實(shí)驗(yàn)每循環(huán)采集6次數(shù)據(jù),動(dòng)態(tài)背景減法扣除。源內(nèi)參數(shù)見表1。

    表1 TOF-IDA-MS模式的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS parameters of TOF-IDA-MS

    1.5 篩查方法

    樣液的高分辨質(zhì)譜信息由ABSciex公司的Analyst TF 1.6軟件采集,并采用PeakView 2.0軟件對(duì)實(shí)際樣品中的非法添加物進(jìn)行篩查。通過查閱文獻(xiàn),得到常見的解熱鎮(zhèn)痛和止咳西藥的化合物列表,并導(dǎo)入數(shù)據(jù)分析軟件中。然后設(shè)置相應(yīng)的檢索參數(shù):精確質(zhì)量偏差范圍為±1×10-5,保留時(shí)間限定范圍為±0.2 min,離子化模式設(shè)定為+H模式。用軟件計(jì)算化合物的實(shí)測(cè)值與理論值的偏差,通過分子離子的精確質(zhì)量偏差、同位素分布、同位素比例及保留時(shí)間進(jìn)行綜合分析,并給出相應(yīng)的檢索匹配得分值,對(duì)于檢索結(jié)果中精確質(zhì)量數(shù)、同位素比值和二級(jí)碎片匹配得分值大于80的化合物,本方法確認(rèn)其為檢出非法添加物。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 非靶向快速篩查非法添加物的質(zhì)控方法

    為確保篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性,本實(shí)驗(yàn)挑選 8種非法添加物進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。選擇的非法添加物包括解熱鎮(zhèn)痛類西藥和止咳平喘類西藥:對(duì)乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、雙氯芬酸鈉、鹽酸苯海拉明、蒂巴因、罌栗堿、那可丁、可待因。選擇的8種質(zhì)控化合物極性跨度大、出峰時(shí)間分散,離子化模式同時(shí)包括正負(fù)離子模型,能夠有效監(jiān)控非靶向篩查過程中整體實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性,確保篩查結(jié)果穩(wěn)定可靠。8種質(zhì)控化合物分別在“1.5”條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),優(yōu)化前處理和儀器檢測(cè)條件。

    2.1.1 質(zhì)譜檢測(cè)模式選擇由于對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸苯海拉明、馬來酸氯苯那敏、可待因、罌粟堿、蒂巴因和那可丁在ESI+模式下分子離子峰具有更高的響應(yīng),信號(hào)更穩(wěn)定,故選擇正離子模式檢測(cè),其分子離子峰為[M+H]+;雙氯芬酸鈉的分子結(jié)構(gòu)中含有Na+,在ESI-模式下可獲得較高響應(yīng),故選擇負(fù)離子模式檢測(cè),其分子離子峰為[M-Na]-。Triple TOF 5600型系統(tǒng)中配置的復(fù)合離子源有電噴霧離子源和大氣壓化學(xué)電離源兩種,本研究選擇電噴霧離子源作為檢測(cè)離子源,大氣壓化學(xué)電離源作為校正離子源。

    2.1.2 吸附劑的種類與用量考察了Al-N、NH2、GCB、PSA、Si和C18吸附劑的凈化效果及吸附劑的最佳用量,結(jié)果如圖1所示。當(dāng)各吸附劑用量均為100 mg時(shí),NH2粉對(duì)8種目標(biāo)化合物的吸附最小,回收率為86.8%~100%;而其它吸附劑對(duì)目標(biāo)化合物的影響較大,個(gè)別化合物的回收率低于65%。同時(shí),考察了不同用量的NH2粉對(duì)8種質(zhì)控化合物吸附情況的影響。當(dāng)NH2粉的用量為75 mg時(shí),8種目標(biāo)化合物的吸附最小,回收率為89.8%~100%;隨著NH2粉用量的增加,雙氯芬酸鈉的回收率逐漸降低,當(dāng)NH2粉用量為175 mg時(shí),回收率只有44.2%。因此,最終選用NH2粉作為吸附劑,其最佳用量為75 mg,此時(shí)可獲得較好的凈化效果。

    圖1 不同吸附劑對(duì)8種質(zhì)控化合物回收率的影響Fig.1 Effects of different sorbents on recoveries of 8 compoundsA:paracetamol,B:diphenhydramine,C:chlorphenamine maleate,D:diclofenac sodium,E:codeine,F:thebaine,G:noscapine,H:papaverine

    2.1.3 質(zhì)控化合物的定性定量依據(jù)本研究選擇8種非法添加物作為目標(biāo)分析對(duì)照物質(zhì),對(duì)8個(gè)目標(biāo)化合物進(jìn)行HPLC-Q-TOF/MS分析,以獲得目標(biāo)化合物的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息;根據(jù)一級(jí)TOF/MS和二級(jí)IDA-MS質(zhì)譜信息定性定量分析目標(biāo)化合物。8個(gè)目標(biāo)化合物的定性定量分析質(zhì)譜數(shù)據(jù)見表2。

    表2 8種非法添加物的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)Table 2 Mass fragmentations of 8 compounds analyzed by IDA-MS

    圖2 8種質(zhì)控化合物的提取離子流色譜圖Fig.2 Extracted ion chromatogram of 8 compounds

    2.1.4 質(zhì)控非法添加物定量曲線的建立樣品中8種非法添加物的含量,根據(jù)目標(biāo)化合物的一級(jí)TOF/MS高分辨質(zhì)譜信息進(jìn)行分析。可待因用內(nèi)標(biāo)法定量,其它化合物用外標(biāo)法定量。首先利用HPLC-Q-TOF/MS獲得目標(biāo)化合物的離子流色譜圖,8種目標(biāo)化合物配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,稀釋成系列不同質(zhì)量濃度,檢測(cè)后獲得目標(biāo)化合物的校正曲線以及線性范圍(見表3);同時(shí)以3 倍信噪比和10 倍信噪比為依據(jù),確定方法的檢出限與定量下限。8 種目標(biāo)化合物的高分辨提取離子流圖見圖2。結(jié)果表明,校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(r2)均不小于0.999 0,檢出限為2.0~10 μg/kg,定量下限為5.0~25 μg/kg,相關(guān)參數(shù)見表3。由質(zhì)控非法添加物的定量分析結(jié)果可知,本方法的檢出限低、靈敏度高,可用于非靶向非法添加物的快速篩查。

    表3 8種化合物的線性范圍、相關(guān)系數(shù)(r2)、檢出限與定量下限Table 3 Linear ranges,correlation coefficients(r2),LODs and LOQs of 8 compounds compounds

    2.1.5 質(zhì)控化合物的精密度對(duì)檢測(cè)為陰性的感冒茶基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。添加3個(gè)不同濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定,每個(gè)濃度水平做6份平行樣品,其平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)結(jié)果見表4。由表4可知,樣品的平均回收率為75.8%~95.6%,RSD為2.1%~6.5%,方法的精密度及準(zhǔn)確度良好,可用于非靶向非法添加物殘留的快速篩查。

    表4 8種質(zhì)控化合物的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 4 Average recoveries and relative standard deviations of 8 compounds(n=6)

    2.2 非靶向非法添加物殘留的快速篩查流程

    基于“2.1”的優(yōu)化結(jié)果可知,本方法的篩查技術(shù)穩(wěn)定性好、靈敏度高,可擴(kuò)展到解熱鎮(zhèn)痛類西藥和止咳類西藥的非靶向篩查。自建高分辨數(shù)據(jù)庫是實(shí)現(xiàn)非靶向篩查的基礎(chǔ),PeakView 2.0軟件是進(jìn)行化合物信息數(shù)據(jù)存儲(chǔ)以及歸類的專業(yè)軟件。將關(guān)注的解熱鎮(zhèn)痛類西藥和止咳類西藥的分子式導(dǎo)入PeakView 2.0構(gòu)成篩查數(shù)據(jù)庫。樣品經(jīng)前處理后供HPLC-Q-TOF/MS測(cè)定。采集的一級(jí)質(zhì)譜圖包含化合物的精確質(zhì)量數(shù)和分子式。使用一級(jí)譜圖對(duì)篩查出的可疑非法添加物進(jìn)行一級(jí)同位素分布和母離子精確質(zhì)量數(shù)匹配分析。如果一級(jí)譜圖信息匹配,再對(duì)二級(jí)碎片豐度比和精確質(zhì)量數(shù)等信息進(jìn)行匹配。通過ChemDraw Ultra 12.0軟件繪制可疑成分的結(jié)構(gòu)式,并將其導(dǎo)入PeakView 2.0軟件,將結(jié)構(gòu)與二級(jí)碎片進(jìn)行匹配,并結(jié)合相應(yīng)的檢索匹配得分值判斷目標(biāo)化合物是否檢出。以對(duì)乙酰氨基酚篩查為例,建立非靶向篩查非法添加西藥的分析方法,篩查流程圖見圖3:將對(duì)乙酰氨基酚分子式導(dǎo)入PeakView 2.0中,并定義離子化模式為[M+H]+,得到的一級(jí)高分辨精確質(zhì)量數(shù)和同位素比例見圖3A。調(diào)用其二級(jí)質(zhì)譜圖,結(jié)合其結(jié)構(gòu)式進(jìn)行結(jié)構(gòu)與二級(jí)精確質(zhì)量數(shù)的匹配。匹配結(jié)果見圖3B,對(duì)乙酰氨基酚的3個(gè)主要碎片均與結(jié)構(gòu)完全匹配,3個(gè)碎片的精確質(zhì)量數(shù)誤差小于0.001 Da,因此可判定為檢出。本文所建立涼茶中的非法添加物非靶向篩查技術(shù)完全滿足方法學(xué)要求。

    圖3 對(duì)乙酰氨基酚的定性篩查圖示Fig.3 Qualitative screening flow chart of paracetamol

    2.3 實(shí)際樣品的篩查

    采取建立的篩查方法對(duì)市售的50份散裝涼茶樣品進(jìn)行測(cè)定。首先使用“1.5”所建立的方法對(duì)樣品進(jìn)行篩查,如定性檢出非法添加物,再進(jìn)行定量分析。檢測(cè)結(jié)果表明,共有10份涼茶樣品檢出對(duì)乙酰氨基酚,其中3份口腔茶的檢出量分別為21.5、4.43、6.11 mg/kg;2份咽喉茶的檢出量分別為5.38、4.14 mg/kg;1份感冒茶的檢出量為5.66 mg/kg;1份止咳茶的檢出量為4.59 mg/kg;1份潤肺止咳茶的檢出量為26.7 mg/kg; 2份特效感冒茶的檢出量分別為2 188、1 519 mg/kg。

    3 結(jié) 論

    本文利用QuEChERS/HPLC-Q-TOF/MS建立了涼茶中非法添加物的非靶向篩查方法。通過添加 8種化合物作為質(zhì)控化合物,優(yōu)化了QuEChERS方法對(duì)涼茶樣品的前處理?xiàng)l件。采用軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,無需對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品,通過對(duì)目標(biāo)化合物母離子的精確質(zhì)量數(shù)、同位素比例等信息進(jìn)行比對(duì),并結(jié)合二級(jí)碎片譜圖與結(jié)構(gòu)匹配技術(shù)即可同時(shí)篩查和確認(rèn)涼茶中的多種非法添加物殘留。本方法的建立可為涼茶中非法添加西藥的快速篩查和質(zhì)量控制提供技術(shù)依據(jù)。

    猜你喜歡
    添加物涼茶西藥
    食品級(jí)再生聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯中非有意添加物的風(fēng)險(xiǎn)
    包裝工程(2023年19期)2023-10-16 05:41:58
    外源添加物對(duì)自制生物有機(jī)肥保存期的影響
    涼茶降火要先辨“虛實(shí)”
    自我保健(2020年8期)2020-10-27 01:16:52
    暑天上火,自制金銀花涼茶
    保健食品非法添加物檢測(cè)技術(shù)探討
    怕上火,喝什么涼茶?
    消渴湯聯(lián)合西藥治療糖尿病82例
    補(bǔ)腎養(yǎng)血通絡(luò)方聯(lián)合西藥治療糖尿病周圍神經(jīng)病變45例
    參附芪養(yǎng)心湯聯(lián)合西藥治療慢性心力衰竭50例
    不同果蔬添加物對(duì)鐵皮石斛莖尖組織生長的影響
    国产精品久久久久久精品电影小说| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久| bbb黄色大片| 中文字幕人妻熟女乱码| 老鸭窝网址在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 香蕉丝袜av| 精品国产乱码久久久久久男人| 最近最新中文字幕大全免费视频| 大香蕉久久网| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产欧美在线一区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 精品第一国产精品| 午夜成年电影在线免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久人人爽av亚洲精品天堂| av国产精品久久久久影院| 真人做人爱边吃奶动态| 黑人操中国人逼视频| 亚洲成人手机| 欧美人与性动交α欧美软件| 一级黄色大片毛片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 999久久久国产精品视频| 嫩草影视91久久| 日韩视频在线欧美| 考比视频在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 国产一级毛片在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 美女午夜性视频免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精品一二三| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 美女大奶头黄色视频| 国产成人影院久久av| 丝袜人妻中文字幕| 久久九九热精品免费| 在线观看免费午夜福利视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 777米奇影视久久| www.熟女人妻精品国产| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲 欧美一区二区三区| 91老司机精品| 黑人操中国人逼视频| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产又爽黄色视频| av电影中文网址| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 午夜91福利影院| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 超碰97精品在线观看| 一个人免费看片子| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲中文av在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线看a的网站| 一区二区三区精品91| 精品一区二区三区四区五区乱码| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品国产国语对白av| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美日韩av久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 老熟女久久久| 午夜免费观看性视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久中文字幕一级| 国产一区二区三区av在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品 欧美亚洲| 国产成人av激情在线播放| 国产av国产精品国产| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲国产日韩一区二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲国产日韩一区二区| 国产亚洲精品久久久久5区| 男女边摸边吃奶| 黄色片一级片一级黄色片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久影院123| 黄色怎么调成土黄色| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美日韩av久久| av线在线观看网站| 欧美激情 高清一区二区三区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美精品高潮呻吟av久久| 啦啦啦 在线观看视频| 国产免费福利视频在线观看| 女警被强在线播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久久精品区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲av美国av| 欧美xxⅹ黑人| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产区一区二久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲中文日韩欧美视频| 丝袜脚勾引网站| 久久久久久人人人人人| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲精品美女久久av网站| 91精品三级在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 一进一出抽搐动态| 高清av免费在线| 真人做人爱边吃奶动态| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜免费成人在线视频| 一区福利在线观看| 在线天堂中文资源库| 1024视频免费在线观看| av片东京热男人的天堂| 两个人看的免费小视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品影院久久| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 18在线观看网站| 国产成人欧美在线观看 | 久久久水蜜桃国产精品网| 麻豆av在线久日| 亚洲成国产人片在线观看| 大片免费播放器 马上看| 国产成人欧美| 一区二区日韩欧美中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 国产黄频视频在线观看| 人妻久久中文字幕网| 99九九在线精品视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产成人系列免费观看| av有码第一页| 久久香蕉激情| 多毛熟女@视频| 99国产精品一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 国产三级黄色录像| 1024视频免费在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费黄频网站在线观看国产| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 飞空精品影院首页| 欧美午夜高清在线| 99国产精品一区二区蜜桃av | 人妻一区二区av| 国产成人精品久久二区二区91| 91麻豆av在线| 99国产精品99久久久久| 在线观看www视频免费| tube8黄色片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美精品一区二区免费开放| 中国国产av一级| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av欧美777| av网站免费在线观看视频| 午夜激情久久久久久久| 黑人操中国人逼视频| 午夜精品国产一区二区电影| 另类亚洲欧美激情| 国产福利在线免费观看视频| 十分钟在线观看高清视频www| 大片免费播放器 马上看| 亚洲国产成人一精品久久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品福利永久在线观看| 国产精品免费大片| 免费日韩欧美在线观看| av线在线观看网站| 亚洲中文av在线| 美女主播在线视频| av一本久久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲av日韩在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产高清视频在线播放一区 | 国产人伦9x9x在线观看| a 毛片基地| 精品人妻在线不人妻| 男女之事视频高清在线观看| av片东京热男人的天堂| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人欧美| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲专区国产一区二区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 9191精品国产免费久久| 男人舔女人的私密视频| 在线天堂中文资源库| 久久香蕉激情| 午夜免费鲁丝| 日韩中文字幕欧美一区二区| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久久视频综合| 亚洲成人手机| 亚洲国产成人一精品久久久| 捣出白浆h1v1| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产1区2区3区精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 捣出白浆h1v1| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品国内亚洲2022精品成人 | 精品久久久久久久毛片微露脸 | 国产男人的电影天堂91| 无限看片的www在线观看| 日本91视频免费播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产在线免费精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 91麻豆av在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 1024香蕉在线观看| 亚洲人成电影观看| 欧美精品av麻豆av| 九色亚洲精品在线播放| 国产成人系列免费观看| 天堂中文最新版在线下载| 美女扒开内裤让男人捅视频| 美女国产高潮福利片在线看| 国产av一区二区精品久久| 1024视频免费在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 秋霞在线观看毛片| 深夜精品福利| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲精品久久午夜乱码| 中文字幕制服av| 日韩视频一区二区在线观看| 午夜老司机福利片| 亚洲av成人一区二区三| 99国产极品粉嫩在线观看| 免费观看av网站的网址| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲一区中文字幕在线| 久久亚洲国产成人精品v| 超色免费av| 淫妇啪啪啪对白视频 | 国产成人精品在线电影| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产成人系列免费观看| 国产成人精品无人区| 一级毛片电影观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 99香蕉大伊视频| 久久青草综合色| 精品亚洲成a人片在线观看| 69av精品久久久久久 | 搡老乐熟女国产| 性色av一级| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 青青草视频在线视频观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成在线人永久免费视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久久久国产精品人妻一区二区| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人av教育| 久久久久网色| 国产一卡二卡三卡精品| 中文字幕人妻熟女乱码| 99久久综合免费| 十八禁高潮呻吟视频| 国产福利在线免费观看视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久久久人人人人人| 国产精品av久久久久免费| 亚洲欧洲日产国产| 999久久久精品免费观看国产| 国产免费现黄频在线看| 操美女的视频在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 在线精品无人区一区二区三| 国产国语露脸激情在线看| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久欧美国产精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| kizo精华| 一进一出抽搐动态| 岛国在线观看网站| 18禁国产床啪视频网站| 一区二区av电影网| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 18在线观看网站| 窝窝影院91人妻| videos熟女内射| 欧美精品高潮呻吟av久久| 午夜影院在线不卡| 又大又爽又粗| 美女福利国产在线| 国产精品久久久av美女十八| 最近最新免费中文字幕在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 青春草视频在线免费观看| 国产av又大| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 日本一区二区免费在线视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产xxxxx性猛交| 香蕉国产在线看| 99九九在线精品视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 桃红色精品国产亚洲av| 99九九在线精品视频| kizo精华| 日本wwww免费看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久av网站| 99热网站在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 在线天堂中文资源库| 2018国产大陆天天弄谢| 少妇粗大呻吟视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美午夜高清在线| 三级毛片av免费| 97精品久久久久久久久久精品| 美女高潮到喷水免费观看| 国产片内射在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 大香蕉久久成人网| 大片免费播放器 马上看| 国产主播在线观看一区二区| 久久久国产成人免费| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲成av片中文字幕在线观看| e午夜精品久久久久久久| 日日夜夜操网爽| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 一个人免费在线观看的高清视频 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 岛国毛片在线播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲专区字幕在线| 人妻一区二区av| 成人国语在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美另类一区| 好男人电影高清在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一级毛片女人18水好多| 国产xxxxx性猛交| 中文欧美无线码| 高清欧美精品videossex| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 色精品久久人妻99蜜桃| netflix在线观看网站| 亚洲男人天堂网一区| 大片电影免费在线观看免费| 三上悠亚av全集在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产91精品成人一区二区三区 | 制服人妻中文乱码| 国产亚洲精品第一综合不卡| 青草久久国产| 亚洲av成人一区二区三| 人妻一区二区av| 大片电影免费在线观看免费| 老熟妇仑乱视频hdxx| 满18在线观看网站| 免费在线观看日本一区| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 9热在线视频观看99| 成人免费观看视频高清| 一级毛片电影观看| 99久久人妻综合| 久久九九热精品免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 蜜桃在线观看..| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产1区2区3区精品| 另类亚洲欧美激情| 国产97色在线日韩免费| 飞空精品影院首页| 久久久久国内视频| 老司机亚洲免费影院| 国产男女超爽视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 精品一区二区三卡| 精品国产乱码久久久久久小说| 秋霞在线观看毛片| 成年美女黄网站色视频大全免费| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久欧美国产精品| 一级片'在线观看视频| tube8黄色片| 亚洲av男天堂| 婷婷成人精品国产| 电影成人av| 在线 av 中文字幕| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 免费日韩欧美在线观看| 成人免费观看视频高清| 免费在线观看日本一区| 国产不卡av网站在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 视频在线观看一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜免费成人在线视频| 免费观看a级毛片全部| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久久久国产精品人妻一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久9热在线精品视频| 另类精品久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 99久久人妻综合| 美女主播在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲人成电影观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 国产成人欧美在线观看 | 91大片在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲三区欧美一区| a级毛片在线看网站| 色老头精品视频在线观看| 免费观看av网站的网址| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久亚洲国产成人精品v| 男女国产视频网站| 国产淫语在线视频| av网站在线播放免费| 国产成人系列免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| 韩国精品一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久人人爽人人片av| 大型av网站在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说| 女性生殖器流出的白浆| 国产免费视频播放在线视频| 久久久久精品人妻al黑| 黄色怎么调成土黄色| 深夜精品福利| 黄色怎么调成土黄色| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产成人啪精品午夜网站| 国产又爽黄色视频| 精品久久蜜臀av无| 少妇精品久久久久久久| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲国产av影院在线观看| av在线app专区| av片东京热男人的天堂| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品av久久久久免费| 丁香六月欧美| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 窝窝影院91人妻| 久久毛片免费看一区二区三区| 麻豆国产av国片精品| 999久久久精品免费观看国产| 国产一区二区三区av在线| 亚洲三区欧美一区| 欧美日韩视频精品一区| 曰老女人黄片| 人妻一区二区av| 正在播放国产对白刺激| 国产野战对白在线观看| 成人手机av| 老司机影院成人| 永久免费av网站大全| 热99国产精品久久久久久7| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 丰满少妇做爰视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲欧美清纯卡通| 成年美女黄网站色视频大全免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久精品国产亚洲av高清一级| 又黄又粗又硬又大视频| 日本a在线网址| 黄色视频在线播放观看不卡| 人成视频在线观看免费观看| 丝袜脚勾引网站| 最近最新免费中文字幕在线| 又紧又爽又黄一区二区| 十八禁人妻一区二区| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲熟女毛片儿| tocl精华| 午夜视频精品福利| 国产黄频视频在线观看| 婷婷成人精品国产| 亚洲人成电影免费在线| 嫩草影视91久久| 夜夜夜夜夜久久久久| 丁香六月天网| av又黄又爽大尺度在线免费看| 美女午夜性视频免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 777米奇影视久久| 搡老岳熟女国产| svipshipincom国产片| 国产91精品成人一区二区三区 | 99国产精品99久久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 一区二区三区乱码不卡18| 成年美女黄网站色视频大全免费| a级毛片黄视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 999精品在线视频| 三级毛片av免费| 亚洲成人免费av在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| avwww免费| www.熟女人妻精品国产| 亚洲,欧美精品.| 欧美久久黑人一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲成人手机| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲黑人精品在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日韩成人在线一区二区| 成人av一区二区三区在线看 | 涩涩av久久男人的天堂| 美女扒开内裤让男人捅视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲色图综合在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久久精品94久久精品| 蜜桃在线观看..| 亚洲色图综合在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 精品人妻在线不人妻| 久久久久精品国产欧美久久久 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成人国产av品久久久| 不卡av一区二区三区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 啦啦啦啦在线视频资源| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 黑丝袜美女国产一区| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产淫语在线视频| 天堂8中文在线网| 国产免费现黄频在线看| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久免费观看电影|