尿液防腐劑甲苯對(duì)24 小時(shí)尿葡萄糖檢測(cè)的影響

張慧嬋，雷 達(dá)，曹東林

24 h 尿液生化檢測(cè)是反映腎臟功能的生化指標(biāo)，尿糖的檢測(cè)不僅反映糖尿病的代謝情況，也可檢測(cè)和評(píng)價(jià)糖尿病的治療效果，當(dāng)血糖濃度超過(guò)8.88 mmol/L，即腎糖閾時(shí)，尿液中便可檢測(cè)出葡萄糖。標(biāo)本的正確留取和保存是獲得準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果的前提，臨床留取24 h尿時(shí)，通常包括物理方法（冷藏法）和化學(xué)方法（防腐劑法），臨床常用的尿液防腐劑有甲苯、甲醛、濃鹽酸、氟化鈉、冰乙酸和碳酸鈉等，不同的尿液防腐劑有不同的防腐原理[1]。臨床上首選防腐劑為甲苯，1 ml 尿液中加入甲苯5 μl[2]。甲苯防腐的原理是當(dāng)甲苯足量時(shí)可在尿液表面形成一層薄膜，阻止尿液與空氣接觸、防止細(xì)菌生長(zhǎng)、穩(wěn)定代謝產(chǎn)物等，達(dá)到防腐效果，常用于尿糖、尿蛋白、化學(xué)成分的定性或定量檢測(cè)[3]。由于24 h 尿液的留取與儲(chǔ)存受較多因素的影響，如容器、放置環(huán)境和測(cè)量方式；且尿防腐劑法在實(shí)際應(yīng)用中有著不可忽視的弊端，臨床對(duì)于留取24 h 尿液是否需要加入防腐劑存在較大爭(zhēng)議，目前只有關(guān)于尿蛋白定量和尿液鈣、鎂等離子測(cè)量中加入甲苯防腐必要性的研究探討，以及不同防腐劑防腐效果的比較研究[3-5]。暫無(wú)關(guān)于24 h 尿液留取用于尿糖的檢測(cè)時(shí)是否需要防腐的相關(guān)研究報(bào)道。本研究留取了相關(guān)尿液標(biāo)本，用甲苯作為防腐劑，分別在0 h、12 h 和24 h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)尿糖進(jìn)行定量分析以探究留取24 h 尿時(shí)加入甲苯防腐劑的必要性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 留取廣東省第二人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)室用于尿常規(guī)檢測(cè)的住院患者晨尿標(biāo)本40 例，其中按尿糖定性結(jié)果分為“-”、“+”、“++”、“+++”各10 例。微生物室Bio Mérieux 血平板培養(yǎng)基40 個(gè)。收集標(biāo)準(zhǔn)為自然排尿法，無(wú)經(jīng)血、白帶、精液、糞便等混入。

1.2 儀器與試劑 希森美康（Sysmex）UF-1000i 自動(dòng)尿沉渣分析儀及該儀器的配套試劑和質(zhì)控品；恒溫細(xì)菌培養(yǎng)箱（上海力申科學(xué)儀器有限公司）；日立7600全自動(dòng)生化分析儀及邁克生物股份有限公司尿糖檢測(cè)試劑盒，所有尿液檢測(cè)用同一臺(tái)儀器，同一批號(hào)試劑。

1.3 方法

1.3.1 尿量與甲苯最適配比 按需要將不同尿量置于3 個(gè)無(wú)菌尿管中，往液面中緩慢滴加甲苯，觀察液面，在液面剛好形成膜時(shí)所需要的甲苯用量，甲苯和尿液按標(biāo)準(zhǔn)比例配比的用量分別繪制趨勢(shì)線，兩條趨勢(shì)線的相交點(diǎn)表示當(dāng)甲苯和尿液的比例合適時(shí)，剛好能在液面形成保護(hù)層，即為最適尿液與甲苯用量，見(jiàn)圖1。

圖1 尿量與甲苯的配比

1.3.2 尿液葡萄糖定量 留取臨檢室尿常規(guī)Sysmex UF-1000i 自動(dòng)尿沉渣分析儀葡萄糖定性結(jié)果陰性和陽(yáng)性的住院晨尿標(biāo)本40 例，每個(gè)標(biāo)本留取10 ml，其中尿糖陰性10 例，尿糖陽(yáng)性30 例，且陽(yáng)性程度呈一定梯度增加。收集標(biāo)本即刻檢測(cè)尿糖濃度（0 h 尿糖濃度），并接種血平板做細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)。將標(biāo)本混勻并平均分成2份，每份5 ml，置于無(wú)菌尿管中，一份加入甲苯25 μl（甲苯組），一份不加甲苯（無(wú)甲苯組），作為自身對(duì)照，4 ℃冰箱保存，分別放置12 h 和24 h 后取0.5～1 ml于反應(yīng)杯中，在日立7600 全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)尿糖濃度，全部標(biāo)本于12 h、24 h 兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，不同時(shí)間點(diǎn)尿糖測(cè)量值的分析采用重復(fù)測(cè)量方差分析，方差協(xié)方差矩陣是否滿足H 型條件的假設(shè)檢驗(yàn)采用Mauchly 球形檢驗(yàn)，校正系數(shù)用G-G；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)表示，組間比較采用Pearson χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 同一保存條件不同放置時(shí)間尿糖定量結(jié)果的比較重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果顯示方差協(xié)方差矩陣不滿足H型條件（χ2=10.034，P＞0.05，G-Gε=0.891）；無(wú)論是否加入甲苯防腐均直接4 ℃冰箱保存，放置不同時(shí)間后對(duì)尿糖定量結(jié)果的影響均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05，表1）。

表1 同一保存條件處理后放置不同時(shí)間尿糖濃度的情況比較

表1 同一保存條件處理后放置不同時(shí)間尿糖濃度的情況比較

保存條件 例數(shù) 時(shí)間點(diǎn)0 h 12 h 24 h有甲苯 40 10.28±12.15 10.26±12.17 10.28±12.10無(wú)甲苯 40 10.29±12.16 10.25±12.15 10.35±12.29

2.2 同一時(shí)間點(diǎn)不同保存條件尿糖定量結(jié)果的比較比較同一時(shí)間點(diǎn)兩組（無(wú)甲苯組，甲苯組）尿糖差異，處理（加入甲苯）后即刻（0 h）；放置12 h 與24 h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組結(jié)果的比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05，表 2）。

表2 同一時(shí)間點(diǎn)不同保存條件之間的兩兩比較

檢測(cè)時(shí)間 尿糖濃度 t 值 P 值有甲苯 無(wú)甲苯0 h 10.28±12.15 10.29±12.16 -1.215 0.232 12 h 10.26±12.17 10.25±12.15 0.674 0.505 24 h 10.28±12.10 10.35±12.29 -1.277 0.209

2.3 菌落計(jì)數(shù)結(jié)果 尿液標(biāo)本培養(yǎng)24 h 后的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示兩個(gè)變量(尿糖定性結(jié)果和尿液菌落數(shù)量)之間沒(méi)有顯著性相關(guān)（P＞0.05，表3）。尿液中原有細(xì)菌的多少與尿糖濃度沒(méi)有相關(guān)性。

表3 尿液細(xì)菌培養(yǎng)24 h 后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（個(gè)/μl）

3 討 論

葡萄糖為機(jī)體提供營(yíng)養(yǎng)和能量，是機(jī)體運(yùn)轉(zhuǎn)不可或缺的物質(zhì)之一，正常機(jī)體血糖濃度為空腹血糖≤6.1 mmol/L，用餐2 h 后的血糖≤7.8 mmol/L，尿糖干化學(xué)定性為“-”。如果血液中葡萄糖含量超出了腎糖閾，尿液中就會(huì)出現(xiàn)葡萄糖。慢性糖尿病患者需長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)血糖濃度，雖然目前有靜脈留置針技術(shù)的輔助，避免了重復(fù)靜脈抽血給患者帶來(lái)的痛苦[6]，但是相比之下，對(duì)尿糖進(jìn)行檢測(cè)比直接測(cè)量血糖操作簡(jiǎn)單方便、經(jīng)濟(jì)效益高。文獻(xiàn)[7]研究發(fā)現(xiàn)尿糖的升高與血糖的升高呈正相關(guān)，所以可通過(guò)監(jiān)測(cè)尿糖的濃度來(lái)初步反映血糖水平。尿糖干化學(xué)法定性的簡(jiǎn)便易行還可用于對(duì)健康人群血糖水平的篩查。尿液干化學(xué)法定性的結(jié)果受到尿液酸堿度和尿液本身所含的氧化物質(zhì)的影響。如過(guò)高的維生素C 會(huì)對(duì)尿糖定性造成假陰性結(jié)果[8]，尿液生化檢測(cè)以其操作簡(jiǎn)單，葡萄糖定量指標(biāo)水平檢測(cè)準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)得到廣泛應(yīng)用[9]，為了更準(zhǔn)確的反映葡萄糖的濃度水平，可進(jìn)行尿糖定量檢測(cè)。臨床上隨機(jī)時(shí)間點(diǎn)對(duì)某項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)受到的影響因素較多，為了更準(zhǔn)確的反映24 h 內(nèi)機(jī)體某項(xiàng)指標(biāo)的排泄量，需要留取24 h 尿液。檢測(cè)前步驟的嚴(yán)格把控是獲得正確結(jié)果的前提，尿液標(biāo)本的正確留取和保存是檢測(cè)前質(zhì)量控制的關(guān)鍵步驟[10]。甲苯的刺激味道有些患者很難接受，并且使用防腐劑收集尿液過(guò)程復(fù)雜，也會(huì)對(duì)操作者有一定程度的危害。Miler 等[11]調(diào)查顯示出門診患者對(duì)于24 h 尿液的正確收集依從性很低，錯(cuò)誤的容器，錯(cuò)誤的采樣時(shí)間和錯(cuò)誤的測(cè)量方式都是分析前質(zhì)量低的原因，對(duì)于有著刺激性氣味及潛在毒性的甲苯防腐劑的應(yīng)用更難以接受。尿液防腐劑甲苯的用量有嚴(yán)格的規(guī)定，考慮到門診患者無(wú)法正確把握用量，且已有相關(guān)報(bào)道稱甲苯具有神經(jīng)毒性，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用，長(zhǎng)期的吸入可引起急性中毒性腦病、腦水腫、出現(xiàn)不同程度的意識(shí)及精神障礙，引起不同程度的肝、腎、肺等器官損傷，嚴(yán)重者常因多器官功能衰竭而死亡[12]。本研究對(duì)24 h 尿液的留取是否有必要使用毒性防腐劑進(jìn)行了探討。

由于24 h 尿液留取的不方便，臨床上常使用隨機(jī)尿樣驗(yàn)證防腐劑的影響[13]。本研究采用住院晨尿代替24 h 尿液，為使結(jié)果更準(zhǔn)確，且對(duì)相當(dāng)范圍的尿糖結(jié)果有說(shuō)服力，實(shí)驗(yàn)留取的標(biāo)本對(duì)尿糖定性結(jié)果進(jìn)行了人為選擇——包括“-”、“+”、“++”、 “+++”各10 例。由于隨機(jī)尿標(biāo)本留取過(guò)程受污染是無(wú)法避免的，已有相關(guān)文獻(xiàn)做過(guò)比較實(shí)驗(yàn)證明4 ℃冰箱保存可達(dá)到跟甲苯防腐一樣的抑菌效果，在兩組實(shí)驗(yàn)中證明24 h 后菌落的數(shù)量與一開(kāi)始無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而室溫保存組細(xì)菌大量繁殖[14]。本研究只對(duì)每一個(gè)尿標(biāo)本收集即刻進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示無(wú)論是低濃度還是高濃度尿糖，加入防腐劑與放置4 ℃冰箱保存12 h、24 h后的尿糖結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與即刻尿糖定量結(jié)果比較也無(wú)差異；尿液細(xì)菌的菌落數(shù)量與尿糖定性結(jié)果的高低不相關(guān)，不同菌落數(shù)的尿液在兩個(gè)條件下保存12 h 和24 h 后尿糖定量結(jié)果也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明在24 h 尿液的保存中加入甲苯防腐并不是必要的。

本研究在操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)尿液標(biāo)本上機(jī)檢測(cè)時(shí)混有甲苯防腐劑，會(huì)干擾試驗(yàn)過(guò)程，對(duì)尿糖定量結(jié)果有影響。試驗(yàn)操作過(guò)程發(fā)現(xiàn)部分樣本甲苯組的定量結(jié)果很不穩(wěn)定，吸樣重復(fù)測(cè)量也是如此，在排除了機(jī)器原因和試劑原因后，將標(biāo)本離心再嚴(yán)格吸取下層樣本上機(jī)檢測(cè)時(shí)結(jié)果穩(wěn)定，這一現(xiàn)象說(shuō)明標(biāo)本中混入甲苯會(huì)干擾測(cè)量結(jié)果。國(guó)內(nèi)也有相關(guān)研究報(bào)道當(dāng)24 h 尿用強(qiáng)生干化學(xué)法檢測(cè)尿蛋白時(shí)，甲苯的加入與干化學(xué)法尿蛋白檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書相悖——說(shuō)明書上明確標(biāo)注不可使用防腐劑[15-17]。24 h 尿液留取后通常用于檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，其中也包括尿蛋白，額外物質(zhì)的混入很難保證不對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響，而通過(guò)本研究可以得出24 h 尿液的保存可以不加入防腐劑4 ℃冰箱保存，避免了因防腐劑的混入而影響定量結(jié)果的問(wèn)題。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)24 h 尿液留取（用于葡萄糖定量檢測(cè)）過(guò)程，加蓋4 ℃冰箱保存可達(dá)到與加入甲苯防腐劑一樣的“防腐”效果，在4 ℃冰箱保存24 h 后尿糖的定量結(jié)果和加入甲苯防腐劑保存24 h 后的測(cè)定值、即刻測(cè)定值之間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此臨床留取24 h 尿液可以不加入防腐劑。