夏天無(wú)的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究進(jìn)展

劉曉妹 高進(jìn) 吳安明

[摘要] 夏天無(wú)是2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》所收載的一味常用中藥，其藥用部位為罌粟科植物紫堇屬伏生紫堇的干燥塊莖。其主要藥理活性成分為生物堿類(lèi)，臨床常用于治療中風(fēng)偏癱、頭痛、跌撲損傷、腰腿疼痛及風(fēng)濕痹痛等。本文對(duì)近年來(lái)夏天無(wú)質(zhì)量評(píng)價(jià)相關(guān)研究進(jìn)行歸納總結(jié)，以期為指導(dǎo)夏天無(wú)和同科藥材的鑒別及建立科學(xué)合理的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供借鑒和參考。本文為進(jìn)一步保障臨床用藥的安全性及有效性提供了一定的參考。

[關(guān)鍵詞] 夏天無(wú);質(zhì)量評(píng)價(jià);定性鑒別;定量分析;研究進(jìn)展

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）03（a）-0037-04

[Abstract] The Rhizoma Corydalis decumbentis is a commonly used traditional Chinese medicine contained in the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China in 2015. Its medicinal part is the dried tuber of Coydalis decumbens （Thunb.） Pers.. Its main pharmacological active ingredients are alkaloids， which are commonly used in the treatment of stroke hemiplegia， headache， fall injury， lumbar and leg pain， rheumatism and arthralgia. This paper summarizes the recent studies on quality evaluation of Rhizoma Corydalis decumbentis in order to provide references for guiding the identification of Rhizoma Corydalis decumbentis and other medicinal materials and establishing scientific and reasonable quality evaluation criteria. This article provides some references for further ensuring the safety and effectiveness of clinical medication.

[Key words] Rhizoma Corydalis decumbentis; Quality evaluation; Qualitative identification; Quantitative analysis; Research advances

中藥夏天無(wú)為罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.） Pers.的干燥塊莖[1]，又名伏地延胡索、一粒金丹等，主產(chǎn)于江西、福建、安徽、浙江等省，以江西產(chǎn)質(zhì)量為佳，其中“余江夏天無(wú)”為國(guó)家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品[2]。夏天無(wú)味苦、微辛，性溫，具有活血止痛、舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)除濕的功效，臨床上可用于治療多種疾病，如高血壓、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心律失常、缺血性腦血管病、腰腿疼痛、低度近視等[1，3-4]。目前，以夏天無(wú)為主要活性成分的中成藥有夏天無(wú)注射液、夏天無(wú)滴眼液、夏天無(wú)膠囊、夏天無(wú)片、復(fù)方夏天無(wú)薄膜衣片等。

夏天無(wú)的主要成分為生物堿，總生物堿的含量為2%～3%，主要為苯酞異喹啉類(lèi)（比枯枯靈、咖若定、紫堇明定、夏無(wú)寧堿、夏天無(wú)堿丙素、蘇元胡堿等）、芐基異喹啉類(lèi)（夏天無(wú)堿、罌粟堿、夏天無(wú)堿甲素等）、原小檗堿類(lèi)（延胡索乙素、巴馬汀、四氫藥根堿）、原阿片堿類(lèi)（原阿片堿、隱品堿、別隱品堿）及簡(jiǎn)單異喹啉類(lèi)，其中叔胺類(lèi)生物堿（如延胡索乙素和原阿片堿）在夏天無(wú)原藥材中的含量約為季銨類(lèi)生物堿（如黃藤素和鹽酸小檗堿）含量的8倍[5]。

此外，夏天無(wú)與延胡索為同科植物，其性味功效相似，兩者都含有延胡索乙素、原阿片堿、巴馬汀等生物堿，且總生物堿均是其主要藥理活性成分，市場(chǎng)上容易出現(xiàn)混用、誤用的情況，嚴(yán)重影響臨床用藥的有效性及安全性。本文對(duì)夏天無(wú)質(zhì)量評(píng)價(jià)相關(guān)的研究文獻(xiàn)進(jìn)行歸納總結(jié)，對(duì)夏天無(wú)和易混用藥材的鑒別以及夏天無(wú)的質(zhì)量深入研究提供借鑒和參考。

1 定性鑒別

長(zhǎng)期以來(lái)，中藥鑒別最常用的鑒定方法包括基源鑒定、理化鑒定、顯微鑒定和性狀鑒定。隨著色譜、光譜等儀器分析手段的不斷進(jìn)步，紫外-可見(jiàn)光譜法、紅外吸收光譜法、氣相色譜法、液相色譜法等技術(shù)也被運(yùn)用于夏天無(wú)等中藥的鑒別。

1.1 薄層色譜法

薄層色譜法具有分離、鑒定雙重功能，而且操作簡(jiǎn)便、直觀性強(qiáng)，主要用于中藥材、中藥飲片和中藥制劑的定性與定量分析[6]。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[1]鑒別項(xiàng)下規(guī)定：夏天無(wú)藥材以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（16∶3∶1）為展開(kāi)劑，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品與對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)。張佳佳等[7]以正己烷-氯仿-甲醇（8∶5∶2）為展開(kāi)劑，置碘缸中5 min后，揮盡碘，置于紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果延胡索有4個(gè)斑點(diǎn)，夏天無(wú)有7個(gè)斑點(diǎn)，該方法可以簡(jiǎn)單、快速地鑒別延胡索與夏天無(wú)，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度高。

1.2 紅外吸收光譜法

紅外吸收光譜法具有鮮明的特征性，其譜帶的數(shù)目、位置、形狀和強(qiáng)度都隨化合物不同而各不相同，且該方法測(cè)定快速、樣品用量少、不破壞樣品、操作簡(jiǎn)便、分析靈敏度高，是定性鑒別的有力工具。魏鳳環(huán)等[8]采用紅外吸收光譜法對(duì)同科植物夏天無(wú)與延胡索進(jìn)行鑒別，夏天無(wú)提取物在1757 cm-1、1467 cm-1、1246 cm-1附近出現(xiàn)了3個(gè)延胡索不具有的峰，而延胡索提取物在1090 cm-1、882 cm-1附近有2個(gè)夏天無(wú)所沒(méi)有的峰，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)二者的快速鑒別。

1.3 中藥指紋圖譜技術(shù)

中藥是一個(gè)多組分的復(fù)雜體系，中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性與多樣性是其臨床功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的難點(diǎn)與重點(diǎn)，中藥指紋圖譜可以宏觀、整體表征中藥主要化學(xué)成分的相關(guān)特征，是目前符合中藥特色的可用于評(píng)價(jià)中藥穩(wěn)定性、真實(shí)性與一致性的質(zhì)量控制技術(shù)[9]。目前，夏天無(wú)指紋圖譜研究的技術(shù)主要有薄層色譜指紋圖譜、高效液相色譜指紋圖譜及核磁共振指紋圖譜。

1.3.1 薄層色譜指紋圖譜? 薄層色譜法為傳統(tǒng)的定性與半定量分析方法，單次分析的樣品多，提供的信息量大，有較好的指紋信息鑒別價(jià)值。夏天無(wú)與延胡索屬同科植物，含有諸多相同成分。對(duì)于同時(shí)存在這兩味藥材的中成藥，專(zhuān)屬性是選定鑒別方法所要考慮的首要問(wèn)題。聶孝平等[10]采用薄層色譜法建立制劑的薄層色譜指紋圖譜，通過(guò)與夏天無(wú)、延胡索藥材薄層色譜指紋圖譜對(duì)比，以是否存在特征峰為依據(jù)來(lái)鑒別夏天無(wú)和延胡索，該方法快速且結(jié)果直觀。

1.3.2 高效液相色譜指紋圖譜? 該方法是目前指紋圖譜技術(shù)中用途最廣泛的一種方法。邵軍等[11]通過(guò)超高效液相色譜法快速分離夏天無(wú)提取物的主要成分，建立了夏天無(wú)超高效液相色譜指紋圖譜，同時(shí)通過(guò)質(zhì)譜鑒定其主要化學(xué)成分，鑒定了夏天無(wú)超高效液相色譜指紋圖譜中的12個(gè)主要色譜峰，為夏天無(wú)提取物的質(zhì)量研究奠定了良好基礎(chǔ)。張璐等[12]通過(guò)研究15批夏天無(wú)（余江產(chǎn)）的高效液相色譜特征圖譜，通過(guò)相似度評(píng)價(jià)軟件系統(tǒng)，匹配生成夏天無(wú)對(duì)照特征圖譜，建立“余江夏天無(wú)”高效液相色譜對(duì)照特征圖譜，并指認(rèn)其特征峰，為“余江夏天無(wú)”質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)與其它產(chǎn)地夏天無(wú)進(jìn)行比對(duì)，可以通過(guò)判斷是否有無(wú)特征峰、相似度大小等量化指標(biāo)評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地夏天無(wú)藥材的異同點(diǎn)，結(jié)果顯示，“余江夏天無(wú)”質(zhì)量?jī)?yōu)于其它產(chǎn)地夏天無(wú)，為“余江夏天無(wú)”的道地性和質(zhì)量研究奠定良好基礎(chǔ)。

1.3.3 核磁共振指紋圖譜? 核磁共振氫譜（1H-NMR）是鑒定有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)的重要的方法。武孔云等[13]選取夏天無(wú)總生物堿作為特征性成分，對(duì)其進(jìn)行提取，建立夏天無(wú)特征性成分的1H-NMR指紋譜，觀測(cè)并歸納出夏天無(wú)主要成分普魯托品、比枯枯靈和四氫巴馬汀的特征共振峰，為夏天無(wú)藥材的指紋圖譜鑒定提供了基礎(chǔ)。

2 定量分析

生物堿是夏天無(wú)主要活性成分，因此目前其質(zhì)量評(píng)價(jià)研究主要集中在對(duì)總生物堿類(lèi)成分的質(zhì)量分析上，其總生物堿中以原阿片堿及延胡索乙素含量較高[5，14-15]。目前，2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》僅對(duì)鹽酸巴馬汀和原阿片堿進(jìn)行質(zhì)量控制，其質(zhì)控指標(biāo)比較單一。隨著夏天無(wú)藥理活性及臨床研究的深入，其生物堿的藥理作用已比較明確[16-19]。針對(duì)發(fā)揮藥效的主要生物堿成分對(duì)藥材及制劑開(kāi)展質(zhì)量控制，才真正有利于藥品發(fā)揮其藥效，同時(shí)對(duì)毒性成分進(jìn)行限量控制，則更有利于確保用藥安全。

2.1 高效液相色譜-紫外檢測(cè)

高效液相色譜法具有分析速度快、分離效能高、自動(dòng)化程度高、重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已成為中藥質(zhì)量控制的主要方法。夏天無(wú)主要生物堿的最佳吸收波長(zhǎng)基本在280 nm附近，故目前夏天無(wú)定量分析研究以采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法居多。

袁勁松等[20]建立了同時(shí)測(cè)定夏天無(wú)中原阿片堿、鹽酸巴馬汀、延胡索乙素、小檗堿、比枯枯靈堿、紫堇米定堿、四氫藥根堿、黃連堿、血根堿、鹽酸罌粟堿、紫堇堿11種生物堿含量的高效液相色譜-紫外檢測(cè)方法，并對(duì)全國(guó)9個(gè)不同城市出產(chǎn)的夏天無(wú)進(jìn)行了含量差異分析，發(fā)現(xiàn)所有地區(qū)夏天無(wú)中小檗堿、血根堿、鹽酸罌粟堿和紫堇堿的含量均較低，而原阿片堿、延胡索乙素和鹽酸巴馬汀含量均較多;另外，不同產(chǎn)地的夏天無(wú)樣品各種成分的含量差異也較大，其中河北安國(guó)和江西樟樹(shù)的夏天無(wú)中生物堿含量最為豐富。竇麗麗等[21]采用一種新型流動(dòng)相——微乳流動(dòng)相建立了高效液相色譜-紫外檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定夏天無(wú)中藥根堿、巴馬汀、小檗堿、延胡索乙素、原阿片堿含量，該方法可在20 min內(nèi)完成5種生物堿成分的測(cè)定，比采用有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的檢測(cè)時(shí)間縮短了1倍，結(jié)果表明，采用微乳流動(dòng)相可以分離成分復(fù)雜、性質(zhì)相近的中藥中多種成分，并且該方法流動(dòng)相所用有機(jī)溶劑用量少，毒性低，相對(duì)費(fèi)用和污染少，為中藥的質(zhì)量控制提供了新選擇。

2.2 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是一種將液相色譜和質(zhì)譜結(jié)合起來(lái)的技術(shù)，其兼具分離能力高和專(zhuān)屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，在藥物分析、食品分析及環(huán)境污染物分析等眾多領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[22-24]。

沈燕等[25]建立了液質(zhì)聯(lián)用的分析方法，對(duì)夏天無(wú)生物堿在電噴霧模式下的裂解途徑進(jìn)行了探討，結(jié)果顯示在正離子模式下，夏天無(wú)生物堿類(lèi)化合物容易失去一氧化碳和甲醛，也有可能失去苯環(huán)，呈現(xiàn)出一定的裂解規(guī)律。該課題組[26]隨后進(jìn)一步開(kāi)發(fā)了高分離快速液相色譜-四級(jí)桿-離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法（RRLC-QTrap-MS），并用于測(cè)定夏天無(wú)中4種主要生物堿（原阿片堿、巴馬汀、延胡索乙素、比枯枯靈），該方法較常規(guī)高效液相色譜-紫外檢測(cè)法大大縮短了分析時(shí)間，且具有高靈敏度、高通量的優(yōu)點(diǎn)。

2.3 多維色譜法

多維色譜又稱(chēng)為色譜/色譜聯(lián)用技術(shù)，是采用匹配的接口將不同分離性能或特點(diǎn)的色譜連接起來(lái)，一般選用2個(gè)合適的色譜聯(lián)用即可滿(mǎn)足對(duì)絕大多數(shù)難分離混合物樣品的分離或富集要求，因此，通常的色譜/色譜聯(lián)用都是指二維色譜[27]，該方法目前也是有效解決中藥復(fù)雜物質(zhì)體系的強(qiáng)有力工具之一。魏小東[28]建立了一種基于pH調(diào)制的二維液相色譜法分析夏天無(wú)生物堿的方法，采用0.6%氨水緩沖液和乙腈為流動(dòng)相及耐強(qiáng)堿反相色譜柱進(jìn)行第一維色譜分離，采用乙腈和0.5%甲酸緩沖液為流動(dòng)相和陽(yáng)離子交換色譜柱進(jìn)行第二維色譜分離，共獲得的峰容量為6925，并通過(guò)紫外光譜和質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定了比枯枯靈、普魯托品、巴馬汀等24個(gè)生物堿成分。

2.4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法具有多種分離模式，其應(yīng)用十分廣泛。此外，有關(guān)其在中藥有效成分含量測(cè)定方面的研究也日漸增多，檢測(cè)對(duì)象包括生物堿類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、苷類(lèi)、蒽醌類(lèi)等。Mao等[29]采用微波提取-毛細(xì)管電泳法測(cè)定了夏天無(wú)中的生物堿成分，該方法在15 min內(nèi)同時(shí)定量了7種生物堿類(lèi)成分，并且應(yīng)用于8個(gè)不同產(chǎn)地批次藥材的含量分析。

3 夏天無(wú)生物堿的質(zhì)量標(biāo)志物研究

為完善中藥及產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，促進(jìn)中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，健全以《中華人民共和國(guó)藥典》為核心的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)體系，在現(xiàn)有質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制方法研究及其存在的問(wèn)題的基礎(chǔ)上，劉昌孝院士提出了中藥質(zhì)量標(biāo)志物的新概念[30]。質(zhì)量標(biāo)志物以物質(zhì)-功能為核心，以成分的特異性為主要依據(jù)，著眼于中藥材、生產(chǎn)等全過(guò)程的物質(zhì)基礎(chǔ)的動(dòng)態(tài)變化和質(zhì)量的傳遞性及溯源性，有利于建立中藥及其產(chǎn)品全程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系[31]。張笑敏等[5]在對(duì)夏天無(wú)化學(xué)成分及藥理作用研究現(xiàn)狀基礎(chǔ)上，根據(jù)質(zhì)量標(biāo)志物的新概念，從植物次生代謝物角度分析其有效成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，追溯不同類(lèi)型生物堿特異性的生源途徑，并研究其分析成分與藥效用途、藥動(dòng)學(xué)及體內(nèi)過(guò)程、傳統(tǒng)功效和藥性的相關(guān)性，揭示了中藥有效性-物質(zhì)基礎(chǔ)-質(zhì)量控制標(biāo)志性成分的關(guān)聯(lián)度。通過(guò)系統(tǒng)的文獻(xiàn)論證和預(yù)測(cè)分析，初步篩選出延胡索乙素、原阿片堿、比枯枯靈、巴馬汀、別隱品堿、四氫藥根堿等成分作為夏天無(wú)的質(zhì)量標(biāo)志物，為夏天無(wú)及其相關(guān)制劑的進(jìn)一步質(zhì)量控制提供新的參考思路。

4 結(jié)語(yǔ)與展望

如何對(duì)中藥進(jìn)行科學(xué)、有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)，一直是制約中藥現(xiàn)代化發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題之一，也是中醫(yī)藥研究的難點(diǎn)之一。本文對(duì)近年來(lái)夏天無(wú)質(zhì)量評(píng)價(jià)相關(guān)的研究文獻(xiàn)進(jìn)行了歸納總結(jié)，在夏天無(wú)整體質(zhì)量評(píng)價(jià)及與易混用品種的定性鑒別方面，高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)因其專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果直觀且設(shè)備較為普及而得到廣泛應(yīng)用。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)因同時(shí)具備色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性等優(yōu)點(diǎn)，在夏天無(wú)質(zhì)量評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)研究中具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，但因質(zhì)譜設(shè)備昂貴，尚未普及。在定量檢測(cè)方面，高效液相色譜-紫外檢測(cè)法分離效能高、分析速度快、自動(dòng)化程度高，已成為業(yè)內(nèi)主流分析手段，2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》采用該法對(duì)夏天無(wú)中鹽酸巴馬汀及原阿片堿成分進(jìn)行含量測(cè)定，但是控制指標(biāo)較為單一，未能全面涵蓋夏天無(wú)的主要藥理活性成分。中藥本身的復(fù)雜性，檢測(cè)個(gè)別指標(biāo)性成分往往不足以評(píng)價(jià)藥材整體質(zhì)量，更加難以反映其復(fù)方制劑產(chǎn)品的有效性及安全性，質(zhì)量標(biāo)志物、可全面地反映和表征中藥有效性和安全性，尤其是加強(qiáng)了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與藥材中功效相關(guān)成分的關(guān)聯(lián)性，為建立科學(xué)合理的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。此外，夏天無(wú)中含有比枯枯靈、夏無(wú)寧堿等毒性成分，在開(kāi)展夏天無(wú)及其相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)時(shí)，還需充分考慮其毒性成分并制訂相應(yīng)限量標(biāo)準(zhǔn)，以進(jìn)一步保障臨床用藥安全。

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（收稿日期：2018-08-29? 本文編輯：王? ?蕾）