8種中藥材及其免煎顆粒對2種眼表菌的抑制作用的研究

劉楠 李若溪

摘要：目的?比較8種中藥材（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）及其免煎顆粒對2種眼表菌的抑菌效果的研究。方法?根據(jù)中藥抗菌藥的相關(guān)研究，選取了8種中藥水煎劑和其相應(yīng)的免煎顆粒，取從患者眼表分離出的兩種細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌）置于血平板中，采用常規(guī)的中藥藥敏紙片瓊脂擴(kuò)散法，進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，測量抑菌圈長度，比較各組的抑菌結(jié)果。結(jié)果?黃連、五倍子抑制金黃色葡萄球菌的效果明顯好于五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲抑制金黃色葡萄球菌的效果（P<0.05）;僅五倍子對銅綠假單胞菌為中介作用;五味子、山茱萸，柴胡、杜仲對銅綠假單胞菌無明顯抑菌作用。對于相同藥物的水煎劑組和中藥免煎顆粒組，各個(gè)藥物的組間比較無明顯差異（P>0.05）;對于抑制銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的比較，每一組間，對于抑制金黃色葡萄球菌的效果明顯好于抑制銅綠假單胞菌的效果（P<0.05）。結(jié)論?（1）黃連、五味子抗菌效果最好;（2）中藥煎出液和中藥免煎顆粒的抗菌效果差距不大。

關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌;銅綠假單胞菌;中藥免煎顆粒;中藥煎出液

中圖分類號(hào)：R285.5?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2019）04-0073-03

在當(dāng)今的醫(yī)療條件和醫(yī)療水平的制約下，各種常用的抗生素在對抗菌方面的作用已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性。在醫(yī)療方面、食品衛(wèi)生方面均對人類的安全造成危害。在眼科中，細(xì)菌感染導(dǎo)致眼表炎是各種眼表手術(shù)術(shù)后最可怕的并發(fā)癥，一旦發(fā)生，會(huì)對患者造成災(zāi)難性打擊。尋求更好的辦法預(yù)防眼科手術(shù)術(shù)前眼表炎的發(fā)生，一直是眼科研究的熱點(diǎn)。中草藥作為天然的抑菌藥物，在其生長成熟過程中即不斷和細(xì)菌抗?fàn)帲虼似淠退幮院投靖弊饔枚己苄?。而現(xiàn)今的對于眼科常用的抗菌素依然以傳統(tǒng)的抗生素為主。由于長期使用，傳統(tǒng)抗生素的不良反應(yīng)以及耐藥性在日益增多。傳統(tǒng)中藥對于常見眼表菌的抑制作用的研究，在已進(jìn)行的研究中很少涉及。中醫(yī)藥對眼表菌的抑制作用不失為今后一個(gè)誘人的發(fā)展方向。

1?材料

1.1?中藥水煎劑?本實(shí)驗(yàn)所選取的中藥飲片（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）均購置于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科。

1.2?中藥顆粒劑?本實(shí)驗(yàn)所選用的中藥免煎顆粒（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）（江蘇江陰天江制藥有限公司）均購置與遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科顆粒藥局。

1.3?菌株來源?本實(shí)驗(yàn)所選用的菌株，均是于2018年3月—2018年7月來源于沈陽市第四人民醫(yī)院眼科門診及病房所收集的眼表分泌物分離出的金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌。

1.4?儀器與實(shí)驗(yàn)材料?萬古霉素藥敏紙片（Oxoid公司，含藥量10 ug）、亞胺培南藥敏紙片（Oxoid公司，含藥量30 mg）、分析天平、0.5麥?zhǔn)蠁挝坏牧蛩徜^濁度標(biāo)比濁管、MH肉湯培養(yǎng)基（濟(jì)南安貝卡有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（MMM-55L，德國）、干熱滅菌器（MMM-55L，德國）、超凈操作臺(tái)（ESCO，韓國）等。

2?方法

2.1?中藥水煎液的制備方法?參照周小楠等[a]提供的方法并進(jìn)行改良制備生藥濃度1 g/mL的中藥水煎液：用電子天平稱取干燥的中藥飲片50 g置于砂鍋中，加10倍量水（500 mL）泡過夜，武火加熱至藥液沸騰后改用文火煎30 min，4層紗布趁熱過濾，濾渣另加8倍量水，同法煎煮30 min，過濾后，合并2次濾液于同一燒杯中，混合均勻后，加熱蒸發(fā)使藥液濃縮至50 mL，后放涼至室溫，并置于50 mL容量瓶中定容，再倒入輸液瓶，蓋薄膜，壓膠塞和鋁蓋，高壓（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時(shí)間30 min）滅菌，取出放涼，即得1 mL相當(dāng)于原藥材1 g（1：1）的中藥煎劑溶液。

2.2?中藥免煎顆粒無菌溶液的制備?中藥顆粒劑溶液的制備用分析天平準(zhǔn)確稱取5種中藥顆粒劑適量（相當(dāng)于原中藥飲片50 g），分別置于燒杯中，用蒸餾水溶解，并在50 mL量筒中定容，再倒入無菌帶蓋容器中，高壓（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時(shí)間：30 min）滅菌，取出放涼即得1 mL相當(dāng)于原藥材1 g（1：1）的中藥顆粒劑溶液。

2.3?菌液的制備?將鑒定后的金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌在血平板上分純，于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后取出細(xì)菌以生理鹽水校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠞岫龋ㄏ喈?dāng)于l08 CFU/mL）以備用。

2.4?無菌濾紙片的制備?將濾紙片用打孔器打成5 mm的小紙片，放置備用。將打孔器制成的小紙片（直徑為5 mm）放入平皿中，利用高壓滅菌器（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時(shí)間：30 min）進(jìn)行高溫高壓滅菌，30min后取出放涼，即得實(shí)驗(yàn)用的無菌小紙片，放置備用。

2.5?體外抑菌試驗(yàn)的操作方法?采用藥敏紙片瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。用無菌接種環(huán)將0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木壕鶆蛲坎加贛H平板，中間選取一個(gè)抗菌藥物紙片做陽性對照（金黃色葡萄球菌萬古霉素，銅綠假單胞菌選取亞胺培南），用無菌鑷子在平板四周貼6片無菌的小紙片（5 mm），左右兩邊各3片，靜置10 min，左邊3片用校準(zhǔn)過的加樣槍加入1 g/mL中藥水煎劑溶液10 ug。右邊3片同校準(zhǔn)過的加樣槍加入1 g/mL中藥免煎顆粒溶液10 ug。于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈的直徑，分別求出其均值。

2.6?判定標(biāo)準(zhǔn)中草藥對病原菌的抑菌效果目前國內(nèi)外尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，以現(xiàn)有的同類型實(shí)驗(yàn)[1]作為判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑>20 mm為敏感，10-19 mm為中度敏感，<10 mm為不敏感。

2.7?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?本實(shí)驗(yàn)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料采用（x±s）計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，以P<0.05表示有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3?結(jié)果

根據(jù)表1顯示：黃連、五倍子對于金黃色葡萄球菌的抗菌作用較好，為敏感級(jí)別;五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁，其抗金黃色葡萄球菌效果一般，為中介級(jí)別;杜仲對于金黃色葡萄球菌的效果為耐藥級(jí)別。而對于銅綠假單胞菌的抗菌作用，僅五倍子為中介級(jí)別;黃連、金銀花、白頭翁對銅綠假單胞菌為耐藥級(jí)別;五味子、山茱萸，柴胡、杜仲對銅綠假單胞菌無明顯抑菌作用。對于相同藥物的水煎劑組和中藥免煎顆粒組，各個(gè)藥物的組間比較無明顯差異（P>0.05）。對于抑制銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的比較，每一組間，對于抑制金黃色葡萄球菌的效果明顯好于抑制銅綠假單胞菌的效果（P<0.05）。

4?討論

本實(shí)驗(yàn)所采用的中藥，以清熱解毒藥，以及收澀藥物居、[FQ（28*2。175mm，X，DY-W]多，且基本為常用中藥，不良反應(yīng)相對較少的中藥。五倍子黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲作為中醫(yī)科常用的中藥材，廣泛應(yīng)用于各個(gè)科室的不同藥用組方之中。五倍子具有“斂肺降火、澀腸固精、斂汗止血、收濕斂瘡”之功效，擅長治療肺虛久咳，久瀉久痢，自汗盜汗內(nèi)傷出血等疾病，最具收澀作用。黃連功效為“清熱燥濕、瀉火解毒”，善清心胃之火，除中焦?jié)駸幔瑸橹螡駸峄鹩糁?，治療中焦?jié)駸嶂?。五味子具有“收斂固澀、益氣滋腎寧心、生津”之功效，五味子酸澀質(zhì)潤，斂補(bǔ)兼?zhèn)?，上能斂肺止咳平喘，下能滋腎澀精止遺，內(nèi)能生津?qū)幧?，外能固表收斂止汗，為收澀之要藥。金銀花具有“清熱解毒，疏散風(fēng)熱”之功效，甘寒質(zhì)輕，為清解疏散之品。山茱萸具有“補(bǔ)益肝腎、收斂固澀”的功效，既能補(bǔ)腎陽，又能補(bǔ)腎陰，為陰陽雙補(bǔ)之藥。柴胡具有“解表退熱，疏肝解郁，升舉陽氣”的功效，是疏散少陽半表半里之邪和解退熱之要藥。白頭翁具有“清熱解毒，涼血止痢”之功效，為治熱毒血痢之要藥。杜仲具有“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎”的功效，為治腎虛及胎動(dòng)不安的要藥。本實(shí)驗(yàn)所采用的幾種中藥，在眼科常見病中，做為口服中藥煎出液的應(yīng)用比較常見，用于治療各種原因?qū)е碌牟煌C型的眼科疾病。

本實(shí)驗(yàn)中采用中藥免煎顆粒和中藥煎出液兩種藥用液體，其藥理效果雖然有所差異，不過每一組間的差異均不大（P>0.05），可見在對于中藥免煎顆粒和中藥煎出液來說，其對于金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑制作用基本相似，無顯著差異。但本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與以往文獻(xiàn)記載[2]，所得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不一致，考慮到本實(shí)驗(yàn)的中藥煎出液是在本實(shí)驗(yàn)所處的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)條件下獲得，受諸多未知不可控制因素影響，也許會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。已有文獻(xiàn)中提及[3]，不同的中藥液煎出方法對中藥對于疾病的療效也有很大影響。

現(xiàn)今社會(huì)飛速發(fā)展，生活節(jié)奏日益加快，人們對于傳統(tǒng)方式煎出中藥液感到費(fèi)力且麻煩，中藥免煎顆粒隨之產(chǎn)生。中藥免煎顆粒采用與傳統(tǒng)中藥相一致的采收方法、炮制方法，經(jīng)過現(xiàn)代化方法的加工、干燥、濃縮等工藝形成了免煎顆粒這一特殊的“飲片”。其功效主治以及性味歸經(jīng)、寒熱屬性與原飲片基本相同。但在免煎顆粒加工、生產(chǎn)運(yùn)輸過程中，其性狀等客觀情況有無改變不得而知，這也需要中醫(yī)藥的不斷創(chuàng)新和發(fā)展來探究這一不同。

但以上8種中藥，在眼科應(yīng)用中極為少見，且在已有的眼科滅菌藥之中，基本以西醫(yī)的抗生素居多，應(yīng)用中藥以及中藥單體來消除眼表常見菌的報(bào)道，甚少有文獻(xiàn)中提及。對于用于中醫(yī)藥方法預(yù)防眼表炎、眼表常見菌的感染，在已有文獻(xiàn)中提及更加少。眼表感染做為眼科最為嚴(yán)重的眼表并發(fā)癥，近年來對于眼表炎的預(yù)防隨著祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥的日益完善及發(fā)展，中醫(yī)藥在日常疾病中的應(yīng)用日益廣泛，發(fā)展眼科中醫(yī)藥手段的抗菌方法不失為一個(gè)可開發(fā)且又誘人的前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃玲，林居純，馬馳，等.12種中藥的體外抑菌試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（6）：50 52.

[2]王育紅，李風(fēng)學(xué)，張志清，等.24種中藥水煎劑與免煎顆粒劑對臨床菌株的體外抑菌作用[J].江蘇中醫(yī)藥，2006，27（4）：52 54.

[3]李學(xué)林，陳天朝，張曉東，等.不同煎藥方法對中藥煎藥質(zhì)量的影響[J].中醫(yī)雜志，2004，45（1）：71.