地拉羅司有關(guān)物質(zhì)分析方法研究

魏 娜，孟文娟，何 雷，王珍珍

(江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 連云港 222000)

過多的鐵沉積在人體組織器官，會導(dǎo)致細(xì)胞損傷和器官功能障礙，其發(fā)病原因可分為原發(fā)和繼發(fā)兩種。原發(fā)性鐵過載由遺傳因素異常導(dǎo)致，見于原發(fā)性血色病。臨床上以繼發(fā)性鐵過載多見，主要是由于長期反復(fù)輸血等各種原因?qū)е聼o效紅細(xì)胞生成及肝病引起鐵代謝障礙等造成[2]。地拉羅司是由瑞士諾華制藥公司(Novartis Pharma Schweiz AG)研究開發(fā)的鐵螯合劑產(chǎn)品，它是一種三齒狀鐵螯合劑，可與三價鐵離子以2∶1比例形成復(fù)合物，從糞便排泄，從而降低人體中鐵的含量[3]。該品種目前暫未收載于2015版中國藥典、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)及英國藥典(BP)中，本文對主流合成路線下可能產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行分析，對地拉羅司的有關(guān)物質(zhì)方法進(jìn)行了開發(fā)優(yōu)化，采用確定的分析方法進(jìn)行方法驗證。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，Agilent；SE602F電子天平，奧豪斯；XS105DU電子分析天平，梅特勒-托利多；S220酸度計，梅特勒-托利多；乙二胺四乙酸二鈉(分析純)；磷酸(分析純)；乙腈(色譜純)；純化水。

2 雜質(zhì)分析

目前主流的地拉羅司合成方法以水楊酸為原料，經(jīng)與二氯亞砜氯化、水楊酰胺脫水環(huán)合、4-羧基苯肼開環(huán)重排得到地拉羅司[4]。地拉羅司中可能存在的工藝雜質(zhì)主要有起始原料、中間體。起始原料有水楊酸、水楊酰胺、4-肼基苯甲酸(4-肼基苯甲酸為潛在基因毒性物質(zhì)，需用靈敏度更高的方法進(jìn)行控制)，中間體為2-(2-羥基苯基)-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮。取地拉羅司適量，分別在酸(1mol/L鹽酸)、堿(1mol/L氫氧化鈉)、氧化(30%H2O2)、熱解(90℃水浴)、高溫(105℃)和光照(4500lx)各條件下進(jìn)行破壞，采用確定的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明本品在酸、堿、氧化、高溫、熱解、光照條件下均較穩(wěn)定，無明顯的降解雜質(zhì)。

3 檢測方法開發(fā)

在二極管陣列檢測器上對地拉羅司及雜質(zhì)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)成品及主要雜質(zhì)的特征吸收為250nm。本品為鐵離子螯合劑，會與檢測系統(tǒng)中可能存在的鐵離子螯合，對樣品的檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。體系中鐵離子的來源主要有流動相、色譜儀管道和色譜柱，為了消除微量鐵離子，在流動相中加入乙二胺四乙酸二鈉，利用乙二胺四乙酸二鈉與金屬離子的絡(luò)合作用消除對樣品檢測產(chǎn)生的干擾。

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑色譜柱，檢測波長250nm，流動相體系為乙二胺四乙酸緩沖液-水-乙腈，對流動相的pH值和色譜柱柱溫進(jìn)行篩選，結(jié)果表明流動相的pH值為2.0，柱溫60℃時各雜質(zhì)的分離是最為理想的。對梯度進(jìn)行調(diào)整，最終確定的色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速為每分鐘1.0mL；檢測波長為250nm；柱溫為60℃。流動相A為0.1mg/mL乙二胺四乙酸緩沖液(pH值=2.0)-水-乙腈(100∶800∶100)，流動相B為0.1mg/mL乙二胺四乙酸緩沖液(pH值=2.0)-乙腈(100∶900)。按表1進(jìn)行梯度洗脫。

表1 洗脫進(jìn)行梯度

4 結(jié)果與討論

(1)在確定的色譜條件下，對各已知雜質(zhì)進(jìn)行檢測，考察方法的專屬性，各雜質(zhì)與主峰的分離度均符合規(guī)定。

(2)地拉羅司及各雜質(zhì)在0.20～2.0μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r均大于0.999。

(3)以各雜質(zhì)限度(0.1%樣品測定濃度)為基準(zhǔn)100%，分別配制成含雜質(zhì)10%、50%、100%和200%的溶液，平均回收率在91.2%～101.3%之間，該方法檢測雜質(zhì)的準(zhǔn)確度良好。

(4)地拉羅司及各雜質(zhì)的檢測限≤0.01%(與檢測濃度比值)，定量限≤0.02%(與檢測濃度比值)，該方法檢測雜質(zhì)的靈敏度良好。

(5)微調(diào)乙二胺四乙酸緩沖液pH值、柱溫和起始比例，各雜質(zhì)與主峰的分離度均符合規(guī)定，該方法的耐用性良好。

(6)由不同分析人員在不同儀器設(shè)備上，不同時間進(jìn)行檢測，結(jié)果并無差異，表明該方法重現(xiàn)性良好。