多基因型黑果枸杞高效快繁體系的建立

戴逢斌 劉麗萍 李艾佳 饒書(shū)培 陳金煥

（北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 林木育種國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，北京 100083）

黑果枸杞（Lycium ruthenicumMurr.）為茄科枸杞屬多年生多棘刺灌木［1］。果實(shí)味甘、性平，富含多種蛋白質(zhì)、維生素、微量元素及礦物質(zhì)，尤其富含天然原花青素，可預(yù)防并治療多種疾病，可入藥、制茶、防風(fēng)［2-4］。黑果枸杞植株具有較強(qiáng)的抗逆性，耐鹽堿、抗寒、抗旱，可用于鹽堿地防風(fēng)固沙、水土保持及綠化，是集生態(tài)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值為一體的野生灌木樹(shù)種，在生態(tài)建設(shè)和區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展中有巨大的應(yīng)用前景［5］。黑果枸杞主要分布在我國(guó)的西北部，集中在青海柴達(dá)木盆地（格爾木、都蘭、德令哈等地區(qū)）、甘肅河西走廊（瓜洲、玉門(mén)、靖遠(yuǎn)等地區(qū)）、內(nèi)蒙古的額濟(jì)納旗、阿拉善左旗和右旗以及新疆塔里木盆地（沙雅、阿克蘇、庫(kù)爾勒、巴楚）等地，各自然群體具有豐富的表型多樣性和遺傳多樣性［6-9］。豐富的表型多樣性和遺傳多樣性是遺傳育種的基礎(chǔ)，因此，保護(hù)其天然遺傳資源對(duì)黑果枸杞的遺傳多樣性研究具有重要意義。

近年來(lái)，對(duì)黑果枸杞的野蠻采摘導(dǎo)致其野生資源破壞嚴(yán)重，野生資源瀕臨滅絕，對(duì)黑果枸杞野生資源的合理保護(hù)與利用已迫在眉睫［10］。黑果枸杞野生資源量在西北地區(qū)極為豐富，根蘗育苗、種子育苗、嫩枝扦插育苗都極為容易，組織培養(yǎng)體系建立可能更有利于轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建。根蘗育苗需提前截?cái)嘀鞲?，待春季使其萌發(fā)新苗，再挖取主根旁萌發(fā)的根蘗苗移栽，且移栽過(guò)程中多需攜帶部分母根才能成活，因此該方法對(duì)母株的影響較大，往往影響母株的正常生長(zhǎng)［11］。種子育苗由于對(duì)溫度要求較高，在播種前需進(jìn)行種子處理，且為提高發(fā)芽率和幼苗成活率，需安裝噴灌設(shè)施，且溫室中種植的黑果枸杞由于莖葉柔嫩，易受到大青蟲(chóng)和螻蛄的危害［12］。扦插育苗時(shí)間受季節(jié)氣候的影響較大，一般于4月中下旬萌發(fā)前或秋季進(jìn)行扦插［13］。植物組織培養(yǎng)技術(shù)既可以保留植株原有的基因型和優(yōu)良性狀，又可將優(yōu)良單株快速繁殖成無(wú)性系，迅速在生產(chǎn)應(yīng)用中推廣［14］。因此，對(duì)黑果枸杞的組培快速繁殖研究尤其重要。

目前，對(duì)黑果枸杞的組織培養(yǎng)快繁研究已取得一定進(jìn)展，包振華等［15］發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素占比高時(shí)易產(chǎn)生愈傷組織，不定芽數(shù)量減少，葉片多，不適合繼代，且1/2MS的生根率高于MS。杜敏智［16］采用大果黑果枸杞的嫩莖段為材料，發(fā)現(xiàn)ZT對(duì)大果黑果枸杞增殖培養(yǎng)的效果要顯著優(yōu)于6-BA，且在大果黑果枸杞的增殖培養(yǎng)過(guò)程中，提高光照強(qiáng)度、增加光照時(shí)間，或增加培養(yǎng)基中瓊脂濃度，可有效減少組培苗玻璃化程度。孫曉紅［17］以黑果枸杞成熟葉片為外植體，誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽的分化，發(fā)現(xiàn)適當(dāng)增加6-BA會(huì)增加愈傷組織誘導(dǎo)率和分化率，但玻璃化也更加明顯。

雖然目前已有部分關(guān)于黑果枸杞組織培養(yǎng)的研究報(bào)道，但都局限于單一種源（品種）培養(yǎng)條件探索，因此，常出現(xiàn)在各階段培養(yǎng)基條件的摸索中，不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)所采集的不同種質(zhì)苗采用同一培養(yǎng)基配方時(shí)，僅有部分或幾乎都不能正常生長(zhǎng)，給黑果枸杞的工廠化育苗帶來(lái)不便。此外，大部分報(bào)道中都提到不同程度的玻璃化的現(xiàn)象，說(shuō)明玻璃化問(wèn)題沒(méi)有得到根本解決。

本試驗(yàn)以7個(gè)不同種源地的黑果枸杞為研究材料，通過(guò)不同培養(yǎng)基的設(shè)置，分析不同濃度生長(zhǎng)素及細(xì)胞分裂素在黑果枸杞生根及分化過(guò)程中的影響，旨在提供一種適用于黑果枸杞不同種質(zhì)資源、具有普遍適用性且操作過(guò)程簡(jiǎn)單方便、成苗繁殖速度快、成活率高的高效快速繁殖方法，為黑果枸杞的后續(xù)功能研究及大規(guī)模育種奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

從新疆阿克蘇（AKeSu，簡(jiǎn)寫(xiě)為AKS）、庫(kù)爾勒（KuErLe，簡(jiǎn)寫(xiě)為KEL）、巴楚（BaChu，簡(jiǎn)寫(xiě)為BC）、沙雅（ShaYa，簡(jiǎn)寫(xiě)為SY）和青海格爾木（GeErMu，簡(jiǎn)寫(xiě)為GEM）、大格勒（DaGeLe，簡(jiǎn)寫(xiě)為DGL）以及內(nèi)蒙古阿拉善左旗（ALaShan，簡(jiǎn)寫(xiě)為ALS）（名稱下同）等7個(gè)地區(qū)收集到的不同種源的野生黑果枸杞種子及葉片。

1.2 方法

1.2.1 種源親緣關(guān)系鑒定 通過(guò)采集7個(gè)種源黑果枸杞的葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序并鑒定了黑果枸杞的EST-SSR位點(diǎn)，根據(jù)黑果枸杞SSR位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物，提取黑果枸杞葉片DNA進(jìn)行擴(kuò)增，從中選取條帶清晰、多態(tài)性良好的引物，在其5′端添加熒光后重新合成熒光引物，重新擴(kuò)增并進(jìn)行毛細(xì)管電泳，根據(jù)毛細(xì)管電泳結(jié)果對(duì)7個(gè)種源地進(jìn)行遺傳多樣性分析。

1.2.2 外植體消毒 將不同地區(qū)收集到的野生黑果枸杞種子，挑選飽滿個(gè)大、形狀均一的一定數(shù)量種子，裝入無(wú)菌的2 mL離心管，先用2 mL 75%酒精消毒30 s，用無(wú)菌蒸餾水沖洗2-3次，然后用2 mL 70%的84消毒液消毒6 min，蒸餾水再?zèng)_洗4-5次，吸干水分，用已滅菌的鑷子接種于Murashige和Skoog（MS）基本培養(yǎng)基（MS 4.43 g/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L，pH 5.8-6.0），制備無(wú)菌苗，長(zhǎng)出的小苗待用。

1.2.3 培養(yǎng)條件 將黑果枸杞材料放置于北京林業(yè)大學(xué)林木育種國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室組培室，培養(yǎng)溫度為（25±2）℃，光周期16 h/8 h（晝／夜），光照強(qiáng)度3 000 lx。

1.2.4 嫩莖段誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選 種子萌發(fā)后，待幼苗長(zhǎng)至5 cm時(shí)，將其剪成約1 cm的莖段，去除葉片，分別轉(zhuǎn)接至含不同濃度的6-BA和IAA的MS分化培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)分化叢生芽。以MS+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L+6-BA 0.1 mg/L+IAA 0.2 mg/L（單位下同）為啟動(dòng)培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，根據(jù)誘導(dǎo)情況，在此培養(yǎng)基基礎(chǔ)上調(diào)整不同濃度的激素組合（表1），選出適于不同種源黑果枸杞莖段誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基。

表1 莖段誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的篩選設(shè)置

1.2.5 葉片誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選 選取生長(zhǎng)良好的不同種源和培養(yǎng)基，挑選成熟的葉片，接種于含不同6-BA濃度的培養(yǎng)基上。每個(gè)種源接5瓶，每瓶接5-6個(gè)生長(zhǎng)旺盛的葉片。所用培養(yǎng)基為MS+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L及MS+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。

1.2.6 莖段誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的篩選 選取長(zhǎng)勢(shì)良好、生長(zhǎng)一致的種源和株系，將不定芽或幼苗剪成約2 cm，且?guī)в?-2個(gè)小葉片的莖段，分別接種于不同的生根培養(yǎng)基中，每個(gè)種源接種3株×8瓶，共24株。研究不同組合的激素對(duì)黑果枸杞誘導(dǎo)生根的影響，一周后統(tǒng)計(jì)生根情況，并計(jì)算生根率。生根率（%）=生根幼苗數(shù)/接種總幼苗數(shù)。根據(jù)已有文獻(xiàn)報(bào)道，適宜誘導(dǎo)黑果枸杞生根的培養(yǎng)基為MS+IBA 0.6 mg/L+NAA 0.4 mg/L［17］，但根據(jù)包振華等［15］研究，培養(yǎng)基中添加1/2MS的平均生根率高于MS和1/4MS，因此本研究以此激素組合為啟動(dòng)培養(yǎng)基，并添加1/2MS粉（2.18 g/L），根據(jù)不同種源的黑果枸杞生根情況，分別改進(jìn)不同濃度的激素組合，探索適于不同種源黑果枸杞生根的培養(yǎng)基（表2）。

表2 莖段誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的篩選設(shè)置

2 結(jié)果

2.1 種源親緣關(guān)系鑒定

根據(jù)前期基于黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組序列的EST-SSR標(biāo)記開(kāi)發(fā)分析，通過(guò)毛細(xì)管電泳，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物峰值進(jìn)行分析，構(gòu)建了7個(gè)種源地聚類分析圖（圖1），阿克蘇種源與庫(kù)爾勒種源的黑果枸杞在遺傳上相近，格爾木與大格勒遺傳距離較近，巴楚與沙雅相近，并且與格爾木、大格勒的遺傳距離較其他3個(gè)種近，而內(nèi)蒙古的阿拉善獨(dú)立為一支，沒(méi)有與之最相近的種源地。

圖1 7個(gè)黑果枸杞種源地聚類分析圖

2.2 嫩莖段誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選

在篩選嫩莖段誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基過(guò)程中，啟動(dòng)培養(yǎng)基MS+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L+6-BA 0.1 mg/L+IAA 0.2 mg/L分化前期有明顯的玻璃化傾向，后期幾乎所有莖段分化的不定芽均嚴(yán)重玻璃化，葉片肥厚，水分含量大，生長(zhǎng)停滯（表3）。

表3 不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)莖段分化叢生芽的比較

通過(guò)增加IAA濃度的方式，達(dá)到降低6-BA在培養(yǎng)基中激素比例的目的，6 d時(shí)部分基因型有芽點(diǎn)長(zhǎng)出，但后期莖段誘導(dǎo)分化出的不定芽仍然嚴(yán)重玻璃化；培養(yǎng)基中降低6-BA濃度，10 d時(shí)所有莖段表面分化出的不定芽小葉正常，30和45 d時(shí)，發(fā)現(xiàn)不定芽與前期相比，大小保持在剛分化狀態(tài)，生長(zhǎng)緩慢，但無(wú)玻璃化；

增加蔗糖濃度，培養(yǎng)6 d時(shí)，發(fā)現(xiàn)莖段表面已分化出綠色的小芽點(diǎn)，12 d后，芽點(diǎn)已發(fā)育成很小的不定芽，但有明顯的玻璃化傾向；增加瓊脂濃度，分化情況和增加蔗糖時(shí)類似，雖然能分化出不定芽，但有較明顯的玻璃化傾向；蔗糖和瓊脂濃度均增加時(shí)，能誘導(dǎo)出不定芽，但是玻璃化現(xiàn)象依然存在。增加瓊脂濃度，依然加入0.1 mg/L 6-BA，不添加IAA，培養(yǎng)5 d時(shí)，莖段表面有綠色的小芽點(diǎn)生成，8 d時(shí)芽點(diǎn)已繼續(xù)分化為小的成形的不定芽，所有基因型也無(wú)玻璃化出現(xiàn)，培養(yǎng)基穩(wěn)定，后期可以長(zhǎng)成正常的叢生芽。在前面的基礎(chǔ)上增加6-BA濃度至0.2 mg/L，培養(yǎng)4 d時(shí)，有小芽點(diǎn)生成，但是生長(zhǎng)緩慢，后期葉片肥厚，玻璃化嚴(yán)重，生長(zhǎng)停滯。繼續(xù)增加6-BA濃度至0.3 mg/L，雖能誘導(dǎo)出不定芽，但后期也存在嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象。

2.3 葉片誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選

先以新疆的沙雅（SY）、阿克蘇株系2（AKS-L2）、阿克蘇株系3（AKS-L3）的成熟葉片作為代表材料，接種30 d，可以看到部分葉片傷口處愈傷組織分化出不定芽，還有很多即將分化成不定芽的芽點(diǎn)（圖2）。45 d時(shí)統(tǒng)計(jì)芽誘導(dǎo)情況（表4），在得到更多的種源材料后，發(fā)現(xiàn)在6-BA濃度為1.0 mg/L時(shí)均能分化出不定芽，其中GEM、DGL、KEL、BC均分化良好，內(nèi)蒙古的ALS分化效果次之。

表4 葉片誘導(dǎo)不定芽分化結(jié)果

圖2 不同種源黑果枸杞葉片分化30 d不定芽生長(zhǎng)情況

2.4 莖段誘導(dǎo)生根

為觀察植株生根情況，先以植物凝膠作為凝固劑。在1/2MS+蔗糖30 g/L+植物凝膠2 g/L+IBA 0.6 mg/L+NAA 0.4 mg/L的培養(yǎng)基中，以阿拉善（ALS）、沙雅（SY）、大格勒（DGL）、庫(kù)爾勒（KEL）、阿克蘇株系1（AKS-L1）作為種源，在接種20 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根情況，發(fā)現(xiàn)所有黑果枸杞植株基部只膨大形成愈傷，不生根。因此，該培養(yǎng)基并不適合黑果枸杞的生根。

對(duì)于1/2MS+蔗糖30 g/L+植物凝膠2 g/L+IBA（0.2、0.25、0.4、0.5、0.75、0.8 mg/L），以添加不同濃度梯度IBA作誘導(dǎo)激素，以格爾木（GEM）種源為材料，培養(yǎng)10 d后統(tǒng)計(jì)生根情況（表5）。接種的所有莖段生根率極低，莖段基部有膨大長(zhǎng)成的愈傷組織。培養(yǎng)20 d時(shí)，大部分都還未生根，莖段基部只膨大長(zhǎng)成愈傷。30 d時(shí)，發(fā)現(xiàn)只有少數(shù)莖段產(chǎn)生新生根，且具有明顯的偶然性。添加0.2、0.25、0.4、0.5、0.75和0.8 mg/L濃度的IBA，其生根率依次為36%、8.33%、4.17%、4.16%、4.16%和2.5%。總之，在這幾類培養(yǎng)基中，黑果枸杞生根啟動(dòng)時(shí)間明顯延遲，即使生根，生根數(shù)量也稀少，且長(zhǎng)勢(shì)較弱。因此，影響生根的可能的因素仍需要進(jìn)一步深入探究。

表5 20 d時(shí)不同IBA濃度下GEM種源黑果枸杞植株生根情況

對(duì)于1/2MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.5 g/L+IBA 1 mg/L組合，以阿克蘇株系1（AKS-L1）、阿克蘇株系2（AKS-L2）、阿克蘇株系3（AKS-L3）、阿克蘇株系7（AKS-L7）、大格勒（DGL）、沙雅（SY）等6個(gè)種源為材料，培養(yǎng)13 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率（表6），各種源或同一種源的不同株系無(wú)菌苗均有生根，但生根率不高，在6%-30%。

表6 IBA濃度為1 mg/L時(shí)各種源生根情況

在1/2MS+蔗糖30g/L+瓊脂7.5 g/L+IBA（0.1、0.25 mg/L）兩種組合下，根據(jù)種源聚類關(guān)系分別以4個(gè)具有代表性的阿拉善（ALS）、沙雅（SY）、格爾木（GEM）、阿克蘇株系3（AKS-L3）種源為材料，將生長(zhǎng)健壯的不定芽轉(zhuǎn)接至新的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中。發(fā)現(xiàn)植株地上部分開(kāi)始逐漸長(zhǎng)高，培養(yǎng)5 d時(shí)，大部分植株從底部開(kāi)始生根；14 d時(shí)，當(dāng)IBA為0.1mg/L時(shí)（表7），接種的幾個(gè)種源植株均有生根，根長(zhǎng)在0.2-1 cm不等。21 d時(shí)，根明顯伸長(zhǎng)，且有明顯的根毛。在IBA濃度為0.25 mg/L時(shí)（表8），各種質(zhì)苗莖段基部均沒(méi)有膨大，直接生根。相比較而言，IBA濃度為0.25 mg/L時(shí)生根率更高，效果更好，且生根早，5 d左右即開(kāi)始生根，20 d后，幾乎所有接種莖段均能生根。

表7 IBA濃度為0.1 mg/L時(shí)各種源生根情況

表8 IBA濃度為0.25 mg/L時(shí)各種源生根情況

3 討論

在嫩莖段誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選過(guò)程中，針對(duì)啟動(dòng)培養(yǎng)基MS+6-BA 0.1 mg/L +IAA 0.2 mg/L中出現(xiàn)的玻璃化現(xiàn)象，本研究采取了8種措施以減輕玻璃化。結(jié)果顯示，增加IAA濃度對(duì)莖段誘導(dǎo)叢生芽玻璃化問(wèn)題，無(wú)明顯緩解甚至加重玻璃化；采用降低6-BA濃度的方法一定程度上對(duì)玻璃化的減輕有一定效果，但是，莖段誘導(dǎo)分化產(chǎn)生芽的時(shí)間明顯延遲，并且，芽后期很難繼續(xù)長(zhǎng)大；改變蔗糖或瓊脂的濃度雖能誘導(dǎo)出不定芽，但生長(zhǎng)后期還是存在不同程度的玻璃化現(xiàn)象。因此，該6-BA和IAA激素濃度組合并不適合作為莖段誘導(dǎo)分化。

增加瓊脂濃度（7 g/L）且分別單獨(dú)添加0.2 mg/L 6-BA和0.3 mg/L 6-BA時(shí)，均能誘導(dǎo)出不定芽，但又都存在不同程度的玻璃化現(xiàn)象，培養(yǎng)基不穩(wěn)定。單獨(dú)加入0.1 mg/L 6-BA時(shí)，8 d左右，可以看到有芽點(diǎn)長(zhǎng)出，沒(méi)有愈傷，也無(wú)玻璃化問(wèn)題，后期可以生長(zhǎng)為成正常的小芽，培養(yǎng)基穩(wěn)定，重復(fù)性好，因此，該濃度適合莖段誘導(dǎo)叢生芽，培養(yǎng)基條件為MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7 g/L+6-BA 0.1 mg/L。

在篩選葉片誘導(dǎo)不定芽分化的培養(yǎng)基過(guò)程中，較高濃度的細(xì)胞分裂素可能對(duì)叢生芽的增殖具有明顯的促進(jìn)作用［19］。本研究中先以新疆的2個(gè)材料SY、AKS作為代表，以6-BA濃度為變量，研究了不同濃度的6-BA對(duì)成熟黑果枸杞葉片直接誘導(dǎo)分化成苗的影響，在分化30 d時(shí)，0.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基中，3種基因型的葉片均能誘導(dǎo)出不定芽，其中SY的不定芽數(shù)最多，生長(zhǎng)也最旺盛；當(dāng)6-BA調(diào)為1.0 mg/L時(shí)，AKS-L2及SY均能分化出不定芽，但AKS-L3未能分化出芽，猜測(cè)6-BA濃度過(guò)高抑制了葉片的分化。因此，最適宜多基因型葉片直接誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基配方為蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L+MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L，后又用其余5個(gè)種源進(jìn)行了驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)除了種源地相距較遠(yuǎn)的內(nèi)蒙古ALS，其余均能良好分化。

在莖段誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的篩選過(guò)程中，為方便觀察枸杞生根情況，最先選用透明植物凝膠作為MS培養(yǎng)基中的凝固劑，對(duì)不同種源嫩莖段進(jìn)行生根培養(yǎng)。結(jié)果顯示，IBA 0.6 mg/L+NAA 0.4 mg/L組合在接種20 d時(shí)，幾乎所有種源的黑果枸杞植株基部只膨大，不生根；然后，仍以植物凝膠做凝固劑，以GEM作材料，以不同濃度梯度IBA（0.2、0.25、0.4、0.5、0.75和0.8 mg/L）做誘導(dǎo)激素繼續(xù)摸索誘導(dǎo)生根的條件，結(jié)果顯示，設(shè)置不同濃度IBA梯度后，依然是大多數(shù)只出現(xiàn)基部膨大，少數(shù)種源可以生根，生根數(shù)量也稀少。

針對(duì)莖段基部只膨大不生根的問(wèn)題，推斷可能是培養(yǎng)基中使用的植物凝膠影響了培養(yǎng)基的凝固狀態(tài)，從而影響到植株生根。因此，改用瓊脂粉代替植物凝膠，因有報(bào)道顯示黑果枸杞在組培時(shí)使用IBA的生根率更高［20］，仍然只用IBA激素。將IBA濃度范圍擴(kuò)大至1 mg/L，結(jié)果顯示，各種源均有不同比率的生根（表6），為6%-30%，生根率很低。根據(jù)包振華等［15］的研究，較低濃度IBA對(duì)植株生根有一定的誘導(dǎo)作用，且1/2MS培養(yǎng)基中組培苗生根率和平均生根數(shù)相對(duì)于MS培養(yǎng)基及1/4MS培養(yǎng)基均比較高，因此，又以IBA濃度為0.1 和0.25 mg/L 2個(gè)濃度作為比較，在這兩種情況下，各種源均可以在莖段基部直接生根，且生根率較高，IBA含量為0.25 mg/L時(shí)生根率更高（表8），且生根更早，5 d左右即開(kāi)始生根，20 d后各種源接種莖段生根率均接近100%，說(shuō)明使用0.25 mg/L IBA誘導(dǎo)生根效果更好，因此，具有不同種源誘導(dǎo)生根普適性的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.5 g/L+IBA 0.25 mg/L。

4 結(jié)論

獲得適于多基因型黑果枸杞嫩莖段誘導(dǎo)不定芽分化、葉片誘導(dǎo)不定芽以及莖段誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基，成功建立了適用于不同種源多基因型的快速繁殖體系，使得在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的不同種質(zhì)來(lái)源的黑果枸杞幼苗成為可能。