高核苷酸酵母水解物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的影響

潘聰，李占東，苑鵬，張大力，段盛林，夏凱，周文萱，趙可心，于偉厚

1(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春，130118) 2(中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司，北京，100015) 3(大連雙迪科技股份有限公司，大連，116635)4(功能主食創(chuàng)制與慢病營(yíng)養(yǎng)干預(yù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京，100015) 5(吉林工程技術(shù)師范學(xué)院 食品工程學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春，130052)

我國(guó)已逐漸步入老齡化社會(huì)，伴隨著年齡的增長(zhǎng)，人體的基礎(chǔ)代謝和消化能力會(huì)逐漸下降，最終導(dǎo)致免疫力下降，睡眠障礙等各種常見(jiàn)的健康問(wèn)題。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充不僅可以為人體提供熱量、蛋白質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還直接參與機(jī)體代謝，是人體免疫功能的物質(zhì)基礎(chǔ)[1-2]。免疫營(yíng)養(yǎng)不僅可以防止?fàn)I養(yǎng)缺乏，還能通過(guò)特定方式來(lái)刺激免疫細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，通過(guò)調(diào)控細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放，減輕過(guò)度的炎癥反應(yīng)[3-4]。

炎癥是伴隨很多疾病狀態(tài)的一種共有的病理現(xiàn)象，如糖尿病、高血脂等疾病均與炎癥反應(yīng)有一定的關(guān)聯(lián)。巨噬細(xì)胞是主要的炎癥細(xì)胞，當(dāng)其受到外界抗原(如LPS)刺激時(shí)會(huì)釋放白介素-6、腫瘤壞死因子-α等一系列炎性細(xì)胞因子，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)和造成組織損傷[5]。炎癥是機(jī)體對(duì)感染、組織損傷及傷害性刺激等做出的保護(hù)性反應(yīng)[6]。已發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)與核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、MARK、p38信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子STAT-3等信號(hào)通路相關(guān)，通過(guò)炎癥信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子篩選抗炎藥物是研究的重要手段[7]。

酵母水解物(yeast hydrolyzate,YH)也稱復(fù)合酵母，是采用純培養(yǎng)食用酵母(Saccharomycescerevisiae)利用內(nèi)源酶及外源酶水解，充分釋放核酸、小肽等功能成分酶解自溶并經(jīng)分離提取而獲得的氨基酸、肽、多肽等酵母細(xì)胞中的可溶性成分。高核苷酸酵母水解物(high nucleotide yeast hydrolyzate,HNYH)富含核酸、核苷酸(AMP、CMP、GMP、UMP、IMP)、小肽、消化酶、游離氨基酸和豐富的B族維生素及酵母細(xì)胞壁[8-9]。核苷酸具有多種生物學(xué)活性，在脂類、糖類、能量代謝及蛋白質(zhì)生物合成中起著重要的作用[10]。據(jù)報(bào)道,酵母核苷酸具有抗氧化,增強(qiáng)機(jī)體免疫力,維持機(jī)體胃腸道功能等功能，促進(jìn)機(jī)體損傷修復(fù),降低細(xì)胞凋亡,抗炎等功能活性。當(dāng)經(jīng)過(guò)胃腸道時(shí)，小分子肽、氨基酸可直接被吸收。核苷酸作為核酸的組成單位，幾乎參與了體內(nèi)所有的代謝過(guò)程,它是體內(nèi)許多酶和輔酶的重要組成成分，在細(xì)胞物質(zhì)能量代謝和功能調(diào)節(jié)中起重要作用[11-14]。

高核苷酸酵母水解物是一種新型、綠色、富含多種功能性成分的食品原料，具有很大的研究?jī)r(jià)值，因此，本研究通過(guò)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7炎癥模型，初步探討了高核苷酸酵母水解物的抗炎作用，提高免疫力的功能活性，為高核苷酸酵母水解物的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

高核苷酸酵母水解物,大連珍奧生物技術(shù)有限公司提供,蛋白含量61.95%，NaCl 0.2%，總核苷酸含量13.56%，其中AMP 0.049%、CMP 2.17%、GMP 3.39%、UMP 3.54%、IMP 4.42%；小鼠巨噬細(xì)胞株(RAW264.7)，由中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院保存；DMEM(dulbecco’s modified eagle medium)培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)、平衡鹽緩沖液(hank’s balanced salt solution，HBSS)、DMEM無(wú)糖培養(yǎng)基、胎牛血清(fetal calf serum,FBS)，美國(guó)Gibco；噻唑蘭(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenylterazolium bromide，MTT)，脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)，美國(guó)Sigma化學(xué)公司；NO試劑盒、腫瘤壞死因子-α試劑盒、白細(xì)胞介素-6試劑盒、白細(xì)胞介素-1β試劑盒、細(xì)胞核蛋白和漿蛋白抽提試劑盒、山羊抗鼠IgG/HRP二抗、山羊抗兔IgG/HRP二抗、鼠抗β-actin單克隆抗體，碧云天生物技術(shù)有限公司；β-actin、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6引物合成，英濰捷基貿(mào)易有限公司；兔抗iNOS單克隆抗體、兔抗NF-κBp65單克隆抗體，Cell Signaling Technology公司；所有有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

奧林巴斯CKX41型生物顯微鏡，OLympus公司；CO2培養(yǎng)箱，松下公司；Spectra Max i3酶標(biāo)儀，MD公司；pH計(jì)，上海雷磁儀器廠；GL-20G-Ⅱ型高速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；凝膠成像儀,北京五洲東方科技發(fā)展有限公司；WB顯影儀,上海勤翔科學(xué)儀器有限公司；Bio-Rad CFX Maestro RT-PCR儀器，伯樂(lè)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

稱取高核苷酸酵母水解物溶于超純水中，4 000 r/min，離心10 min取上清，0.22 μm濾膜除菌后待用。

1.3.1 RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)

RAW264.7細(xì)胞于含有體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、100 μL/mL青霉素和100 μL/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)(下文簡(jiǎn)稱DMEM10)，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)條件下常規(guī)培養(yǎng)。選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組,DMEM10正常培養(yǎng)；模型組,DMEM10+LPS(1 μg/mL)共培養(yǎng)；樣品組,DMEM10+LPS(1 μg/mL)+不同質(zhì)量濃度高核苷酸酵母水解物共培養(yǎng)[15]。

1.3.2 MTT法測(cè)定RAW264.7細(xì)胞存活率

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞接種于96孔板中，每孔接種1×105個(gè)細(xì)胞。37 ℃培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)液，用PBS清洗1次，在培養(yǎng)基中分別加入質(zhì)量濃度20、40、60、80、100、150、200和250 μg/mL的高核苷酸酵母水解物，以無(wú)檢測(cè)物的相同培養(yǎng)基孵育細(xì)胞為對(duì)照，培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)液，加入質(zhì)量濃度0.5 mg/mL MTT-DMEM10于37 ℃避光孵育2 h，小心吸棄培養(yǎng)液，再加入100 μL二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)，靜置待完全溶解出MTT紫色結(jié)晶產(chǎn)物。使用酶標(biāo)儀在490 nm處測(cè)定吸光度值。以對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞存活率為100 %計(jì)算其余組別細(xì)胞存活率[16]。

1.3.3 HNYH對(duì)RAW264.7細(xì)胞吞噬中性紅作用的影響

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞接種于96孔板中，每孔接種1×105個(gè)細(xì)胞，設(shè)對(duì)照組、模型組、樣品組(高核苷酸酵母水解物質(zhì)量濃度為20、40、60、80、100、150 μg/mL)培養(yǎng)24 h，每孔加入100 μL 0.075%中性紅生理鹽水溶液，培養(yǎng)1 h，棄去上清，用無(wú)血清的RPMI-1640洗滌2次，向各孔加入100 μL細(xì)胞溶解液(0.1 mol/L冰醋酸與無(wú)水乙醇1∶1等體積混合)，室溫靜置過(guò)夜，待細(xì)胞全部溶解后，570 nm測(cè)吸光值[17]。

1.3.4 HNYH對(duì)RAW264.7細(xì)胞釋放NO能力的影響

RAW264.7細(xì)胞按照1.3.3分組和處理方法，處理24 h后，吸取50 μL上清液于96孔板中，依次加入NO試劑盒中試劑A，B 2種反應(yīng)液各50 μL，于540 nm處測(cè)OD值。

1.3.5 HNYH對(duì)RAW264.7細(xì)胞釋放炎癥因子的影響

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的巨噬細(xì)胞按每孔濃度為1×105個(gè)細(xì)胞數(shù)接種于96孔板中，設(shè)對(duì)照組、模型組，樣品組(高核苷酸酵母水解物質(zhì)量濃度為10、50、100、150 μg/mL)，且每組3個(gè)復(fù)孔，放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24 h后采用碧云天試劑盒分別測(cè)定細(xì)胞IL-6，IL-1β和TNF-α的釋放量[18]。

1.3.6 HNYH對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞iNOS，TNF-α，IL-1β和IL-6mRNA的影響

RAW264.7細(xì)胞懸液接種6孔板，細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)/mL，每孔2 mL，分別設(shè)正常組、模型組、樣品組(高核苷酸酵母水解物濃度為10、50、100、150 μg/mL)，細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，收集各組巨噬細(xì)胞，按照全式金試劑盒說(shuō)明書(shū)提取細(xì)胞總RNA，用紫外分光光度計(jì)對(duì)RNA進(jìn)行定量分析，測(cè)定RNA純度及濃度。PCR反應(yīng)條件為45 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，94 ℃ 5 s，60 ℃ 1 min，循環(huán)40次；PCR擴(kuò)增完畢后，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)mRNA表達(dá)情況，Bio-Rad公司圖像分析成像儀進(jìn)行半定量分析。引物序列及產(chǎn)物大小見(jiàn)表1[5]。

表1 實(shí)驗(yàn)用各目標(biāo)基因特異性引物序列

1.3.7 Western blot檢測(cè)NF-κB及iNOS蛋白的表達(dá)

RAW264.7細(xì)胞按照1.3.6分組和處理方法，常規(guī)培養(yǎng)24 h后，收集各組細(xì)胞，置于冰上，使用細(xì)胞核蛋白抽提試劑盒提取核蛋白，檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65蛋白表達(dá)情況，Bradford法測(cè)定蛋白濃度。每孔上樣30 μg蛋白，10% SDS-PAGE分離樣品，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉2 h，將膜置于1∶1 000稀釋的一抗稀釋液中，4 ℃過(guò)夜，TBST洗膜3次，將膜浸入以1∶1 000稀釋的二抗稀釋液中，室溫?fù)u床孵育1 h，TBST洗膜3次。ECL顯色液顯色，曝光，利用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 HNYH對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

由表2可知，高核苷酸酵母水解物在質(zhì)量濃度20～150 μg/mL處理細(xì)胞的存活率都在95%左右，觀察到細(xì)胞形態(tài)良好，沒(méi)有顯著差異，未觀察到細(xì)胞毒性作用。質(zhì)量濃度在200 μg/mL以上時(shí)高核苷酸酵母水解物對(duì)RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，所以在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中選擇150 μg/mL為最大質(zhì)量濃度。

表2 不同質(zhì)量濃度高核苷酸酵母水解物對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

2.2 HNYH對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

吞噬作用是巨噬細(xì)胞發(fā)揮其免疫功能的重要方式之一，由圖1可以看出，與對(duì)照組相比，模型組的細(xì)胞吞噬能力顯著升高，與模型組相比，樣品組質(zhì)量濃度在100～150 μg/mL時(shí)，能明顯地增強(qiáng)RAW264.7細(xì)胞的吞噬能力(P<0.05)。說(shuō)明高核苷酸酵母水解物能夠提高巨噬細(xì)胞的免疫活性[19]。

圖1 HNYH對(duì)RAW264.7細(xì)胞吞噬中性紅的影響

2.3 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NO生成量的影響

在體內(nèi)，NO是通過(guò)一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸(L-Arg)產(chǎn)生的。iNOS主要是在炎癥和免疫刺激下表達(dá)，進(jìn)而催化NO持續(xù)生成，過(guò)多的NO則會(huì)促使炎癥性疾病的發(fā)生和發(fā)展[5]。將1 μg/mL LPS作用于巨噬細(xì)胞RAW264.7后24 h，如圖2所示，產(chǎn)生的NO量顯著高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在一定濃度范圍內(nèi)，高核苷酸酵母水解物作用巨噬細(xì)胞后，NO的生成量隨高核苷酸酵母水解物濃度的增加而降低，NO標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為：y=0.014 9x+0.019 8，R2=0.998 7。

圖2 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞內(nèi)NO含量的影響

Fig.2 Effects of HNYH on the content of NO in LPS- induced RAW264.7 cells

2.4 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的影響

結(jié)果如圖3、圖4和圖5所示。

圖3 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞IL-1β的影響

Fig.3 Effects of HNYH on the content of IL-1β in LPS-induced RAW264.7 cells

圖4 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞IL-6的影響

Fig.4 Effects of HNYH on the content of IL-6 in LPS-induced RAW264.7 cells

圖5 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞TNF-α的影響

Fig.5 Effects of HNYH on the content of TNF-α in LPS-induced RAW264.7 cells

正常組細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α分泌較少，給予1 μg/mL LPS刺激24 h后，IL-1β、IL-6和TNF-α分泌均顯著增加(P<0.05)，與模型組相比，高核苷酸酵母水解物組中IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌則受到明顯抑制(P<0.05)，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)HNYH通過(guò)調(diào)節(jié)多種炎癥因子的分泌來(lái)緩解LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥。

2.5 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞iNOS、IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA表達(dá)的影響

RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析如圖6顯示，與對(duì)照組相比，模型組的iNOS、IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA均顯著升高(P<0.05)，與模型組相比，不同質(zhì)量濃度的高核苷酸酵母水解物組能夠顯著降低iNOS、IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA表達(dá)。

圖6 HNYH對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞iNOS，TNF-α，IL-6，IL-1β mRNA的影響

Fig.6 The effect of iNOS，TNF-α,IL-6 and IL-1β mRNA expressionafter the intervention of total saponins of Panax japonicus on RAW264.7 cells stimulated by LPS

2.6 HNYH對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞iNOS和細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響

蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)結(jié)果如圖7所示，模型組細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65蛋白的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；HNYH各組劑量依賴性地抑制由LPS所誘導(dǎo)的NF-κBp65蛋白的表達(dá)，與模型組比較，存在顯著性差異(P<0.05)。

圖7 HNYH對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞NF-κBp65的影響

Fig.7 Effect of HNYH on NF-κBp65 stimulated by LPS in RAW264.7 cells

Western Blot檢測(cè)結(jié)果如圖8所示，對(duì)照組中，iNOS蛋白表達(dá)較低，而經(jīng)LPS刺激后，RAW264.7細(xì)胞分泌的iNOS蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)。

圖8 HNYH對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞iNOS蛋白的影響

Fig.8 Effect of HNYH on iNOS stimulated by LPS in RAW264.7 cells

與模型組比較，高核苷酸酵母水解物(150、100、50、10 μg/L)呈濃度依賴性下調(diào)iNOS蛋白表達(dá)(P<0.05)，從而抑制了NO的生成，來(lái)減輕炎癥反應(yīng)。說(shuō)明了HNYH組通過(guò)降低RAW264.7細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)，從而減少NO炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。

3 討論

炎癥是伴隨各種疾病的一種常見(jiàn)病理現(xiàn)象，巨噬細(xì)胞是主要的炎性細(xì)胞，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞，在機(jī)體免疫系統(tǒng)中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，LPS作為一種炎癥誘導(dǎo)劑可以通過(guò)與細(xì)胞膜表面受體TLR4的結(jié)合，來(lái)激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信號(hào)通路，介導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞的激活，誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子如NO、IL-1β、IL-6、TNF-α等的合成和釋放[20-22]。

體內(nèi)NO是由一氧化氮合酶(iNOS)催化L-精氨酸(L-Arg)產(chǎn)生[5]。一氧化氮合酶是NO合成所必須的酶，分為原生型一氧化氮合酶(cNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)[23]，iNOS主要是在炎癥和免疫刺激下表達(dá)，進(jìn)而催化NO持續(xù)生成，過(guò)量的NO則會(huì)促進(jìn)炎癥性疾病的發(fā)生和發(fā)展[24-25]。因此，抑制NO的釋放或iNOS表達(dá)可能是緩解炎癥反應(yīng)的重要靶點(diǎn)[26-27]。NO合成酶iNOS的表達(dá)直接決定NO分泌量，是檢測(cè)炎癥重要指標(biāo)。目前，調(diào)節(jié)誘導(dǎo)型合成酶iNOS的表達(dá)和NO的合成被認(rèn)為是治療炎癥疾病的重要途徑。NO及iNOS mRNA表達(dá)水平的降低與中和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，iNOS是介導(dǎo)炎癥分子機(jī)制中一個(gè)重要分子機(jī)制[7]。LPS誘導(dǎo)的iNOS的表達(dá)受NF-κB調(diào)控。NF-κB受刺激因子誘導(dǎo)激活從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，誘導(dǎo)多種基因的表達(dá)和多種細(xì)胞因子的釋放。

在炎癥反應(yīng)的各階段，NF-κB作為核轉(zhuǎn)錄因子起著重要的調(diào)控作用，其主要的誘導(dǎo)型亞基是p60/p65[28]。靜息狀態(tài)時(shí)，NF-κB和IκB形成的復(fù)合體存在于細(xì)胞質(zhì)中。在通過(guò)LPS刺激后，IκB被活化的激酶復(fù)合體(IκBkinase，IKK)磷酸化，NF-κB與IκB解離，游離的NF-κBp65迅速轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并與κB結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，從而啟動(dòng)炎性介質(zhì)及促炎癥細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)[29-31]。

綜上所述，通過(guò)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞體外細(xì)胞炎癥模型中，模型組的炎癥因子iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β表達(dá)明顯上升，核NF-κB p65 和iNOS蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，說(shuō)明NO、TNF-α、IL-6和IL-1β釋放，NF-κB信號(hào)通路被激活，證明細(xì)胞炎癥模型構(gòu)建成功，與模型組相比高核苷酸酵母水解物組中NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌則受到明顯抑制，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。高質(zhì)量濃度HNYH能顯著抑制NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放，然后又采用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)，各劑量組(10、50、100、150、μg/mL)均能抑制iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)?？芍狧NYH通過(guò)調(diào)控炎癥因子基因的表達(dá)進(jìn)而抑制炎癥因子的過(guò)度釋放，起到抗炎作用。

Western Blot檢測(cè)證實(shí)了HNYH能夠調(diào)控激活RAW264.7細(xì)胞核因子NF-κB通路，通過(guò)抑制iNOS表達(dá)，進(jìn)一步抑制NO和炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的產(chǎn)生，降低iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)，具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。炎癥反應(yīng)和慢性病總是有著密不可分的聯(lián)系，HNYH作為一種天然的具有抗氧化、增強(qiáng)免疫力等功能性營(yíng)養(yǎng)食品添加劑，本研究可能為食療干預(yù)慢性病提供一定的基礎(chǔ)理論依據(jù)。