清蒸和酒蒸九華黃精不同粒徑粉的體外溶出度考察

吳其國，胡葉青，李文艷

（1.安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，安徽安慶246052；2.華潤三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東深圳518110）

黃精為百合科植物滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黃精 （Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根莖［1］。安徽九華山地區(qū)的黃精品種為多花黃精，在九華山地區(qū)生長范圍較廣，陰濕山坡和溝谷處較常見，云南、貴州、浙江、山東也有此品種分布，但藥材質(zhì)量都不如九華山地區(qū)，為突出其地方特色，取名為九華黃精［2］。

隨著中藥材資源越來越匱乏，通過中藥粉碎技術(shù)，選擇合適的粉碎粒徑，使中藥有效成分充分溶出變得尤為重要。目前黃精的炮制方法常用的有清蒸和酒蒸兩種。

本文擬對九華黃精清蒸和酒蒸兩種炮制品的不同粒徑粉體進(jìn)行初步的體外溶出特性考察，以期為清蒸和酒蒸九華黃精的有效利用提供支撐。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

儀器包括：1）HC-500YZ多功能粉碎機(jī)（永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司）；2）ZRS-8GD智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；3）ZNHW-500型電加熱套（上海越眾儀器有限公司）；4）SP-1920型紫外-可見分光光度儀（上海光譜儀器有限公司）；5）FA1204B型電子分析天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

試藥包括：1）九華黃精生藥材購于池州市大王洞中藥材種植專業(yè)合作社；2）蒽酮（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20170222）；3）無水乙醇（分析純，上海中泰化學(xué)試劑，批號(hào)20161108）；4）葡萄糖（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)20160909）；5）硫酸（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20170508）；6）黃酒（浙江塔牌紹興酒有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 清蒸和酒蒸九華黃精的制備

取九華黃精生藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，蒸至透心，切厚片，干燥，即得清蒸九華黃精；取凈九華黃精，加黃酒（每100 kg九華黃精，用黃酒20 kg）拌勻、潤透，再于鍋內(nèi)蒸透，取出，稍晾，拌回蒸液，再?zèng)鲋亮筛?，切厚片，干燥，即得酒蒸九華黃精。

2.2 清蒸和酒蒸九華黃精不同粒徑粉的制備

分別取一定量的干燥清蒸和酒蒸九華黃精炮制品，置于高速萬能粉碎機(jī)中，粉碎3～5 min，分級(jí)過篩，分別得到清蒸九華黃精不同粒徑粉：100目粉（過100目篩），200目粉（過200目篩），300目粉（過300目篩）；酒蒸九華黃精不同粒徑粉：100目粉（過100目篩），200目粉（過200目篩），300目粉（過300目篩）。

2.3 清蒸和酒蒸九華黃精總多糖含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖對照品12 mg，加入蒸餾水制成每毫升含0.136 1 mg的葡萄糖溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

取清蒸和酒蒸九華黃精粉末（過2號(hào)篩）各1 g，精密稱定，加入純化水100 mL，稱定重量，加熱回流1 h（保持微沸），放冷，用水補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，加入無水乙醇30 mL，靜置1 h，5 000 r/min離心15 min，沉淀加熱水溶解，定容至25 mL，作為供試品溶液，備用。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于10 mL具塞試管中，各管加水稀釋至2 ml，精密加入硫酸-蒽酮溶液（精密稱取0.2 g蒽酮，加80%濃硫酸溶解搖勻，即得?，F(xiàn)配現(xiàn)用）5 mL，靜置10 min，再于沸水浴反應(yīng)10 min，取出，置冰水浴中冷卻至室溫，以水2 mL為空白，照2015年版《中國藥典》（四部）通則0401紫外-可見分光光度法［3］，在582 nm處測定吸光度A，以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，得線性回歸方程為

2.3.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液0.5 ml，共6份，分別置于10 mL具塞試管中，按2.3.3項(xiàng)下自“各管加水稀釋至2 mL”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，計(jì)算RSD=1.7%（n=6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取清蒸九華黃精藥材粗粉6份（每份約1 g），精密稱定，按2.3.2項(xiàng)下制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2 mL分別置于10 mL具塞試管中，自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，計(jì)算RSD=2.5%（n=6），結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取清蒸九華黃精供試品溶液2.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按2.3.3項(xiàng)下自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，室溫放置，分別在 0、30、60、90，120、150 min 測定其 582 nm 處吸光度 A，計(jì)算RSD=1.4%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在2.5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱定已知總多糖含量的清蒸九華黃精藥材粗粉1 g，共6份，分別精密加入無水葡萄糖對照品50 mg，按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2 mL，置10 mL具塞試管中，按2.3.3項(xiàng)下“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，平均加樣回收率為98.62%，計(jì)算RSD=2.8%（n=6），結(jié)果表明回收率良好。

2.4 清蒸和酒蒸九華黃精粉的體外溶出度測定

2.4.1 溶出度樣品的制備

分別取不同粒徑的清蒸和酒蒸九華黃精粉約2 g，精密稱定，投入溶出儀中，按2015年版《中國藥典》（四部）通則0931溶出度和釋放度測定法（槳法）［3］進(jìn)行測定，以已超聲脫氣的500 mL水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速 100 r/min，溫度（37.0 ± 0.5）℃，分別于 5、10、15、30、45、60 min 取樣 10 mL，同時(shí)向溶出杯中補(bǔ)充相同溫度和體積的介質(zhì)，取出的樣品溶液于5 000 r/min離心10 min，精密量取離心后的上清液5 mL，加入無水乙醇30 mL，搖勻，靜置沉淀1 h，10 000 r/min離心8 min，傾去上清液，沉淀用少量熱水溶解，放冷，定容至10 mL，搖勻，作為樣品溶液，備用。

2.4.2 溶出度的測定

精密量取上述樣品溶液2 mL，置于10 mL具塞試管中，再按照2.3.3項(xiàng)條件項(xiàng)下自“精密加入硫酸-蒽酮溶液”起開始操作，在582 nm處測定吸光度A，每種粉末樣品平行測定3份，測得不同時(shí)間清蒸九華黃精100目粉、200目粉、300目粉和酒蒸九華黃精100目粉、200目粉、300目粉中總多糖溶出量，取平均值，計(jì)算累積溶出率。結(jié)果如圖1與2所示。

圖1 清蒸九華黃精不同粒徑粉的水介質(zhì)體外溶出曲線

圖2 酒蒸九華黃精不同粒徑粉的水介質(zhì)體外溶出曲線

3 討論與總結(jié)

由圖1可知，其不同粒徑粉的累積溶出率由大到小的順序分別為100目粉、200目粉、300目粉。由圖2可知，其不同粒徑粉的累積溶出率由大到小的順序分別為200目粉、300目粉、100目粉。同一種九華黃精粉的不同粒徑粉累積溶出率有較大差別，并不是粒徑最小的300目粉累積溶出率最高，很早就有研究認(rèn)為藥材有效成分的溶出并不是隨著粒徑減小而無限增加［4］，而是存在一個(gè)臨界粒徑，不僅每味藥材的臨界粒徑不同，而且每種成分的臨界粒徑也存在差異［5］。

另外，黃精的炮制方法主要是清蒸和酒蒸兩種，本研究分別制備了清蒸九華黃精和酒蒸九華黃精，從其外觀形態(tài)來看，兩種炮制品的表面和外觀顏色、斷面形態(tài)和氣味均有顯著差別，這些物理特性的差別也有可能會(huì)影響九華黃精在水中的溶出特性。清蒸和酒蒸九華黃精的最大累積溶出率分別是100目粉和200目粉，炮制方法不同，會(huì)影響中藥材產(chǎn)品的質(zhì)量，清蒸和酒蒸兩種炮制方法對黃精多糖的含量影響是不一樣的［6］，炮制的各種因素會(huì)影響其含量變化，甚至?xí)绊懫淙艹鎏匦灾档眠M(jìn)一步研究。

總之，中藥材的粉碎并不是越細(xì)越好，而應(yīng)控制在一定的范圍內(nèi)，尤其是微粉操作，這可能是因?yàn)橐环矫娉⒎垠w比表面積大、表面能增加，使顆粒處于非穩(wěn)定狀態(tài)，因而有強(qiáng)烈的相互吸引而達(dá)到穩(wěn)定的趨向，這種傾向使粒子產(chǎn)生團(tuán)聚而影響其溶出效果［7］；另一方面粉末在溶出過程中存在溶出與吸附平衡，微粉溶出雖然稍多，但藥材超微粉碎粒度過小，藥材表面積急劇增大而使其表面能增加，藥物粉體對多糖這類極性成分的吸附力增大，從而使其不易溶出［8-9］。而且高粉碎需要的能耗高、成本高，所以在醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)中，偏高粉碎度的要求尤其要慎重選擇［10］。