IL-1RN基因多態(tài)性與消化性潰瘍發(fā)病相關(guān)性及機(jī)制分析

魏小娟，郭 艷，高 琦

（新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，新鄉(xiāng)453000）

隨著人們飲食習(xí)慣的改變，消化性潰瘍的發(fā)生率明顯升高。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國2010-2017年消化性潰瘍的發(fā)病率可達(dá)（272～383）/10 000[1]，每年的新發(fā)病例或嚴(yán)重的潰瘍性出血的發(fā)生率均明顯上升[2]。

在探討消化性潰瘍發(fā)病機(jī)制的過程中，研究者發(fā)現(xiàn)炎性因子基因水平的改變在提高消化性潰瘍的患病易感性等方面發(fā)揮了重要作用[3]。白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑（IL-1RN）的多態(tài)性能夠影響IL-1受體的敏感性，導(dǎo)致炎癥性信號通路的紊亂，加重胃黏膜或十二指腸上皮黏膜的炎癥性損傷，促進(jìn)消化性潰瘍的發(fā)生[3]。部分研究通過全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）已證明CYP2C19基因多態(tài)性是消化性潰瘍的重要位點(diǎn)關(guān)[4]，部分研究者報道了CYP2C19基因多態(tài)性與消化系統(tǒng)疾病的關(guān)系[5]，為了揭示IL-1RN基因多態(tài)性與消化性潰瘍發(fā)病相關(guān)性及作用機(jī)制，為臨床上消化性潰瘍的治療或預(yù)防等提供參考，本研究對IL-1RN多態(tài)性與消化性潰瘍發(fā)病的相關(guān)性進(jìn)行了分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月-2018年1月在我院治療的消化性潰瘍患者180例，其中十二指腸潰瘍患者91例（十二指腸潰瘍組），胃潰瘍患者89例（胃潰瘍組），納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均經(jīng)胃鏡及活檢病理學(xué)確診；（2）均為漢族；（3）近1個月內(nèi)未使用過質(zhì)子泵抑制劑、H2受體拮抗劑、腎上腺皮質(zhì)類固醇、非甾體消炎藥或抗凝劑；（4）患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有腹部手術(shù)史；（2）合并有惡性腫瘤、嚴(yán)重心、肺、肝等臟器疾病。同時選取健康志愿者270例作為對照組，各組受試者性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組一般資料比較Tab 1 Comparison of the general data between each group

1.2 檢測方法 幽門螺桿菌的檢測：先在胃鏡下采集患者的胃黏膜或者十二指腸黏膜組織，采用南京凱基生物科技公司生產(chǎn)的快速尿素酶檢測試劑盒進(jìn)行檢測，按照說明的要求和步驟進(jìn)行Hp的檢測。

IL-1RN基因多態(tài)性的檢測：取凍存的血清保存液體，按照10000r/min的離心速度進(jìn)行離心分離，

1.2 檢測方法幽門螺桿菌的檢測：先在胃鏡下采集患者的胃黏膜或者十二指腸黏膜組織，采用南京凱基生物科技公司生產(chǎn)的快速尿素酶檢測試劑盒進(jìn)行檢測，按照說明的要求和步驟進(jìn)行Hp的檢測。

IL-1RN基因多態(tài)性的檢測：取凍存的血清保存液體，按照10000r/min的離心速度進(jìn)行離心分離，每1 mL的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 mL的氯仿，進(jìn)行裂解操作，4℃冰上采用無酶的RNA沖洗液進(jìn)行洗滌，再次10 000 r/min離心5 min，得到RNA?；旌弦涸诩尤肽孓D(zhuǎn)錄酶MMLV之前先70℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL，37℃水浴60 min，室溫放置5min使其完全溶解，使其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β-actin為模版，在反應(yīng)體系中加入SYBR Green 1染料、上游引物、下游引物、dNTP，使得總體積達(dá)20 μL，上機(jī)，反應(yīng)條件為 93℃ 2 min、93℃ 1 min、55℃ 2 min，共40個循環(huán)。

PCR產(chǎn)物擴(kuò)增后進(jìn)行基因多態(tài)性檢測：參考multiplexkit試劑盒（南京凱基生物科技有限公司）使用說明，加入各位點(diǎn)對應(yīng)延伸引物進(jìn)行單堿基測序反應(yīng)，在 ABI1310（Life Technologies，美國）進(jìn)行電泳，結(jié)果用GENEMAPPER軟件（LifeTechnologies，美國）進(jìn)行分析。

1.3 治療方法 口服奧美拉唑（國藥準(zhǔn)字J20080097南京揚(yáng)子江藥業(yè)有限公司），400 mg，口服，每日2次，阿莫西林（國藥準(zhǔn)字H20163312重慶麥克福新制藥有限公司）1.0 mg，口服，每日2次，甲硝唑（批國藥準(zhǔn)字H14020964亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）200 mg，口服，每日2次，連續(xù)治療6周，并進(jìn)行Hp的檢測。

1.4 療效判斷 愈合為潰瘍消失，瘢痕形成，潰瘍周圍炎癥消失，S1期或S2期；顯效為潰瘍愈合，周圍黏膜仍有炎癥H2期；有效為潰瘍縮小≥50%；無效為潰瘍縮?。?0%或無變化[4]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS19.0軟件，計量資料采用±s表示，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料比較使用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組IL-1RN基因多態(tài)性結(jié)果 十二指腸潰瘍組、胃潰瘍組和對照組IL-1RN基因多態(tài)性分布符合Hardy-Wenberg平衡檢驗；十二指腸潰瘍組IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2比例分別為50.55%和29.67%，明顯高于胃潰瘍組和對照組（χ2=16.630 和 28.926，17.429 和 38.228，P＜0.05）；胃潰瘍組和對照組IL-1RN基因型和等位基因分布比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.322和 0.213，P＞0.05），見表2。

2.2 各組幽門螺旋桿菌陽性者基因型分布比較 十二指腸潰瘍組、胃潰瘍組和對照組幽門螺旋桿菌陽性者分別為80例、73例和123例；十二指腸潰瘍組幽門螺旋桿菌陽性者IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2比例分別為50.15%和29.38%，明顯高于胃潰瘍組和對照組（χ2=26.283和28.233，27.507和31.755，P＜0.05）；胃潰瘍組和對照組幽門螺旋桿菌陽性者IL-1RN基因型和等位基因分布比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.562 和0.517，P＞0.05）。見表 3。

2.3 各組幽門螺旋桿菌陰性者基因型分布比較 胃潰瘍組幽門螺旋桿菌陰性者IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2比例分別為62.50%和37.50%，明顯高于對照組（χ2=8.064 和 12.144，P＜0.05）；十二指腸潰瘍幽門螺旋桿菌陰性者等位基因2比例為31.82%，明顯高于對照組（χ2=4.815，P＜0.05）；十二指腸潰瘍組和胃潰瘍組幽門螺旋桿菌陽性者IL-1RN基因型和等位基因分布比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.562 和 0.517，P＞0.05）。見表 4。

表2 各組IL-1RN基因多態(tài)性結(jié)果 [n（%）]Tab 2 IL-1RN gene polymorphism results in each group[n（%）]

表3 各組幽門螺旋桿菌陽性者基因型分布比較 [n（%）]Tab 3 Comparison of genotype distribution of Hp positive groups[n（%）]

表4 各組幽門螺旋桿菌陰性者基因型分布比較 [n（%）]Tab 4 Comparison of genotype distribution among Hp negative groups[n（%）]

2.4 各組IL-1RN基因多態(tài)性與治療的關(guān)系 十二指腸潰瘍組不同IL-1RN基因型患者治療痊愈率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表5；胃潰瘍組不同IL-1RN基因型患者治療痊愈率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表 6。

表5 十二指腸潰瘍組不同IL-1RN基因型治療痊愈率比較Tab 5 Comparison of cure rates of different IL-1RN genotypes in duodenal ulcer group

表6 胃潰瘍組不同IL-1RN基因型治療痊愈率比較Tab 6 Comparison of cure rates of different IL-1RN genotypes in gastric ulcer group

3 討論

近年來，我國消化性潰瘍的發(fā)生率具有上升的趨勢，特別是在具有自身免疫力紊亂或不良飲食習(xí)慣的人群中，消化性潰瘍的發(fā)生風(fēng)險更高，出血性風(fēng)險更大[5]。消化性潰瘍的發(fā)生，不僅能夠?qū)е孪来┛椎炔l(fā)癥的發(fā)生，同時還能夠增加遠(yuǎn)期惡性消化道病變的發(fā)生風(fēng)險，增加胃癌等疾病的發(fā)生率[6]。現(xiàn)階段臨床抗Hp或胃黏膜保護(hù)劑等藥物治療后，消化性潰瘍患者的病情緩解程度仍然較低，治療后的患者消化道并發(fā)癥的發(fā)生率仍然較高[7]。而本研究對消化性潰瘍患者體內(nèi)相關(guān)致病基因多態(tài)性的分析研究，具有下列兩個方面的價值：（1）能夠為臨床上消化性潰瘍患者的免疫學(xué)治療提供理論參考；（2）能夠為臨床上消化性潰瘍患者的病情評估提供血清學(xué)依據(jù)。

IL-1RN基因多態(tài)性的改變能夠誘導(dǎo)單核細(xì)胞過度激活，提高了中性粒細(xì)胞對胃黏膜組織的損傷程度[8-9]。IL-1RN基因多態(tài)性的改變能夠通過影響IL-1RN的轉(zhuǎn)錄和翻譯，促進(jìn)下游炎癥因子的激活，增加中性粒細(xì)胞對于胃黏膜上皮物理性屏障的破壞作用[10]。基礎(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，IL-1RN基因多態(tài)性能夠加劇T淋巴細(xì)胞的自身免疫性損傷，并提高自然殺傷性T淋巴細(xì)胞對胃黏膜的損傷，促進(jìn)胃黏膜基底組織的破壞，增加血管破裂和出血的風(fēng)險[11]。部分研究者證實了IL-1RN基因多態(tài)性與消化性潰瘍的關(guān)系，認(rèn)為IL-1RN基因多態(tài)性與潰瘍治療后的并發(fā)癥發(fā)生密切相關(guān)[12]，而對于其與患者潰瘍的部位或者Hp感染的關(guān)系研究不足。

本研究并未發(fā)現(xiàn)在胃潰瘍患者中IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2的差異，提示IL-1RN基因型多態(tài)性并不會影響胃潰瘍的發(fā)生，雖然部分研究者報道了IL-1RN基因型多態(tài)性與胃潰瘍的關(guān)系，但相關(guān)研究的樣本量較小，同時缺乏可靠的對照研究分析。在十二指腸潰瘍患者中，IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2的比例明顯上升，高于胃潰瘍組或正常對照人群，提示IL-1RN基因型可能顯著影響十二指腸潰瘍的發(fā)生。通過薈萃國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為IL-1RN基因型的多態(tài)性與十二指腸潰瘍的關(guān)系可能與下列幾個因素有關(guān)[13-14]；（1）IL-1RN基因型中等位基因2或基因型的改變，能夠影響IL-1蛋白翻譯效率，導(dǎo)致效應(yīng)蛋白的生物學(xué)活性的改變，激活了體內(nèi)的炎癥反應(yīng)系統(tǒng)；（2）IL-1RN基因型多態(tài)性的改變，能夠提高體內(nèi)炎癥細(xì)胞對于十二指腸黏膜腺體細(xì)胞的促凋亡作用，導(dǎo)致黏膜屏障作用的減弱。楊松濤等[15]也認(rèn)為，在消化性潰瘍患者中，IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2均可以顯著升高，特別是在十二指腸球部潰瘍患者中，相關(guān)等位基因的突變風(fēng)險更高。在Hp陽性感染的患者中，可以發(fā)現(xiàn)在十二指腸潰瘍患者血清中IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2比例的上升更為明顯，高于對照組和胃潰瘍組，提示Hp感染可能進(jìn)一步加劇IL-1RN基因多態(tài)性的改變，增加其對十二指腸黏膜的損傷作用。IL-1RN基因型L/2+2/2比例和等位基因2比例的改變，可能通過改變IL-1蛋白上游翻譯的活性而影響到轉(zhuǎn)運(yùn)RNA對氨基酸的運(yùn)載能力，進(jìn)而導(dǎo)致IL-1蛋白的表達(dá)波動。同時IL-1RN基因多態(tài)性還可能通過影響IL-β31位點(diǎn)的改變，進(jìn)而導(dǎo)致其他關(guān)聯(lián)基因位點(diǎn)的多態(tài)性改變，影響到消化性潰瘍的發(fā)生。本研究揭示了發(fā)現(xiàn)IL-1RN多態(tài)性并不會顯著影響潰瘍的臨床治療效果。

綜上所述，IL-1RN基因多態(tài)性與十二指腸潰瘍發(fā)病有一定的關(guān)系，而與胃潰瘍無明顯相關(guān)性。