活血注射液組方藥效學(xué)研究

孟 萌，李 進(jìn)，陳 濤，李 正，崔維利

丹芪偏癱膠囊具有補(bǔ)氣活血、豁痰熄風(fēng)的功效，臨床上主治缺血性腦血管病恢復(fù)期。補(bǔ)氣活血為該處方的核心治療之法。本課題是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，遵循丹芪偏癱膠囊補(bǔ)氣活血之法，對(duì)處方中的補(bǔ)氣藥、活血藥進(jìn)行藥物的篩選，并結(jié)合文獻(xiàn)的報(bào)道[1-2]，最終確定了黃芪和赤芍兩味藥，并通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)確定二者的劑量配伍比例。為制備針對(duì)缺血性腦血管病急性期治療的中藥?kù)o脈滴注液打下藥理學(xué)研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品 藥物劑量配伍比例：組1（黃芪∶赤芍 =1∶1）、組 2（黃芪∶赤芍 =1∶2）、組 3（黃芪∶赤芍 =1∶3）、組 4（黃芪∶赤芍 =2∶1）。不同配伍比例的黃芪和赤芍濃縮液均由天津市石天藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 Wistar種大鼠170只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g，由天津藥物研究院動(dòng)物室提供，合格證號(hào)：津動(dòng)質(zhì)字第001號(hào)。飼料由天津市動(dòng)物中心提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室：室溫由中央空調(diào)控制在（22±2）℃，濕度為（50±15）%。

1.1.3 儀器 BT87-3型實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成測(cè)定儀，購(gòu)自包頭醫(yī)學(xué)院；LG-R-80C型錐板黏度計(jì)，購(gòu)自北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司；LG-PABER型凝血因子分析儀，購(gòu)自北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物不同配伍比例對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響 選用上述健康Wistar種大鼠，按性別、體重隨機(jī)均勻分組[3]，采用尾靜脈注射給藥，給藥組分別靜脈注射不同劑量的黃芪-赤芍濃縮液，空白組靜脈注射等量的生理鹽水。給藥后30 min，戊巴比妥鈉腹腔麻醉，分離一側(cè)頸動(dòng)脈約15 mm，用BT87-3型血栓形成儀刺激電極及溫度傳感器鉤于頸動(dòng)脈上，以1.5 mA的電流持續(xù)刺激血管壁7 min，同時(shí)由溫度傳感器監(jiān)測(cè)血管表面溫度的變化，當(dāng)血流被阻斷時(shí)，血管遠(yuǎn)心端溫度突降，儀器報(bào)警，表明血栓已形成。記錄從刺激開(kāi)始至報(bào)警的時(shí)間，作為血栓形成時(shí)間（OT值）。

1.2.2 全血黏度、血漿比黏度、紅細(xì)胞壓積的測(cè)定 參考文獻(xiàn)[4-6]方法，選用健康Wistar種大鼠，體質(zhì)量250～300 g，雌雄各半，按性別、體重隨機(jī)分為5組，每組均為10只。給藥組分別一次靜脈注射給予黃芪和赤芍配伍比例為1∶3的藥物濃縮液2.5、5、10 mL/kg，模型對(duì)照組和空白組靜脈注射給予等容量生理鹽水。均于給藥后30 min，戊巴比妥鈉腹腔麻醉（40 mg/kg）。除空白組外，其余各組均尾靜脈注射10%高分子右旋糖酐（分子量30萬(wàn)）1 mL/kg。注射后10 min，腹主動(dòng)脈取血5 mL，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝（抗凝劑與全血的比為1∶9），在LG-R-80C型錐板黏度計(jì)上測(cè)定不同切速下的全血黏度、血漿比黏度；另將抗凝血注入壓積管中，測(cè)定血液的沉降速度，然后，離心30 min，測(cè)定紅細(xì)胞壓積。

1.2.3 纖維蛋白原的含量測(cè)定 方法同1.2.2，選取健康Wistar種大鼠，體質(zhì)量約250～300 g，雌雄各半。按性別、體重隨機(jī)分為5組，每組均為10只。給藥組分別一次靜脈注射給予黃芪和赤芍配伍比例為1:3的藥物濃縮液2.5、5、10 mL/kg，模型

對(duì)照組和空白組注射給予等容量生理鹽水。均于給藥后30 min，戊巴比妥鈉腹腔麻醉（40 mg/kg）。除空白組外，其余各組均尾靜脈注射10%高分子右旋糖酐（分子量30萬(wàn)）1 mL/kg。注射后10 min，腹主動(dòng)脈取血5 mL，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝（抗凝劑與全血的比為1∶9）， 在LG-PABER凝血因子分析儀上測(cè)定纖維蛋白原含量。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間的影響 試驗(yàn)結(jié)果采用兩組均數(shù)統(tǒng)計(jì)分析Dunne' tt-t法進(jìn)行顯著性測(cè)驗(yàn)（見(jiàn)表1）。結(jié)果表明，與空白組比較，高劑量的組1（P＜0.05）、中劑量和高劑量的組3（P＜0.01，0.05）、低劑量的組4（P＜0.01）均明顯延長(zhǎng)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，其中組3作用最強(qiáng)。故選定組3進(jìn)行藥效學(xué)研究。

表1 不同配伍比例的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間的影響()

表1 不同配伍比例的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間的影響()

注：a：與空白組比較，P＜0.05，aa：與空白組比較，P＜0.01

組 別 n 劑量（mL/kg） OT值（分）空白組 9 12.0±0.8組1（低劑量組） 9 2.5 15.8±7.4組1（中劑量組） 9 5 17.2±7.3組1（高劑量組） 9 10 17.9±6.0a組2（低劑量組） 9 2.5 14.2±4.3組2（中劑量組） 9 5 14.0±3.4組2（高劑量組） 9 10 15.3±5.6組3（低劑量組） 9 2.5 16.9±8.0組3（中劑量組） 9 5 23.8±6.2aa組3（高劑量組） 9 10 16.3±4.1a組4（低劑量組） 9 2.5 21.5±6.1aa組4（中劑量組） 9 5 14.8±4.4組4（高劑量組） 9 10 13.8±4.0

2.2 對(duì)高粘滯血癥大鼠血液黏度的影響 試驗(yàn)結(jié)果采用兩組均數(shù)統(tǒng)計(jì)分析Dunne' tt-t法進(jìn)行顯著性測(cè)驗(yàn)（見(jiàn)表2）。結(jié)果表明，與空白組比較，靜脈注射高分子右旋糖酐后，模型對(duì)照組全血黏度及血漿比黏度，紅細(xì)胞壓積明顯升高，表明造成了高粘滯血癥模型。與模型對(duì)照組比較，黃芪和赤芍配伍比例為1∶3時(shí)，中、高劑量組明顯降低各切速下的全血黏度；中、高、低劑量組均明顯降低紅細(xì)胞壓積，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。

表2 不同劑量的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)高粘滯血癥大鼠血液黏度的影響()

表2 不同劑量的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)高粘滯血癥大鼠血液黏度的影響()

注：a:與空白組比較，P＜0.05，aa:與空白組比較，P＜0.01，aaa:與空白組比較，P＜0.001；b:與模型對(duì)照組比較，P＜0.05，bb:與模型對(duì)照組比較，P＜0.01，bbb:與模型對(duì)照組比較，P＜0.001

全血黏度（mpa·s） 血漿比黏度 血沉（mm/h） 壓積（%）1 s-1 5 s-1 30 s-1 200s-1空白組 11.2±1.2 5.2±0.4 3.2±0.2 2.4±0.2 1.1±0.1 1.7±0.8 33.2±2.5模型對(duì)照組 22.1±3.3aaa 9.2±1.3aaa 5.0±0.7aaa 3.6±0.5aaa 1.3±0.1a 1.2±0.4 52.8±4.7aa高劑量組 10 17.1±2.7bb 7.5±1.0bb 4.2±0.5bb 3.1±0.3b 1.2±0.1 1.2±0.4 42.2+2.4bbb中劑量組 5 18.8±3.0b 8.0±1.0b 4.4±0.5b 3.2±0.3b 1.2±0.1 1.3±0.5 47.5±3.4b低劑量組 2.5 20.5±2.8 8.6±1.0 4.7±0.5 3.4±0.4 1.2±0.2 1.3±0.5 48.1±4.3組別 劑量（mL/kg）

2.3 對(duì)高粘滯血癥大鼠血漿纖維蛋白原含量的影響 試驗(yàn)結(jié)果采用兩組均數(shù)統(tǒng)計(jì)分析Dunne' tt-t檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性測(cè)驗(yàn)（見(jiàn)表3）。結(jié)果表明，與空白組比較，高粘滯血癥大鼠明顯升高血漿纖維蛋白原含量，表明造型成功。與模型對(duì)照組比較，一次靜脈注射給予黃芪-赤芍濃縮液10 mL/kg時(shí)，明顯降低血漿纖維蛋白原含量，表明有明顯的降低纖維蛋白原的作用。

表3 不同劑量的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)高粘滯血癥大鼠血漿纖維蛋白原含量的影響()

表3 不同劑量的黃芪-赤芍濃縮液對(duì)高粘滯血癥大鼠血漿纖維蛋白原含量的影響()

注：a：與空白組比較，P＜0.05；b：與模型對(duì)照組比較，P＜0.05

組別 n 劑量（mL/kg） 纖維蛋白原含量（g/L）空白組 10 1.2±0.1模型對(duì)照組 10 2.0±0.8a高劑量組 10 10 1.3±0.3b中劑量組 10 5 1.6±0.5低劑量組 10 2.5 1.6±0.4

3 討論

急性缺血性腦血管病是神經(jīng)內(nèi)科常見(jiàn)疾病,患者發(fā)病緊急，病死率、致殘率極高，預(yù)后效果較差，目前該疾病尚無(wú)特效藥物治療，患者預(yù)后大多數(shù)存在不同程度的殘疾，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量[7-8]。目前臨床上針對(duì)該病的治療方法包括溶栓治療、抗血小板聚集治療、降解血漿纖維蛋白原治療、抗凝治療、神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑治療、中醫(yī)藥治療等，雖然這些療法均可獲得一定效果，但由于缺血性腦血管病是多種機(jī)制、因素及多個(gè)環(huán)節(jié)共同作用的結(jié)果，單一藥物、療法僅可用于疾病某些環(huán)節(jié)的治療，并不能逆轉(zhuǎn)全過(guò)程。臨床治療過(guò)程中及早結(jié)合患者的臨床病型、病理主要環(huán)節(jié)，嚴(yán)格按照疾病的適應(yīng)證準(zhǔn)確選擇溶栓、抗凝、抗血小板聚集、中醫(yī)藥、外科手術(shù)或介入治療等，以更好地保護(hù)腦組織，提高治療效果，并有助于改善患者預(yù)后[9]。

目前治療缺血性中風(fēng)的中藥注射劑上市品種很多，其中以活血化瘀為基本治療大法的中藥注射劑占所有上市品種的絕大部分，但論其合理應(yīng)用方面，仍值得商榷[10-11]。臨床上運(yùn)用益氣活血法能比單用益氣法或單用活血法更有效地降低急性腦缺血大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，減輕腦梗死體積，改善缺血區(qū)腦組織能量代謝[12]。

黃芪作為一味珍貴的中藥材，素有“東北小人參”之稱，清朝宮內(nèi)稱其為“補(bǔ)氣諸藥之最”，為補(bǔ)中益氣要藥[13]。近年藥理研究表明黃芪可擴(kuò)張腦血管增加腦血流量，尤其是改善腦微循環(huán)，降低血液黏稠度、降低血小板聚集力，增強(qiáng)紅細(xì)胞變形能力，清除自由基抗氧化，增強(qiáng)腦細(xì)胞耐缺氧能力，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。赤芍為臨床常用中藥，具有清熱涼血、散瘀止痛的功效。其主要化學(xué)活性成分[14]為芍藥總苷（TPG），尚含鞣質(zhì)類、黃酮類、揮發(fā)油類等成分。因具有保肝、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)、心臟保護(hù)、抗血栓、抗氧化等多種顯著的藥理作用而成為近年研究的熱點(diǎn)。TPG抗凝血、抗血栓作用可能與其降低大鼠的血液黏度、纖維蛋白原量、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血小板聚集等有關(guān)。實(shí)驗(yàn)表明[15-16]，黃芪具有明顯的補(bǔ)氣血作用，赤芍對(duì)全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞電泳等血液流變學(xué)指標(biāo)均有所改善，配伍后作用增強(qiáng)。

本研究是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，遵循丹芪偏癱膠囊補(bǔ)氣活血之法，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，選取處方中的黃芪和赤芍兩味藥，通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)確定二者的劑量配伍比例。為制備針對(duì)缺血性腦血管病急性期治療的中藥?kù)o脈滴注液打下藥理學(xué)研究基礎(chǔ)。

由于丹芪偏癱膠囊處方中黃芪與赤芍的比例為1∶1.5，而此方中的活血藥除了赤芍還有另外幾味，如果僅選黃芪和赤芍兩味藥做配伍研究，想達(dá)到與丹芪偏癱膠囊相當(dāng)?shù)男Ч?，原比?∶1.5是不符合的，故本試驗(yàn)根據(jù)丹芪偏癱膠囊中幾味活血藥的處方量分別設(shè)定了黃芪與赤芍的配伍比例分別為 1∶1、1∶2、1∶3 和 2∶1 四個(gè)組。

從表1中分析，黃芪在組4中，最大服用量可達(dá)6.66 g黃芪生藥/kg小鼠；赤芍在組3中，最大服用量可達(dá)6.66 g黃芪生藥/kg小鼠；而其相對(duì)應(yīng)的血栓形成時(shí)間卻較低，這也就證明了單獨(dú)的增加處方中黃芪或赤芍的用量，對(duì)延長(zhǎng)血栓形成時(shí)間沒(méi)有影響，而更多的體現(xiàn)為黃芪和赤芍的配伍劑量，適宜的配伍比例，可以取得較好的治療效果。組4（黃芪∶赤芍=2∶1）雖然在低劑量組有顯著效果，但在高劑量、中劑量組下，OT值均較低，效果不明顯。另外針對(duì)急性缺血性腦血管病在治療上希望采用活血為主、兼有補(bǔ)氣的藥物來(lái)分析，該組并不太適宜。組2（黃芪∶赤芍=1∶2）在三個(gè)劑量組均無(wú)顯著性差異，故而此組也不適宜。組1（黃芪∶赤芍=1∶1）在高劑量組中有顯著性差異，但在中、低劑量組均無(wú)顯著性差異。組1在高劑量組中的數(shù)據(jù)相對(duì)組3在中劑量組的數(shù)據(jù)仍有較大的差距，故組1也不適宜。組3（黃芪∶赤芍=1∶3）的高劑量組、中劑量組均有顯著性的差異，低劑量組的效果也較好，所以該組比較適宜。