血清miR-6861-5p聯(lián)合CA153對乳腺癌的診斷價值

付紅偉 董禹洋

[摘要] 目的 研究血清微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）聯(lián)合糖類抗原153（CA153）對乳腺癌的診斷價值。 方法 選擇2015年4月～2018年4月遼寧省鞍山市腫瘤醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的乳腺癌患者83例為研究對象，作為乳腺癌組。另取同期于我院接受診治的乳腺良性疾病患者80例作為乳腺良性疾病組，再取同期在我院進(jìn)行體檢的健康人者80名作為對照組。分別采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組人員血清miR-6861-5p表達(dá)情況，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清CA153水平。比較三組血清miR-6861-5p與CA153水平，并分析上述兩項指標(biāo)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-6861-5p與CA153水平聯(lián)合檢測對乳腺癌的診斷效能。 結(jié)果 乳腺癌組患者血清miR-6861-5p與CA153水平分別高于乳腺良性疾病組與對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）。Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p水平分別低于Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）。Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清CA153水平分別低于Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）。miR-6861-5p聯(lián)合CA153檢測診斷乳腺癌的敏感度、特異度均高于miR-6861-5p與CA153水平單獨(dú)檢測（均P < 0.05）。 結(jié)論 血清miR-6861-5p聯(lián)合CA153檢測應(yīng)用于乳腺癌患者中具有較高的診斷效能，可作為臨床上診斷乳腺癌的一種有效手段。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌;miR-6861-5p;糖類抗原153;診斷效能;實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）02（b）-0092-04

[Abstract] Objective To study the diagnostic value of serum micro RNA-6861-5p （miR-6861-5p） combined with carbohydrate antigen 153 （CA153） in breast cancer. Methods A total of 83 cases of breast cancer patients admitted to Anshan Tumor Hospital （hereinafter referred to as “our hospital”） from April 2015 to April 2018 were selected， which were recorded as the breast cancer group. In addition， 80 patients with benign breast diseases who received diagnosis and treatment in our hospital during the same period were selected as the benign breast disease group， and 80 healthy people who underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the control group. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression of serum miR-6861-5p in each group， and the serum CA153 level was detected by chemiluminescence. The levels of serum miR-6861-5p and CA153 in the three groups were compared， and the relationship between the above two indicators and the clinicopathological characteristics of breast cancer patients was analyzed. The diagnostic efficacy of serum miR-6861-5p combined with CA153 levels in breast cancer was analyzed using the receiver operating characteristic （ROC） curve. Results The levels of serum miR-6861-5p and CA153 in the breast cancer group were higher than those in the benign breast disease group and the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Ⅰ-Ⅱ period with no lymph node metastasis of breast cancer patients serum miR - 6861-5 P levels were lower than Ⅲ-Ⅳ period and the patients with lymph node metastasis， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Ⅰ-Ⅱ period with no lymph node metastasis of breast cancer patients serum CA153 levels were lower than Ⅲ-Ⅳ period and the patients with lymph node metastasis， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The sensitivity and specificity under the curve of miR-6861-5p combined with CA153 in diagnosis of breast cancer were all higher than those of miR-6861-5p and CA153 alone （all P < 0.05）. Conclusion The application of serum miR-6861-5p combined with CA153 detection in breast cancer patients has high diagnostic efficacy， and can be used as an effective means for clinical diagnosis of breast cancer.

[Key words] Breast cancer; miR-6861-5p; Carbohydrate antigen 153; Diagnostic efficacy; Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction

乳腺癌屬于臨床上最為常見的女性惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)所有女性惡性腫瘤中位居首位，嚴(yán)重危及女性生命健康安全[1]。迄今為止，關(guān)于乳腺癌的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，因此早期有效的診斷以及治療對改善患者預(yù)后具有極其重要的意義。手術(shù)病理組織活檢是目前臨床上用以確診乳腺癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，然而該診斷方式會對患者造成一定的創(chuàng)傷，存在局限性[2]。隨著近年來相關(guān)研究的不斷深入，血清學(xué)標(biāo)志物由于具有檢測方便、迅速的優(yōu)勢，開始被廣泛關(guān)注。目前，臨床上常用的乳腺癌相關(guān)血清標(biāo)標(biāo)志物包括糖類抗原125（CA125）以及糖類抗原153（CA153）等，但均存在敏感度與特異度較低的缺陷[3]。而miRNAs屬于一類具有調(diào)控基因表達(dá)的非編碼小RNA，可通過對轉(zhuǎn)錄與翻譯產(chǎn)生干擾作用，進(jìn)一步調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，在多種生物學(xué)信號通路的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[4]。鑒于此，本研究通過探討血清微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）聯(lián)合CA153對乳腺癌的診斷價值，旨在為乳腺癌的鑒別診斷提供一種有效手段，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年4月～2018年4月遼寧省鞍山市腫瘤醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的乳腺癌患者83例為研究對象，作為乳腺癌組。另取同期于我院接受診治的乳腺良性疾病患者80例作為乳腺良性疾病組，再取同期在我院進(jìn)行體檢的健康者80名作為對照組。乳腺癌組：年齡34～72歲，平均（51.32±10.52）歲;腫瘤直徑1.1～5.3 cm，平均（2.81±0.32）cm;TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期41例，Ⅲ～Ⅳ期42例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①所有患者均經(jīng)影像學(xué)檢查以及經(jīng)病理確診為乳腺癌;②年齡>20歲;③臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤疾病者;②存在交流溝通障礙或精神疾病者;③伴有心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重障礙者;④正參與其他研究者;⑤入院前接受相關(guān)治療。乳腺良性（經(jīng)病理確診）疾病組：年齡30～76歲，平均（51.03±10.72）歲;疾病類型：乳腺囊腫22例，乳腺炎32例，乳腺纖維瘤10例，其他16例。對照組：年齡31～74歲，平均（51.26±10.38）歲。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。所有研究對象均簽署了知情同意書，本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

①標(biāo)本采集：所有人員入院后均采集清晨空腹靜脈血5 mL，離心半徑為12.5 cm，3000 r/min，離心8 min，取上層血清保存于-80℃冰箱中待檢。②采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組人員血清miR-6861-5p表達(dá)情況，具體方法如下：根據(jù)miRNeasy血清/血漿總RNA試劑盒（購自德國QIGEN公司）完成血清總RNA的提取，并在稀釋后參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書完成逆轉(zhuǎn)錄，其反應(yīng)體系主要是參照SYBR Prenix Ex TaqTM Ⅱ（購自日本TakaRa公司）說明書進(jìn)行制備。采用ABI 7500熒光定量PCR儀（購自美國Applied Biosystems公司）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其中PCR擴(kuò)增條件如下：95℃預(yù)變性30 s，95℃變性5 s，60℃ 30 s，40個循環(huán)，采用2-△△Ct公式計算表達(dá)量。③采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清CA153水平：具體操作嚴(yán)格按照CA153檢測試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒購自美國雅培公司，生產(chǎn)批號：2016301437。

1.3 觀察指標(biāo)

分別比較三組血清miR-6861-5p與CA153水平，分析血清miR-6861-5p、CA153水平與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。血清miR-6861-5p相對表達(dá)量正常值范圍為4.4～7.3;血清CA153正常值范圍為4.0～15.6 U/mL。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-6861-5p與CA153指標(biāo)對乳腺癌的診斷效能。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清miR-6861-5p和CA153水平比較

乳腺癌組患者血清miR-6861-5p和CA153水平均高于乳腺良性疾病組與對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）;而乳腺良性疾病組與對照組上述兩項指標(biāo)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P > 0.05）。見表1。

2.2 血清miR-6861-5p水平與乳腺癌患者病理特征關(guān)系分析

Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p水平均分別低于Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）。見表2。

2.3 血清CA153水平與乳腺癌患者病理特征關(guān)系分析

Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清CA153水平均分別低于Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P < 0.05）。見表3。

2.4 血清miR-6861-5p與CA153指標(biāo)對乳腺癌的診斷價值分析

以本研究資料為樣本，其中乳腺癌組83例為陽性樣本，乳腺良性疾病和對照組共160例為陰性樣本。再將miR-6861-5p及CA153兩指標(biāo)檢測數(shù)據(jù)分為若干組段，構(gòu)建ROC分析模型，進(jìn)行乳腺癌診斷價值分析。分析結(jié)果：miR-6861-5p的診斷閾值為7.0，CA153的診斷閾值為16.2 U/mL。在此二閾值處，ROC曲線下面積、敏感度、特異度均在0.7以上或附近，為較高值，提示該二指標(biāo)均有較好的診斷乳腺癌應(yīng)用價值。見表4。ROC曲線見圖1。

再從本研究樣本中隨機(jī)抽樣61例，建立二指標(biāo)聯(lián)合診斷模式（綜合模式），該模式為：當(dāng)二指標(biāo)均高于閾值即判斷為陽性（乳腺癌），均低于閾值則診斷為陰性，一高一低則進(jìn)行復(fù)查。如此獲得了明顯高于該二指標(biāo)單獨(dú)診斷的效果，其敏感度和特異度均明顯升高，可達(dá)0.8以上。見表4。

3 討論

隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的逐漸改變，乳腺癌的發(fā)病率正呈逐年升高趨勢，且發(fā)病人群趨于年輕化[6-8]。乳腺癌發(fā)病早期具有較強(qiáng)的隱匿性，大部分患者一經(jīng)確診便是中晚期，喪失了手術(shù)根治的最佳時機(jī)，因此，尋找一種有效的診斷方式顯得尤為重要[9-10]。隨著相關(guān)研究的不斷深入，越來越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)miRNAs對基因表達(dá)具有一定的調(diào)控作用，且在細(xì)胞生命活動眾多的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮重要作用，參與了細(xì)胞增殖、分化、凋亡、血管生成以及免疫反應(yīng)等一系列過程[11-12]。另有研究報道顯示，miRNAs在血清等多種體液中均存在不同程度的表達(dá)，且表達(dá)量相對穩(wěn)定，不易被分解，可多次凍融以及長期保存，因此具有作為臨床腫瘤標(biāo)志物的特性，是目前臨床研究的熱點(diǎn)[13-14]。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組患者血清miR-6861-5p與CA153水平均高于乳腺良性疾病組與對照組（P < 0.05），而乳腺良性疾病組與對照組上述兩項指標(biāo)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。這提示了乳腺癌患者血清miR-6861-5p與CA153均存在明顯高表達(dá)狀態(tài)。分析原因，主要可能是因為兩者均參與到了乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程。其中miR-6861-5p定位于人類染色體12q24.13，迄今為止尚未見其功能的相關(guān)報道，但已有研究學(xué)者在日本人群中篩查發(fā)現(xiàn)miR-6861-5p在乳腺癌患者血清中的表達(dá)明顯高于健康女性[15-16]。CA153屬于腫瘤相關(guān)抗原之一，主要位于腫瘤細(xì)胞表面，當(dāng)細(xì)胞骨架被破壞時，細(xì)胞表面抗原會凋落，從而導(dǎo)致血清CA153水平顯著升高[17-18]。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p與CA153水平均分別低于Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P < 0.05）。這提示病情越重的患者血清miR-6861-5p與CA153水平也相對越高。筆者考慮可能是因為上述兩種指標(biāo)在乳腺癌患者機(jī)體中的反饋屬于正向性，隨著患者病情的加重，二者均通過機(jī)體中的Rho等信號通路產(chǎn)生了更加明顯的生化調(diào)節(jié)，最終表現(xiàn)出了更高的表達(dá)水平[19-20]。因此，在臨床工作中可通過聯(lián)合檢測上述兩項指標(biāo)，從而有效判斷乳腺癌患者病情嚴(yán)重程度，進(jìn)一步為臨床治療方案的制訂提供指導(dǎo)作用，最終達(dá)到改善患者預(yù)后的目的。

最后，本研究顯示，miR-6861-5p聯(lián)合CA153檢測診斷乳腺癌的敏感度、特異度均高于miR-6861-5p與CA153水平單獨(dú)檢測。這提示了血清miR-6861-5p與CA153水平的聯(lián)合檢測應(yīng)用于乳腺癌中具有較高的診斷效能，可作為臨床上診斷乳腺癌的有效手段之一。這主要是因為二者的聯(lián)合檢測發(fā)揮了較好的協(xié)同性和彌補(bǔ)性，有效降低了單項檢測時的漏診或誤診的發(fā)生，因此也更具診斷價值。

綜上所述，血清miR-6861-5p聯(lián)合CA153檢測應(yīng)用于乳腺癌患者中具有較高的診斷效能，可顯著降低臨床漏診率與誤診率，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2018-10-25? 本文編輯：封? ?華）