早期應(yīng)用阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力大鼠病情的干預(yù)作用

姚志成 遲壽軍 劉 峻

（1 遼寧省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110847；3 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧 沈陽(yáng) 110032）

重癥肌無(wú)力主要累及神經(jīng)肌肉接頭突觸后膜上乙酰膽堿受體，由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)，補(bǔ)體參與的自身免疫性疾病，表現(xiàn)為肌肉終板功能障礙和隨之易疲勞的肌肉無(wú)力[1]。本實(shí)驗(yàn)旨在比較一線用藥強(qiáng)的松與不同時(shí)期應(yīng)用阿托伐他汀對(duì)EAMG大鼠的治療效果，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)健康雌性6～8周齡Lewis大鼠50只，體質(zhì)量160～180 g，購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院。于（22±2） ℃飼養(yǎng)，亮/暗周期12 h/12 h，自由進(jìn)食飲水，7 d適應(yīng)性飼養(yǎng)后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑：AchRα1 129～145多肽片段；大鼠AchR-ab ELISA檢測(cè)試劑盒；完全弗氏佐劑、不完全弗氏佐劑、磷酸緩沖液，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；GS-15R低溫高速離心機(jī)。

1.1.3 藥物：強(qiáng)的松片(規(guī)格5毫克/片)，阿托伐他汀片(規(guī)格10毫克/片)。

1.2 方法：大鼠給藥劑量根據(jù)體表面積折算，約等于成人等效劑量的6～8倍，所以強(qiáng)的松組按照5.4 mg/（kg·d）的劑量溶解于純水灌胃4周；阿托伐他汀晚期干預(yù)組按照1 mg/（kg·d）溶解于純水灌胃4周，灌胃給藥體積為1 mL/100 g，早期干預(yù)組大鼠自初次免疫后10 d開(kāi)始使用上述相同濃度阿托伐他汀溶液灌胃，每日1次至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。模型對(duì)照組每日給予生理鹽水灌胃，空白組例行抓握觀察一般情況不作處理。進(jìn)行第一次免疫當(dāng)天，所有大鼠稱重記錄體質(zhì)量情況，之后每周監(jiān)測(cè)2次并做記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用（±s）表示。對(duì)各組數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 造模后大鼠的評(píng)估和體質(zhì)量情況，見(jiàn)表1。

表1 治療前后各組大鼠的臨床Lennon評(píng)分比較（±s）

表1 治療前后各組大鼠的臨床Lennon評(píng)分比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＞0.05，*P＜0.05；與強(qiáng)的松組比較，●P＞0.05

組別 動(dòng)物數(shù) 治療前 治療后正常組 10 0.0±0.0 0.0±0.0 EAMG模型組 8 1.7±0.3△ 1.2±0.4強(qiáng)的松組 10 1.8±0.2△ 0.9±0.2*阿托伐他汀后期干預(yù)組 9 1.7±0.5△ 1.3±0.3▲阿托伐他汀早期干預(yù)組 10 1.0±0.4△ 0.8±0.3*●

2.2 血清AChR-Ab檢測(cè)：造模結(jié)束時(shí)，各組與空白組比較，AChR-Ab含量含量均顯著升高；與模型組相比，早期干預(yù)組AChR-Ab含量含量較低，強(qiáng)的松組用藥4周后，AChR-Ab含量含量與治療前相比顯著降低；早期干預(yù)組與前次檢測(cè)相比，AChR-Ab含量含量有所下降（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 不同治療后大鼠血清各因子水平情況，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清細(xì)胞因子水平（n=10，±s，ng/L）

表2 各組大鼠血清細(xì)胞因子水平（n=10，±s，ng/L）

注：①與空白對(duì)照組相比，P＜0.05；②與模型組相比，P＜0.05；③與模型組相比，P＞0.05

組別 n IFN-γ IL-2 IL-4 IL-17 TGF-β空白對(duì)照組 10 648.3±24.8 516.1±75.2 30.9±2.0 39±1.8 98.8±5.0 EAMG模型組 8 798.5±6.7① 668.3±29.5① 48.0±3.3① 55±1.9① 89±4.5①?gòu)?qiáng)的松組 10 730.5±23.5①② 539±33.5①② 34.5±1.8①② 46.3±1.9①② 100±4.5①②阿托伐他汀后期干預(yù)組 9 762.5±7.3③ 657±31.1③ 46.7±3.5③ 49.6±3.3③ 83±5.0③阿托伐他汀早期干預(yù)組 10 689.5±20.12①② 539.6±32①② 40.8±2.3①② 45.7±2.8①② 99.5±3.0①②

3 討 論

人類自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，MG亦是如此，人體體液及細(xì)胞免疫均在其致病過(guò)程中發(fā)揮了作用，多種抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子等參與了發(fā)病過(guò)程，MG具體的發(fā)病機(jī)制仍處于研究階段，許多關(guān)鍵因素仍不為人所知[2-3]。本實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比模型組大鼠血清AChR-Ab含量顯著增高（P＜0.05），肌無(wú)力樣改變，體質(zhì)量進(jìn)行性下降，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中免疫動(dòng)物所用的AchRα1129～145多肽片段具備高度免疫原性可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)早期干預(yù)組確有控制EAMG大鼠MG癥狀的作用，同時(shí)組內(nèi)大鼠血清IL-4升高，其作用機(jī)制可能是他汀類藥物既可以抑制Th1細(xì)胞因子又可以促進(jìn)Th2細(xì)胞因子的生成，并且其在機(jī)體內(nèi)的分解伴有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子-6的磷酸化，而磷酸化的STAT6參與了分泌IL-4的Th2細(xì)胞的分化，從而使得IL-4水平上升，降低血清AChR Ab水平，緩解EAMG大鼠的臨床癥狀。